荷花粉、白提取物银纳米颗粒的细胞外合成、表征及抑菌效果。

摘要

利用荷花白、粉花提取物合成银纳米颗粒，并评价其对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌效果。方法:用10-3M AgNO3溶液合成纳米银。用紫外-可见分光光度法和扫描电镜对纳米颗粒进行了表征。采用圆盘扩散法测定其抑菌活性。结果:SEM分析表明，该颗粒平均粒径为60 nm，呈球形。此外，银纳米颗粒对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌表现出抗菌活性。研究了该生物还原法稳定合成纳米银。结论:本研究揭示了以莲心银为原料合成的纳米银可作为天然、可再生、低成本的生物还原剂，在常温下可在水溶液中产生金属纳米结构，避免了有害有毒溶剂的存在。

关键字

抗菌活性，细胞外合成，莲属椰子，纳米银颗粒

简介

近年来，金属纳米颗粒的研究和开发取得了显著进展，利用其独特的光学、磁性、电子、催化和其他物理化学性质，在能源、环境、生物医学和化学工程等广泛的实际和潜在应用中[1，2，3.］．由于纳米颗粒在基因治疗、癌症治疗、药物输送等医学领域有着巨大的应用，医学界也很容易接受植物界对纳米颗粒的合成，并欢迎被子植物合成无污染、环境可接受、对人体健康安全的纳米颗粒[4］．在各种金属纳米颗粒中，银纳米颗粒日益引起人们的兴趣，因为与其他重金属相比，银表现出强大的抗菌性能，对人和动物的毒性较低[5，6］．银已被证明具有消毒作用，从传统药物到烹饪物品都有银的应用。此外，一些银盐及其衍生物在商业上用作抗菌剂[7］．在小浓度下，银对人体细胞是安全的，但对细菌和病毒是致命的。8］．

纳米银的生物合成是化学和物理方法的另一种选择，因为它具有成本效益和环境友好性。它不涉及使用高压、能源、温度和有毒化学品[9］．由于不同致病菌引起的传染病的爆发和抗生素耐药性的发展，制药公司和研究人员正在寻找新的抗菌剂[10］．最近有报道利用太阳晒干纳米银的光合作用樟树叶子(11]，Phyllanthin提取，并从纯化的化合物中提取Lawsonia inermis的叶子,Azadirachta indica［12，13］．

的莲属椰子,(荷花)，印度和越南的国花，水生多年生植物，单生，大，芳香，白色或玫瑰色，属，莲科．它是一种重要的民间药用植物，可以预防癌症的发展[14］．它还显示出抗菌、抗病毒和抗血小板活性的功效[15，16］．对其进行抗菌评价，研制新型药物克服耐药性和不良反应。目前的研究揭示了粉红色和白色的效率n .椰子花提取物减少银离子(Ag⁺)，以及在AgNO水溶液中形成银纳米颗粒_3.复杂。

材料与方法

植物材料和提取物的制备

鲜花n .椰子(粉红色和白色)采集自哥印拜陀地区，经印度哥印拜陀南部区域中心印度植物调查局(BSI)(编号:BSI/SC/5/23/09-10/Tech.279)鉴定。首先，花瓣要用无菌水清洗、清洗和称重。用5.7%的水稀释粉色和白色n .椰子以花提取物为原料，用标准方法对纳米银进行初步鉴定。将花瓣(2.85 gm)与50 ml无菌蒸馏水细压，在55◦- 65◦C间煮沸5分钟，得到5.7%的稀释水。最后用标准过滤法对提取液进行过滤。

纳米银的合成

AgNO_3.（10³M)溶解0.016 gm AgNO制得溶液_3.放入100毫升蒸馏水中，并在黑暗条件下储存，以避免Ag氧化⁺离子。5:95的水稀释花提取物在10³M AgNO_3.是由95毫升的10³M AgNO_3.将5毫升过滤过的花提取物倒入标准烧瓶中，不断搅拌，观察颜色变化。标准瓶在室温下孵育24 - 48小时。溶液的颜色由黄色变为深棕色，表明银纳米粒子被合成。

紫外-可见光谱分析

采用UV159 (Elico)紫外可见分光光度计进行紫外可见光谱分析。纯银离子的还原是通过测量反应介质的紫外-可见光谱在48小时孵育使用样品的一小部分，与参考样品在430 nm。

银纳米颗粒的SEM和EDX分析

利用扫描电子显微镜(SEM)对纳米银进行了表征。样品干燥后再进行扫描电镜分析。5比95的水稀释花提取物在10³M AgNO_3.以18000转/分的速度离心25分钟。使用石油醚收集颗粒并蒸发。将纯化的银纳米颗粒冷冻干燥后，利用日立S-4500扫描电镜仪和能量色散x射线显微分析光谱(EDX)对合成银纳米颗粒的结构、组成和平均尺寸进行了分析。

合成银纳米颗粒的抗菌活性

用标准法从反应培养基中等量稀释0.1 ml和0.3 ml的水进行抑菌活性的筛选。银纳米颗粒的抑菌性测定n .椰子花提取物对各种致病菌如大肠杆菌，金黄色葡萄球菌,枯草芽孢杆菌在营养琼脂培养基上采用圆盘扩散法。用不同浓度的花提取物浸渍无菌滤纸盘(Whatmann 1号)。以氯霉素(2μg/片)为标准抗生素。然后在37◦C下孵育24小时，以确定银纳米颗粒(mm)的抑制区域。

结果

紫外可见光谱结果

还原银纳米颗粒的形成和稳定性暴露于花提取物n .椰子，经紫外可见光谱分析监测，其在水溶液中呈现淡黄褐色(图1)．在本研究中合成的银纳米颗粒在反应介质中形成，在428.4 nm处对粉红色的吸收最大n .椰子白色为425.6 nmn .椰子花提取物分别为2.493和3.906 (图2)．早期的研究也显示了类似的结果大戟属植物hirta．粉色和白色的紫外可见光谱分析比较n .椰子，粉色花的波长比白色花的波长大[17］．

银纳米颗粒的sem分析

扫描电镜分析显示其呈相对球形的纳米颗粒，主要存在于5:95水溶液稀释浓度下³M AgNO_3.．本研究形成的银纳米颗粒主要存在于60 ~ 110 nm之间，平均粒径为1 μmn .椰子直径为60- 90nm，粒径为

0.5 μm由白色的花n .椰子（图3)．同样，银纳米颗粒，由茎皮合成

Boswellia ovalifoliolata［18］．的叶子Alium cepa而且Clerodendrum inerme呈球形[19，20.］．SEM分析表明，粉红色的颗粒粒径较大，平均粒径范围较大n .椰子花，与白花相比。研究还表明，合成的纳米颗粒在室温和黑暗条件下可以稳定一个月。

能量色散x射线显微分析谱图

银纳米颗粒的EDX剖面显示为粉红色和白色n .椰子花提取物含有银以及硅、氯、钙等其他成分，(图4)．

抗菌活性

两种花(粉色和白色)提取物的抑菌活性均呈剂量依赖性增强。最大抑制区表现为对大肠杆菌(18毫米)和B.subtilis(17毫米)和中等抑制区(15毫米)S.aureus（表1)．与革兰氏阳性细菌相比，革兰氏阴性细菌对花卉提取物更敏感，这与之前的报道相矛盾，即植物提取物对革兰氏阴性细菌比革兰氏阳性细菌更有效(图5)．Ag和Ag复合材料对革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌均有效，而常规抗生素的疗效因细菌种类而异[21］．因此，生产纳米银颗粒方面的进展使银作为强效杀菌剂的使用有可能重新出现。[22，23］．

讨论

本研究主要研究了纳米银的合成及其在粉白花提取物中的抑菌作用莲属椰子．花提取物呈黄褐色，证实了纳米银的存在。实验结果比较表明，在粉色莲心中合成的银纳米颗粒平均尺寸约为1 μm，高于白色莲心中合成的银纳米颗粒n .椰子0.5 μm。纳米技术领域的一个关键需求是金属纳米颗粒的发展。在这里，我们报道了一种简单的低成本的生物方法，通过生物还原硝酸银溶液制备稳定的银纳米颗粒。银纳米粒子n .椰子具有有效的抗菌性能大肠杆菌而且B.subtilis．因此，本研究强调利用药用植物合成具有强抗菌作用的银纳米颗粒，对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均有抗菌作用。这些结果揭示了花提取物作为生产广谱抗菌药物的潜在来源的能力。

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