和评论:生药学和植物化雷竞技苹果下载学》杂志上的研究表明
菜单e-ISSN: 2321 - 6182 p-ISSN: 2347 - 2332
e-ISSN: 2321 - 6182 p-ISSN: 2347 - 2332
Tanwi Choche, Shubhnagee Shende*,帕拉Kadu
制药学,博士Bhanuben Nanavati药学院,Vileparle,孟买- 56,印度马哈拉施特拉邦
收到:10/12/2013;修改后:24/12/2013;接受:30/12/2013
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芦荟是最古老的药用植物之一,但现在意识到它的许多活性组分可能以不同的方式处理不同的配方。研究自1986年审查在很大程度上支持治疗主张在前面的论文有科学证据证明芦荟含有成分,加速伤口愈合,减少炎症,疼痛和瘙痒。它有一个出色的保湿剂和渗透。最近被证明刺激人体的免疫系统,也有抗糖尿病作用。有许多生物活性化合物inaloe但有需要一个适当的和标准的方法从植物原料中提取这些活性成分。随着传统的方法,建立了许多新方法,但到目前为止没有一个方法被认为是标准从芦荟中提取生物活性化合物。一些有信誉的供应商生产稳定芦荟凝胶用作本身配方和最终可能走向孤立和提供验证活性成分dosable数量。本文的目的是讨论不同的萃取技术提取生物活性化合物索芦荟米勒。
索芦荟,,,乙酰化甘露聚糖芦荟素、芦荟大黄素、木质素、类固醇、barbaloin isoaleoresin D
芦荟l .(索芦荟Miller)是百合科家族的一员。超过300种芦荟,芦荟是最被广泛接受的、用于各种医疗、化妆品和营养食品的目的。目前公众对药物中特别感兴趣,或包含组件,自然起源。真正的芦荟植物叫做索芦荟米勒,否则称为库拉索芦荟。芦荟(索芦荟Miller)是一种多年生肉质cactus-like植物,它生长在炎热,干燥的气候条件下。1)这种植物通常被称为“治愈”工厂,两个产品的来源。植物是由细长和尖叶,首先是一个分泌物从削减叶基含有高浓度的蒽醌化合物,当被用作有效的宣泄和漆干抑制咬指甲。第二个产品,芦荟,按从整个叶子和明显粘液凝胶具有不同的假定的药理作用。2从a·维拉L]内凝胶。,where most biological activity has been reported, contains natural polymeric carbohydrates. These natural carbohydrates consist primarily of -(1,4)-linked poly dispersed, highly acetylated Mannans with an average molecular weight of approximately 1000 kDa. The inner leaf gel consists of N98% water, whereas the acetylated Mannan moiety makes up greater than 60% of the solid matter found in the inner leaf after processing by precipitation with 95% alcohol and freeze drying.[3)这个复杂的碳水化合物聚合物材料负责大部分的免疫刺激活性归因于维拉·l .凝胶。(4]
富人凝胶在芦荟植物是由超过75个不同的成分虽然95% - -99%是水。这些具有生物活性的化合物具有不同的药理作用。所示所有成分及其作用表1。
目前的审查这些化学成分的分离芦荟凝胶。有不同的方法描述为不同的组件。
Acemannan
部分作品,乙酰化甘露聚糖刺激巨噬细胞,免疫系统的重要组成部分,负责各种潜在的健康益处。表明,乙酰化甘露聚糖加速伤口愈合。6)生产,乙酰化甘露聚糖免疫代理等干扰素和白介素帮助摧毁病毒、细菌和细胞肿瘤(癌症)。是一个线性多糖,乙酰化甘露聚糖由(1、4)联系mannosyl残留,C2和C3乙酰化和侧链由半乳糖单位C6。aβ-(1,4)-高linkedpolydispersed高度乙酰化甘露聚糖平均分子量约1000 kDa,从内部获得芦荟的叶子。monomeris,乙酰化甘露聚糖的结构如下所示。
图1:[,乙酰化甘露聚糖的结构7]
隔离法
溶剂萃取
提取的acemennan索芦荟是由溶剂萃取的方法包括以下步骤完成的。收集约500通用的芦荟凝胶片.Fill这种凝胶鱼片棉布袋,根据索氏仪器。底部的装置填补溶剂;乙醇(溶于乙醇,乙酰化甘露聚糖)500毫升。持续48小时的提取过程。完成后收集提取和过滤和干燥。体重还干燥后的原油量,测量水提物的数量。将它存储为实验分析。8]
离心分离
在这个方法中叶子从几个plantswere首先可以排除黄色汁液从皮,然后用去离子水清洗。的皮被锋利的刀。polytron Theclear纸浆是均质。Thehomogenized纸浆离心机在3000 rpm (500 g,贝克曼TJ-6) 15分钟。pelletwas收获和命名颗粒即supernatantwas进一步离心机在18000 rpm (25000 g;贝克曼JA-20转子)30分钟,supernatantwas删除并保存。新的颗粒wascollected和命名的第二粒。两个小球werewashed一旦与去离子水。,resuspending in deionized water and pelleted down at therespective centrifugation conditions. Pellets andsupernatant were then lyophilized (Centrivap, Labconco). The drying process was stopped whenvacuum level reached below 50 Am Hg. Theweight of dried materials was determined immediately after the drying process.The supernatant was also subjected to alcoholprecipitation by mixing with 3 volumes of 100%ethanol. The resulting precipitates were collected bycentrifugation and re-dissolved in water before being lyophilized as described above. Acemannan Hydrogel was similarly fractionedby centrifugation. It was first dissolved in water at 2mg/ml. The first centrifugation was performed at 1000rpm (180g) for 15 min. The pellets were washedwith deionized water as above.[9]
净化acemannan
有不同的净化过程。,乙酰化甘露聚糖每一个详细描述如下。
通过凝胶渗透净化进行,乙酰化甘露聚糖色谱法(10透析的洗脱分数包含一列上进行,乙酰化甘露聚糖(100厘米£1厘米)的Sephacryl s - 400 -人力资源的流量16毫升/小时。分数被溶解在2毫升,50 Mm磷酸钾缓冲,pH值6.5,包含0.2 M氯化钠。分数(2毫升)收集和整除(20毫升)化验phenol-sulphuric酸为碳水化合物的方法。包含净化是,乙酰化甘露聚糖结合适当的分数,透析,集中,和一个整除冷冻乾了糖和甲基化分析。剩下的材料储存在2200 c。分析和高速逆流色谱法已成功用于制备羟基蒽醌的分离和纯化芦荟使用pH-modulated逐步洗脱。
净化的交会,乙酰化甘露聚糖和ethanolic降水
整除的200毫升fi ltered上层清液在浴室解冻(IKA-Werk、德国)37ºC,然后他们应用于列挤满了300毫升的琼脂糖®CL-4B凝胶。运行缓冲溶液为0.2 M氯化钠,pH值7;流使用30毫升/分钟。在206 nm色谱分离过程的监控。对于每个色谱运行,分数来自第一个峰值(对应),乙酰化甘露聚糖收集量从1到1.5 l .收集洗脱液,添加95% (v / v)乙醇,乙醇:洗出液4:1的比例混合,然后一直在-20°C 6 h。被离心分离获得的沉淀在6700 x g 20分钟,沉积物是70% (v / v)乙醇洗两次,真空干燥。干燥的材料储存在-20°C 50毫升康宁管直到进一步的再悬浮。进行了再悬浮在磷酸盐缓冲溶液(1.25毫克/毫升不2阿宝4h·22O和1.4毫克/毫升Na2HPO4h·22O, pH值7.0通过搅拌,静,直到多糖resuspended完全。最后,这种材料与Minisart fi ltered fi lters 5μm(孔隙平均)大小,消除non-resuspended粒子,以这种方式和齐次解。(11]
净化的通过直接沉淀,乙酰化甘露聚糖CTAB ethanolic降水紧随其后
原油ethanolic材料,如上所述,体重的范围从3 - 30 g和resuspended tretaborate钠溶液(0.01 -0.1)。由此产生的解决方案是保持在24ºC在缓慢搅拌20分钟。之后,CTAB溶液添加10%,混合保持在4ºC在缓慢搅拌1 h。沉淀达到通过离心收集在8000 x g 20分钟。合成沉淀,150毫升0.9 CaCl2补充说,混合均质对于获得的总量,添加了4卷的95%乙醇,混合物是保持在-20°C 6 h。8000 x的多糖沉淀被离心分离gfor 20分钟。接下来,两个洗70% (v / v)乙醇,最后材料在真空下被干了。(11]
芦荟素
芦荟素是一种蒽醌配糖体。芦荟素也被称为barbaloin。分子量418,分子式C21H22O9及其chemicalstructure无花果所示。它的IUPAC 8-Dihydroxy-10 - (D-glucopyranosyl) 3 -羟甲基)9 (10 h) -anthracenone。3]这是黄褐色复合估计水平从0.1到0.66%的叶子干燥存在于细胞相邻叶的皮凝胶。它是用作泻药代理维护消化系统治疗便秘通过诱导bowelmovements。(12)一旦摄入,增加在结肠蠕动收缩,引起排便。(14,15]
图2:芦荟素的结构。(36]
隔离法
芦荟叶子从当地托儿所收集。叶子用水洗和皮被移除。内部凝胶报废,切成碎片,太阳能干燥(30 - 45 0 c 3周)和干凝胶粒子收集。干凝胶粒子使用筛子筛选的范围0.42 - -0.841,0.841 - 1.68,1.68 - 3.36和3.36 - 6.73毫米。美国标准的芦荟素样本来自丙烯酰胺进行校准。溶剂用于提取和高效液相色谱法(HPLC)分析的基于“增大化现实”技术和高效液相色谱级s d好环境,印度。(13]
Soxhelt提取
最大可恢复的芦荟素被Soxhelt估计使用甲醇提取。5% (w / w)干凝胶粒子大小的0.42 - 0.841毫米被Soxhelt 200毫升甲醇。提取进行了24小时。从干凝胶样品免费收集最后,储存在冰箱里,用高效液相色谱法进行分析,以确定在每个提取芦荟素的浓度。13]
分批萃取实验
分批提取是在一个完全困惑进行了250毫升硼硅玻璃圆柱容器(ID、7厘米和9厘米高)来估计萃取动力学,分析操作参数的影响。在一个典型的实验中,该船被控干凝胶连同200毫升溶剂。溶剂的体积在所有实验中拍摄200毫升干燥凝胶加载相应的改变。四音调刃的450 3.5厘米直径的涡轮式搅拌器搅拌质量在预定的rpm。所有实验在恒温槽。系统测量精度的温度1 0 c。样本收集在不同的时间间隔的整个过程中提取和分析了高效液相色谱法来估计芦荟素的浓度。在每个试验中,解决方案是过滤和成交量调整初始值,以避免错误的芦荟素的浓度由于蒸发损失。的影响不同极性的溶剂(如甲醇、乙醇、水和异丙醇),搅拌速度(300600900和1200 rpm),颗粒大小(0.42 - -0.841,0.841 - 1.68,1.68 - 3.36,3.36 - -6.73毫米),固体加载(2.5%,5%,7.5%,10%)和温度(30 0 c, 40 0 c, 50 0 c, 600 c, 65 0 c)进行了选择最优条件分批提取。13]
超声波辅助萃取法(UAE)
它加剧提取过程的动力学作用于界面区域,通过粒子的衰变。与分批萃取相比,它提高了提取工艺减少提取时间和温度,同时增加提取的速度。阿联酋的技术被用来获得主动原则从草本植物芦荟芦荟素。甲醇被选为有机溶剂,发现最大提取芦荟素。主动原则芦荟素量化使用水的高效液相色谱系统。最佳提取条件被估计为提取温度,提取时间和干凝胶加载。芦荟素的有效粒子内扩散系数在甲醇溶剂中使用非稳定态估计质量扩散模型,并使用Arhenius方程扩散活化能分别。17]
芦荟素的识别
芦荟素的识别可以通过不同的色谱技术。l . Azaroualet。人使用这个技术,它是通过分离化合物的保留时间和紫外光谱的比较以及通过coelution唯一可用的真实标准(芦荟素)。此外HPLC-MS分析也进行了。一个Finnigan LCQ-coupled质系统用于HPLC-MS分析提取。该设备配备一个光谱系统2000模型梯度泵和一个质量检测器(模型LCQ),由一个电喷射接口和离子阱质量分析器。Xcalibur, 1.2版本的软件用于设备的控制,和数据的采集和处理。进样体积是25μL。接口条件:积极的电离,毛细管温度:220。C,喷涂电压:20 kV,毛细管电压:.5V,鞘气体流量:80(任意单元),和辅助气体流量:10(任意单位)。API-MS光谱中获得50.400 m / z的范围。色谱法采用的是梯度洗脱,用酸化水(2%乙酸,溶剂)和酸化甲醇(2%乙酸溶剂B),在0.2毫升/分钟的流量。 The gradient employed was as follows: 0 min, 0% B; 1min, 0% B; 5min, 30% B; 20 min, 30% B; 30 min, 50% B; 40 min, 100% B. A C-18 column (Luna 5 μm, 150 × 3 mm, Phenomenex) was used for the chromatographic separation. [30.]
芦荟大黄素
芦荟中芦荟emodinis ananthraquinone存在乳胶、芦荟植物的渗出物。(10]芦荟大黄素能inhibitcell增长在一些肿瘤细胞,包括人类肺癌,18肝癌,(19和白血病celllines。20.芦荟多糖存在之一,,,乙酰化甘露聚糖能力恢复andboost闻名免疫系统通过刺激生产巨噬细胞和改进的活动TLymphocytesby高达50%。
图3:大黄素的结构(16]
隔离法
新鲜芦荟verabarbadensis米勒从医疗花园收集树叶。树叶是30至50厘米的长度,对应于4岁的植物。整个叶子用蒸馏水洗净,把污垢从无余。峰值,放置在他们的利润,被移除之前切叶。表皮(orskin)使用scalpel-shaped刀仔细分开的实质。至极wereextensively用蒸馏水洗净,去除表面的分泌物。新鲜的芦荟片werestored不超过1小时在180 c。16]
脱水
新鲜的芦荟片被丁0.5毫米3块,在干热灭菌器和脱水。温度是30 0 C (30 d样本),40°C (40 dsample), 50°C (50 d样本),60°C (60 dsample), 70°C (70 d样本)和80°C (80 d样本)。细胞壁多糖主要由ofpectic物质,纤维素和半纤维素。纤维素是第二inabundance细胞壁聚合物类型。干的最终水分含量实质立方体是1.5克/ 100克水干物质(d.m.)。此外,芦荟鱼片是冻干(FD样本),和作为参考。(21]
Identication大黄素的
大黄素的识别通过紫外分光光度法测定的分析:图是绘制吸光度和辐射波长之间的关系。检测范围是-432到222。获得的三个吸收最大值是在223年,256年、283年的波长。紫外分析发现大黄素的结构从脱水至极。大黄素的结构揭示了蒽醌环上有三个羟基和两个ketonicgroups。三羟基附着在1、3和8个位置。(16]
木质素
伍迪物质,有助于芦荟凝胶的渗透。
隔离法
木质素和Klason重量分析地决定木质素(酒精insolubleresidue)播出被分散在72%硫酸在室温下3小时然后稀释1 M硫酸andheated到1000 c为2.5小时。不溶性物质被过滤(烧结没有恢复。2)和washedthoroughly用热水(900 C),直到酸免费干燥前一夜之间在105°C。Klasonlignin残渣重量记录,一夜之间,火山灰内容被重量分析地由加热在550°C,碳水化合物分析(22为中性糖。糖被acidhydrolysis释放残留。23)磷酸铁和比色测定方法的分析,维生素c wasdetermined通过体积的方法分析,识别是通过红外光谱,乙酰化甘露聚糖.Fouriertransformed红外(FTIR)光谱的分辨率得到3厘米2后,准备KBr disccontaining 2毫克的纯化聚合物从冷冻乾和脱水,乙酰化甘露聚糖芦荟至极。单光束横向每个样本比例的单跨梁相应的背景。等效样本不同的实验运行了相同的光谱在所有情况下。(24]
图4:isoaleoresin D的结构
Isoaleoresin D
提取isoaleoresin D
芦荟粉(25.0 g)和500毫升的丙酮提取声波降解法为30分钟,然后离心机。减压下的上层清液集中在60旋转蒸发器。泥浆在真空干燥60。提取(16.3 g)获得和存储在低于10的高速逆流色谱(HSCCC)分离和隔离。丙酮提取物(513.0毫克)由甲醇溶解,转移到10毫升容量瓶。解决方案与4倍稀释的甲醇和浓度为12.8 mg / mL。解决方案0.45μm过滤膜过滤前注入高效液相色谱法。(26]
分离和纯化
组成的两相的溶剂系统hexaneethyl acetate-acetone-water(0.2︰5︰1.5︰5)申请HSCCC分离和隔离。分液漏斗中的溶剂混合物完全平衡在环境温度。这两个阶段被声波降解法分离和脱气。HSCCC的制备列完全充满了降低水相为固定相,洗提是在tail-to-head模式下进行的。然后上层有机相注入1.0毫升/分钟的流量装置旋转时在840 r / min。芦荟提取物与较低的水相溶解,的浓度为85.5 mg / mL。流动相后面前出现,系统达到了水动力平衡,样品溶液注入到列(4.5毫升)。固定相的retentionwas 79.1%。废水监测在254 nm和分数间隔的收集5分钟。HSCCC分离的总时间是320分钟,分数是根据HSCCC的色谱和高效液相色谱法。作为结果,分数1收集从99年到144分钟,虽然分数2收集从152年到250分钟。26]
同化制剂
菜油甾醇,β-sitosterol和胆固醇。36]
图6:结构的三萜和固醇芦荟(25]
菜油甾醇是植物甾醇的化学结构类似于胆固醇。合成代谢类固醇去氢睾酮的前体是常用的兽医药品诱导生长在牛28]。发现有利于降低检测和胆固醇。人们认为菜油甾醇分子与胆固醇竞争,从而减少胆固醇的吸收在人类肠道(29日]。胆固醇、菜油甾醇、β-sitosterol和羽扇豆醇中发现了大量在脂质分数。一个未知的(s)生物碱使用Dragendorff试剂检测。
提取和分离
由于有报道称切断了芦荟叶子迅速失去其药用价值所使用的材料是新鲜或冻干并存储在-15 c . a . barbadensis叶子(相当于35克干物质)浸渍和提取water-acetone与丙酮(1:1),然后在室温下。合并后的提取物(2:1)集中在旋转蒸发器(35 C)和acetone-free残渣与乙醚提取三次(每次250毫升)。脂质被送往干燥阶段和残渣与10%氢氧化钾在50%乙醇回流(50 ml) 3人力资源。这种水解提取与乙醚和集中有机相(0.25 g)在硅胶色谱柱(1.5×35厘米),筛选了苯:乙醚(宣告),和收集10毫升分数。结果20分数被薄层色谱(TLC)化验(见色谱section74:硅胶、溶剂4、显色试剂b)和重组给三萜、甾醇分数。水相(250毫升)集中在减压下,由离心澄清,先后通过Dowex-50 W(50 - 100目,×8 H +)(3.5×35厘米),安伯来特ira - 400(50 - 100目,×8,哦)(4×40厘米)列。溶液洗出液被送往干燥和构成了“中立的分数。”的"cationic fraction" was obtained by treatment of the cation exchange resin with 2N NH4OH.[27]
蒸汽蒸馏
艰难的外层部分组成的表皮,表皮和叶肉被撤成熟的植物的叶子从德克萨斯州。绿色的外层部分和无色内部以及“茎”(后剩余部分植物地上树叶被删除)和根蒸汽蒸馏,分别。蒸馏是任只要冷凝有明确的气味;这是大约5小时。的冷凝蒸汽蒸馏与氯化钠饱和,与乙醚提取,干燥无水硫酸钠和体积的乙醚减少使用氮气流。27]
色谱和质谱
预镀硅胶板用于薄层色谱。溶剂系统:1)1-butanol: aceticacid:水(12:3:5);2)苯酚:水(3:1);3)1-butanol:丙酮:水(7:2:1);4)苯:二乙醚(宣告);5)氯仿:甲醇(5:1);6)己烷:丙酮乙醇(40:10:4)。溶剂1和2中使用,以便开发二维薄层色谱法(二维薄层色谱)。茚三酮显色试剂是:0.1%丙酮;b) 1%硫酸高铈Ce (SO4) 2 n H2 SO4 2; c) 0.05% Rhodamine 6G in acetone; d) Dragendorff's reagent (25). GLC was performed using a modified Barber Colman Model 5000 gas chromatograph with flame ionization detector (30) and He as carrier gas. The following columns were used: I) 3 m × 4 mm glass column packed with 4% OV-101 on 100-110 mesh Anakrom ABS; II) 2 m × 4 mm glass column packed with 3% SE-30 on 80-100 mesh Chromosorb W (HP); III) 1.5 m × 4 mm glass column packed with 3% OV-25 on 80-100 mesh Chromosorb W (HP). A prototype of the LKB-9000 was used for GLC-MS (26). A Beckman amino acid analyzer, Model 120C (AAA), was utilized for quantitative determination.[27]
考试的分数
阳离子分数
氨基酸在这个分数是由二维薄层色谱识别和量化AAA,结合地。谷氨酰胺和天冬酰胺是由测量的增加父母酸水解后(1 n盐酸/ 3人力资源在N2)。中性的分数。干整除(10)的这个分数是trimethylsilylated (TMS)。为了避免尾矿,试剂被移除之前相关与氯仿萃取。列我习惯了等温地在190 C,流量50毫升/分钟。山峰被确定与标准相比D-mannose(峰值)和葡萄糖(两座山峰)。游离糖的结果证实了TLC(硅胶、溶剂3、显色试剂b)。两TMS-sugars决心(摩尔探测器常数的实验发现1.0)是通过使用α-D-xylose作为内部标准。峰面积计算三角(保留时间相对于TMS-α-D-xylose: TMS-α-D-mannose 1.38;TMS-α-D-glucose 1.78; TMS-β-D-glucose 2.35).
样品的透明凝胶状部分芦荟叶已被释放的所有绿色材料是冻干和糖进行了分析。冻干样品在2 n硫酸水解四个人力资源在100 c .己醣胺是分开的中性糖Dowex H +列和中性糖的方法测定Lee McKelvy,朗。27]
蒸汽蒸馏
混合凝胶从蒸馏期间几乎无色一个很深的粉红色。颜色变化并不是由于pH值的变化,pH值保持在5.0在蒸馏。然后蒸馏混合物是由酸性pH值1.0。aciddistillation后,凝胶是由基本的含水10%氢氧化钠和蒸馏是持续的。凝胶变得非常暗的颜色,似乎是部分消化的基础,而馏分油烧木头的气味相似。Dragendorff的积极反应表明,芦荟包含至少一个生物碱。反复尝试提取材料,给Dragendorff的但nopositive结果阳性反应。喷洒Dragendorff试剂后,有些化合物存在于甲醇提取物或二氯甲烷提取物在原点的薄层色谱板(溶剂5和6)显示缓慢发展蓝色的颜色。这可能意味着,芦荟发展一种光敏化合物时喷洒Dragendorff试剂或它可能包含一个复杂的生物碱,蒸馏后释放。
三萜分数
分数3到5被制备色谱仪TLC(硅胶、溶剂4、显色试剂b)。乐队与射频0.53筛选了乙醚;这给了12毫克的混合物,主要成分(96%)被确认为羽扇豆醇通过NMR和GLC-MS(列第三,操作等温地在220°C,流量30毫升/分钟)。主要的质谱碎片同意标准值观察和报道。(30.,31日)NMR谱尤其信息对异丙烯基侧链在环大肠甲基c29出现作为一个单线态在δ1.66。17]在δ4.56和4.68这两个烯质子共振(Jgem 1.8赫兹)。
甾醇分数
固醇在分数7到15。从甲醇结晶给30毫克的一起的时候一下。132 - 134 c .红外光谱(KBr)在γ马克斯给强吸收带。3400、2930、1460、1375、1060、1025 cm - 1, GLC-MS(列二世等温地在245 C,流量30 ml / min)显示的混合物组成的胆固醇(M + 386)(7%)、菜油甾醇(M + 400)(6%)和(M + 414) (87%)。光谱符合这些标准样品和固醇的碎片出版模式。27]
由于植物生物活性化合物的日益增长的需求,还需要寻找方便的提取方法。是很重要的考虑,这些痛苦都是基于不同的机制和提取效率变化过程虎钳。可用的实验数据也不能满足高产提取。然而,目前缺乏一致性和产量等问题似乎掩盖了潜在的芦荟植物真正健康的好处。因此,这些生物活性化合物的增加经济意义可能导致在未来找到更复杂的提取方法。
