突尼斯葱籽提取物的脂肪酸组成及对敏感和耐多药细菌的抑菌活性

穆罕默德Derbali^1＊阿默尔·埃莱西²， Imed Cheraief^3.以及Mahjoub Aouni¹

¹突尼斯蒙纳斯蒂尔药学院传染病和生物活性物质实验室

²突尼斯莫纳斯蒂尔大学药学院生药学实验室

^3.突尼斯蒙纳斯提尔大学医学院生物化学实验室

通讯作者:: 穆罕默德Derbali
传染病和生物活性物质实验室
突尼斯莫纳斯蒂尔药学院
电话:+ 216 97571180。
电子邮件: (电子邮件保护)

收到了31/03/2016;接受06/04/2016;发表14/04/2016

摘要

目的:研究葱籽油的提取、脂肪酸鉴定及其抑菌活性。方法:采用甲醇(MetOH)索氏提取法，采用火焰离子化检测器(GC-FID)气相色谱法测定种子油的脂肪酸谱。采用圆盘扩散法和平板微量稀释法测定其抑菌活性。结果:提取得率为24.86±0.98 (V/W %)。种子提取物中亚油酸(C18:2，±70.8%)、油酸(C18:1, 20.14%)和棕榈酸(C16，±4.96%)是cepa种子油中的主要脂肪酸。对参比菌和临床分离病原菌进行抑菌潜力检测。结论:cepa是一种具有较高不饱和脂肪酸含量和抑菌潜力的油料作物。cepa籽油的营养和抗生素双重作用证明了其在食品和制药应用中的重要性。

关键字

葱属植物cepa，种子，脂肪酸，GC-FID，抗菌活性，多药耐药菌。

简介

植物种子油有多种用途，用于从化妆品到烹饪的各个领域。种子油越来越重要，因为研究证明它们是生育酚和多酚的来源[1-3.]，以抗氧化剂而闻名[4]和抗炎能力[5］．众所周知，种子油富含脂肪酸。多不饱和酸如亚油酸是人体代谢所必需的，因为缺乏负责其生物合成的酶[6］．多不饱和脂肪酸在促进心血管健康、增强抗肿瘤活性方面发挥关键作用[7，8]，预防动脉粥样硬化[9，10］．

洋葱:葱属植物cepa L.是世界上公认的一种食品成分。研究表明，A. cepa参与多种生物活性，如抗氧化潜能[11]，保护肝脏[12]和抗过敏药[13)活动。cepa提取物可有效逆转器官毒性[14]，治疗人类白血病[15］．cepa L.的种子被中国维吾尔族用作民间药材，可改善内脏功能，治疗腹泻、发热、发热、面部和眼部浮肿，促进血液泛滥[16］．本文对cepa籽油的有机溶剂提取、脂肪酸谱测定、主要化合物鉴定及对敏感耐药菌和多药耐药菌的抑菌活性进行了研究。

材料与方法

化学及材料

A. cepa的种子是从我们在突尼斯Sidi Bouzid的Jelma当地的田地中回收的。本研究中使用的所有化学试剂均为分析级(Sigma-Aldrich®90，圣路易斯，密苏里州，美国)，所用试剂均为标准化试剂。

石油开采

种子用高速搅拌机细粉。用索氏萃取器用甲醇萃取4小时，从种子中提取油。固体与溶剂的比例为1:10。然后使用旋转蒸发器将油从溶剂中蒸发出来。

脂肪酸甲酯的合成和GC-FID

fame是按照AOAC所描述的程序编制的[17］．加入内标物(0.1 ml的C17:0, 1 mg/ml)和1 ml的bf3 -醚，在70°C下煮沸30 min后，每个溶剂提取物分别酯化10 mg脂质。FAMEs是从含己烷(1.0 ml)的饱和盐混合物中提取的。FAMEs的干燥，加入酸酐Na2SO4，离心10 min, 3.56 g，然后将上部倒入特定的容器中。FAMEs分析是根据欧盟委员会对惠普GC (Hewlett-Packard, Palo Alto, CA)修改的EEC 2568/91法规进行的，该GC配备了FID和非分流式注入器，设置在270°C。载气为氮气(1ml /min)，用Agilent DB23熔融二氧化硅毛细管柱(长度60 m，内径0.32 mm，膜厚0.25 m)进行洗脱。条件如下:注入器温度270°C;支撑材,280°C;喷油器分流比，1:50;初始柱温130℃; step 1, 6.5°C/min to 170°C; step 2, 2.8°C/min to 215°C and maintained for 12 min; step 3, 40°C/min to 230°C and maintained for 20 min. FAMEs were identified by comparing their relative and absolute retention times to those of authentic cisfatty acid (CFA) and TFA standards [18］．

抗菌活性

微生物

在生物测定中所使用的微生物菌株列于表1．使用不同美国类型培养集(ATCC)参比菌和临床分离的多药耐药菌株。

应变	区域抑制(mm)	麦克风(µg / ml)	庆大霉素
革兰氏阴性
Enterobactercloacae耐多药	9,33±0.57	500	R
大肠杆菌ATCC25922	12.66±0.57	250	24
大肠杆菌耐多药	12.33±0.57	250	24
Klebsiellapneumoniae耐多药	14±1	250	R
变形杆菌耐多药	10,33±0.57	500	19
Pseudomonasaeruginosa写明ATCC 27853	10.66±0.57	500	20.
铜绿假单胞菌耐多药	11±1	500	20.
革兰氏阳性
金黄色葡萄球菌写明ATCC 25923	18,33±0.57	125	26
金黄色葡萄球菌耐多药	18±1	125	26
葡萄球菌epidermidisATCC12228	14,33±0.57	250	25
Streptococcuspseudopneumonaie耐多药	14±1	250	24
芽孢杆菌subtilus写明ATCC 6633	20.66±0.57	125	28
Enterococcusfaecalis写明ATCC 29212	16±1	125	17

注意:MDR:多重耐药，MIC:最小抑菌浓度，R:庆大霉素耐药。

表1:葱籽提取物的区域抑制作用及MIC。

磁盘扩散分析

抗菌活性采用圆盘扩散法进行[19］．用20ml无菌Mueller-Hinton琼脂制备培养皿[20.]用于细菌。将试验培养物涂抹在固化的培养基上，晾干10 min。将cepa籽油用10%二甲基亚砜(DMSO)稀释，每片加20 μl (1 mg /片)。以庆大霉素(30 μg)片为阳性对照。将加载的圆盘放置在介质表面，在室温下放置30分钟，进行化合物扩散。培养皿在37°C孵育。24小时后，抑制区以毫米为单位记录。

最低抑菌浓度的测定

通过肉汤稀释法(使用96孔微孔板进行微量稀释)测量防止可见细菌生长的最低抑制浓度[21］．用10% DMSO溶解制得提取液原液。每种提取物的MIC定义为在37°C孵育18至24小时后抑制细菌生长的最低浓度。

统计分析

所有实验均重复3次，采用单因素方差分析(ANOVA)进行统计学差异分析。采用Duncan多元区间检验，p<0.05为有统计学意义。

结果与讨论

脂肪酸概况

结果显示于表2表明cepa中含有丰富的MUFA和PUFA，可调节脂质[22]以及它们对癫痫发作、认知障碍和海马氧化DNA损伤的保护作用[23尤其是油酸和亚油酸。MUFA和PUFA占脂肪酸总量的92%以上，提供omega-3和omega-6脂肪酸。这些必需脂肪酸应从食物中摄取，因为人体缺乏负责合成脂肪酸的酶[24，25］．事实上，亚油酸是一种必需脂肪酸，整个ω -6脂肪酸家族都是从亚油酸中衍生出来的。这些脂肪酸是细胞膜的重要组成部分，是参与许多生理反应的其他物质的前体。相比之下，棕榈酸被认为是一种致动脉粥样硬化化合物，当大量食用时[26］．

美国没有。	脂肪酸产率(%)
	国家林业局
1.	丁酸C4:0	0.004
2.	己酸C6:0	0.003
3.	Capricacid C10:0	0.006
4.	月桂酸C12:0	0.058
5.	三烯丙酸C13:0	0.002
6.	肉豆蔻酸C14:0	0.052
7.	十五烷基酸C15:0	0.001
8.	棕榈酸C16:0	4.968
9.	人造黄油酸C17:0	0.040
10.	硬脂酸C18:0	1.772
11.	花生酸C20:0	0.213
12.	乙烷乙酸C21:0	0.033
13.	贝尼酸c22:0	0.135
14.	三羧酸C23:0	0.001
	MUFA
15.	肉豆蔻酸C14:1	0.022
16.	十五烷酸C15:1	0.005
18.	棕榈油酸C16:1	0.049
19.	七烯酸C17:1	0.038
20.	油酸C18:1	20.14
21.	疫苗酸C18:1	0.914
22.	二十烷酸C20:1	0.313
23.	芥酸C22:1	0.008
	PUFA
24.	亚油酸C18:2	70.80
25.	α -亚麻酸C18:3	0.080
26.	-亚麻酸C18:3	0.002
27.	二十碳二烯酸C20:2	0.054
28.	二同- γ -亚麻酸C20:3	0.007
29.	二十碳三烯酸C20:3	0.016
30.	花生四烯酸C20:4	0.001
31.	二碳二烯酸C22:2	0.008
32.	二碳二烯酸C22:3	0.051
33.	豆酸C22:4	0.003
34.	二十二碳五烯酸C22:5	0.042
	国家林业局总	7.29
	总MUFA	21.50
	总PUFA	71.21

注:MetOH，甲醇提取物;SFA，饱和脂肪酸;MUFA，单不饱和脂肪酸;多不饱和脂肪酸。

表2:葱籽提取物的脂肪酸组成占总脂肪酸谱的百分比。

抗菌活性

采用抑菌带定量定性评价了甲氧藤种子提取物对多药耐药病原菌的体外抑菌活性，并采用连续微量稀释技术确定了最低抑菌浓度。

根据表1的结果，种子油表现出较强的抑制作用，抑制区直径为9 ~ 20 mm。ATTCC微生物和耐多药病原体的MIC值在125 ~ 500 μg/ml之间。MetOH提取物对革兰氏阴性菌株有较好的抑制作用。金黄色葡萄球菌写明ATCC 25923,金黄色葡萄球菌MDR,芽孢杆菌subtilusMetOH种子提取物对革兰阴性菌影响最大的是ATCC 6633和粪肠球菌ATCC 29212, MIC值为125 μg/ml。大肠杆菌ATCC25922,大肠杆菌耐多药和肺炎克雷伯菌MDR是对MetOH种子提取物影响最大的GRAM阳性菌株，MIC值为250 μg/ml。

上述研究结果与cepa地上部分提取物和挥发油的抑菌活性一致，对cepa MetOH种子提取物的研究是原创的。[27-30.］．这些结果对于抑制作用，特别是对来自突尼斯大学医院临床分离的经测试的耐多药细菌的抑制作用具有高度重要性，因为它们具有潜在的危险和对人类健康的威胁。

结论

本研究结果表明，cepa籽油含有丰富的MUFA和PUFA，对ATTCC菌株和多种耐药病原体具有重要的抑菌活性。综上所述，cepa籽油兼具营养和药用两方面，证明了它作为食品添加剂和食品防腐剂的高度实用性(图1和图2）.

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图1:脂肪酸色谱洋葱种子中提取。

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图2:主要脂肪酸的化学结构葱属植物Cepa种子提取物。

Aknowledgment

作者非常感谢法图马·布尔吉巴大学医院微生物实验室和TU-5000 Monastir提供了多种耐药临床分离病原体。

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