细针愿望:骨髓炎、骨肉瘤的狗

文摘

背景:骨髓炎是一种炎症的骨骼、骨髓、骨内膜、骨膜及血管通道。慢性骨髓炎治疗急性骨不足会导致炎症,这表明快速、准确诊断的重要性,以更好地治疗骨髓炎的治疗。附属物的骨肉瘤是主要的主要恶性和nonhematopoietic成骨肿瘤狗。在四肢的骨骼似乎自发相关的发病率在狗和人类的孩子。不幸的是,这是一个侵略性的肿瘤转移无论利率高的物种。高速率的杀伤力是由于可怕的肺癌患者生存预后转移,由于化疗耐火性。对于人类患者,化疗、基于先验anatomopathological诊断,结果在一个更好的生存,因为它降低了转移。然而,这种方法并不经常探索兽医,这档节目的特点就是截肢的传统方法,其次是化疗。

摘要目的:验证中使用的参数的形态表达cytopathological通过细针吸细胞学诊断的骨髓炎和自发的骨肉瘤的狗不同的品种,包括混血品种。研究还旨在表明,细针穿刺技术能够有效地开展骨髓炎的诊断以及狗骨肉瘤。

方法:本研究验证,通过光学显微镜的形态表达参数用于cytopathological骨髓炎、骨肉瘤的诊断20狗不同的品种,包括混血品种,然后这些参数之间可能的一致性进行了分析。细胞学分析是通过细针吸细胞学,使用染色和巴氏染色显微镜载玻片。组织病理学分析是通过使用活检手术标本,按照标准程序处理和染色hematoxylin-eosin。肿瘤分类的基础上,世界卫生组织提出的指导方针。

结果:有恶性肿瘤的标准明显重复cytopathological和组织病理学分析。

结论:这些研究结果告诉我们,cytopathological试验通过愿望可能作为一个值得信赖的诊断方法对骨髓炎、骨肉瘤狗. .

关键字

骨髓炎、骨肉瘤、狗、FNA)

介绍

骨髓炎是一种炎症骨、骨髓、骨内膜,骨膜血管通道,并且可以与细菌,真菌和病毒疾病(1,2]。根据病情演变,慢性或急性骨髓炎可分为(2]。在动物中,骨髓炎常由细菌感染引起的,通常由先前的倾向创伤(3]。

显微镜下,病变通常由多病灶的pleocellular渗透的领域,包括巨噬细胞,淋巴细胞,浆细胞,中性粒细胞和多核巨细胞(图1)。病变典型pyogranulomatous;单核细胞为主,真菌菌丝或细胞内生物经常明显(4]。

骨髓炎诊断通常是通过细胞学评价利用特殊的着色剂,如墨汁,高碘酸-希夫(PAS)和硝酸银。血清学测试可以应用,真菌文化对于明确诊断是必要的。影像学标志必须分化形成原发性或转移性骨肿瘤,这可以通过骨活检(4]。主要鉴别诊断的中年狗大品种残废和前肢扩大是骨骼骨肉瘤5]。

真菌治疗骨髓炎可以是困难和昂贵的。动物通常需要长期抗真菌治疗(几个月),其中一些需要终身治疗。截肢可能需要解决当地的临床症状,但系统的治疗是首先,文化和血清学测试所需的真菌疾病的鉴别诊断(4]。

慢性骨髓炎导致不足或延迟治疗急性骨发炎,这表明快速、准确诊断的重要性,以更好地治疗骨髓炎的行为(6]。

骨肉瘤(群)或成骨肉瘤,骨肿瘤,主要的肿瘤发病率最高的狗,以及人类的孩子,尽管他是十倍更频繁的犬种。这种生物相似性已经把狗变成一个诊所模型研究这种类型的癌症在人类,与几个优势在小鼠模型研究[7- - - - - -9]。

大多数群狗是恶性的,因为他们可以通过当地的渗透,通常导致死亡和大约80%的狗受到死亡阻塞性睡眠呼吸暂停综合症(因肺转移10]。超过15%的患者的临床症状与肺转移检测和估计超过80%微转移(11]。

发现典型,阻塞性睡眠呼吸暂停综合症的metaphyses长骨头和四肢的骨骼,在大约25%的情况下狗影响中轴骨(12]。这个肿瘤主要出现在狗长的四肢,如爱尔兰猎狼犬,苏格兰猎狼犬和大丹犬品种,以及其他大型和巨型圣伯纳德等品种,爱尔兰Setter,杜宾犬,罗特韦尔犬,德国牧羊犬、拉布拉多寻回犬,包括混血品种(8- - - - - -17]。

群折磨狗从中间到老年,平均年龄为7到8岁。此外,男性比女性更倾向于被折磨,但是这句话不是一个共识研究人员,和一些研究没有发现任何性别倾向14,18]。

群的生物行为是一个积极的地方相邻组织的渗透和快速造血的传播,通常到肺部。附属物的群通常出现在远端半径干骨后端,在股骨远端干骨后端近端肱骨干骨后端,虽然其他metaphyses也可能影响(19]。

成像考试,我们可以观察到一个混合lytic-proliferative模式的干骨后端骨和一个相邻的骨膜骨形成,导致开发科德曼的三角形,由受灾区域的皮质和骨膜增生。就像人类一样,肺转移终端发病率的主要原因,表明超过90%的犬类患者可能存在微转移检测不到在常规成像技术(20.]。

除了病人的病史,详细的体格检查和影像学检查,诊断也是基于细胞学分析,确认通常是通过活组织检查和组织病理学分析7,21]。这个肿瘤的案例研究代表性低在巴西境内,主要是因为业主选择安乐死得到治疗的高成本。因此,记录有关疾病和其他信息关于其临床和病理表现是丢失,赌注和事后(20.,22]。

根据里贝罗et al .,下巴阻塞性睡眠呼吸暂停综合症的早期诊断人类疾病的治疗和预后良好影响,为快速诊断和精确的评估tumoral参与,可以进行保守治疗与治疗目标和最小的后遗症。

阻塞性睡眠呼吸暂停综合症的治疗包括截肢或limb-sparing手术后辅助化疗与阿霉素,铂类药物,或两者的结合,以及顺铂和卡铂。这些动物的平均生存有截肢和化疗没有转移范围从165到470天10,23- - - - - -26]。治疗的进步和多药化疗,预后改善了在过去的几十年里,增加存活率,但肺转移患者的预后仍然坏或难治性肿瘤患者11]。

狗群共享许多与人类群特征,包括伤口相同的外观,狗可能被用作一个比较模型(19,20.]。鉴于狗频率,自发的阻塞性睡眠呼吸暂停综合症的犬模型提供独特的机会去理解这个肿瘤的基因组起源。这使得这两项研究关于转移的作用在疾病和测试新的研究药物,否则时间过长在人类(提供结果15]。

关于形态的微观cytopathological表征,阻塞性睡眠呼吸暂停综合症细胞通常是圆形或椭圆形,胞质边界定义,明亮的蓝色颗粒细胞质和古怪的原子核有或没有核仁。巨人,多核细胞是普遍的,往往也是有一个非晶粉红色材料(类骨质)的幻灯片背景或成骨的细胞质(27,28]。如果无法确定圆细胞以信心为成骨细胞,可以进行,在non-stained幻灯片,阶段化学染色为成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)通常是高山积极(21]。

细针吸细胞学(FNAC)成立于1930年代,在人类恶性肿瘤诊断的目的。在动物中,技术开始应用于1980年代,协助在增生的区别,炎症年代,肿瘤和一种退化(28- - - - - -31日]。阻塞性睡眠呼吸暂停综合症FNAC通常使用骨髓愿望进行针。在大多数情况下,可以钝经FNAC只有手动控制——如果操作员无法穿透皮质,超声引导通常允许可视化的一个“窗口”,通过该针插入。FNAC方法可能完善细胞学样本由于建筑保护,允许创建石蜡块供以后处理,类似于一个组织样本,这使得组织化学和的使用免疫组织化学辅助技术(32]。

FNAC还可以帮助诊断感染性骨疾病的关键信息添加到建立一个及时的诊断。真菌造成的大部分机会狗骨骼疾病,主要是曲霉菌。5]。

虽然这种方法很少探讨兽药、细胞学作为诊断工具的角色继续扩张(7]。这项技术有几个优点,如可靠性、微创诊断,降低成本相比,组织病理学和快速的结果,使手术和治疗方法27,33]。尽管相关的更具体的和明确的特征通过组织病理学诊断,可以使用一些作者认为细胞病理学确诊,或者至少是相当有用的。然而,仍然有一些关于该方法的灵敏度的限制,不规则的染色和沉淀或其他折射构件的存在28,30.- - - - - -37]。

最终,这两种技术继续被用于补充诊断,说明一个选项之间的低程度的入侵在样本收集细胞病理学和更高层次的信息来评估组织架构组织病理学(27]。

本研究旨在验证的形态学表现参数用于cytopathological骨髓炎的诊断和自发的狗群的几个品种,包括混血品种。

材料和方法

在这个实验中,我们使用犬骨髓炎和群在兽医医院诊断和兽医病理学服务FMVZ——UNESP Botucatu校园,巴西。以达到诊断,病人进行临床、放射、手术和病理检查。推定诊断为达成的细胞学的发现和证实了组织病理学发现,世界卫生组织推荐的,家养动物的骨和关节肿瘤组织学分类(38]。

所有业主收到的解释关于这项研究的程序,签署一个自由、事先知情同意词。批准的项目是在一个有利的决定在伦理委员会FMVZ——UNESP Botucatu校园,巴西。

关于osteomyelitis-affected狗,骨膜样本获得的超声引导FNA cytopathological评估。收集到的材料然后传播在组织学幻灯片,风干,固定与甲醇和染色染色。

为了获得一个更有代表性样本,动物穿过骨活检和骨髓渴望三天之后。骨髓愿望被提交到琼脂糖单元块技术,细菌和真菌的文化。

骨活检在10%福尔马林固定,常规处理,和细胞样本块琼脂糖是用埃普多夫管包装,70%乙醇固定,在3000转离心10分钟。上层清液被除去,2%琼脂糖液补充道。样本之后,再次在3000转离心10分钟为了获得固体颗粒。最后,小球是嵌入在石蜡,加工组织病理学评价和沾hematoxylin-eosin())和PAS染色。

阻塞性睡眠呼吸暂停综合症的样本收集与定义的品种和混血品种狗的明确诊断阻塞性睡眠呼吸暂停综合症,共计二十个动物。这些动物首先接受了FNAC的病变,其次是切除肿瘤,cytopathological和组织病理学幻灯片处理和他们的阅读。最后的诊断阻塞性睡眠呼吸暂停综合症是由不同的病理学家,和幻灯片被存档在我们部门的兽医病理学。他们再次分析了本研究的代表。

在cytopathological考试,每个肿瘤首先分成四个季度,其次是FNAC的每一个。至少三个显微镜载玻片由季使用。幻灯片首次通过甲醇固定,然后染色染色;在那些由巴氏染色,95%酒精使用。所有这些程序都是由不同的运营商。

在这项研究中,我们第一次样品的质量验证,观察染色模式和多孔性。然后,然后,我们详细的细胞特性使用先前建立的阻塞性睡眠呼吸暂停综合症的诊断恶性肿瘤的标准世界卫生组织推荐的,家养动物的骨和关节肿瘤组织学分类(38]。

结果

在目前的研究中,我们有一个真菌的影响肱骨、股骨的骨内膜骨髓炎。这只狗是一个女11岁拉布拉多寻回犬,重达36.2公斤。

涂片的骨膜样本显示出高度的多孔性简并与非简中性粒细胞在3:1的比例,减少组织细胞嗜酸性背景和丰富的细胞碎片。罕见的成骨细胞,有时伴有轻微的粉红色和无定形材料(骨基质)也被观察到。没有见过传染性病原体。最初的诊断是支持骨膜炎。

骨活检呈现温和变薄的骨基质扩散分布与骨细胞的适度,离散成骨细胞和罕见的破骨细胞,它建立了一个最后的诊断骨质疏松症。

单元块样品展示了类似cytopathological前所述的发现除了几个不是积极的,透明,有隔膜的,定期与平行墙和菌丝45°分支角,兼容曲霉菌。微生物文化产生了消极的结果。最后的诊断是支持和霉菌的骨髓炎由于曲霉菌。

13个月的过程中,动物疾病的复发,并提交脾切除术。颗粒状病变活检后出现在脾脏,真菌性肉芽肿的诊断是由Grocott-Gomori染色。

二十狗参加了阻塞性睡眠呼吸暂停综合症的研究中,与十三纯品种(65%)和七个混合品种(35%)。动物的平均年龄为9.5岁,平均体重是34.8公斤(表1和2)。

表1。关于体重,性别和年龄的二十狗与阻塞性睡眠呼吸暂停综合症。

表2。每个品种的比例与阻塞性睡眠呼吸暂停综合症的影响,基于13纯种犬发现在这项研究中。

我们也分析了形态表达的几个狗阻塞性睡眠呼吸暂停综合症的诊断参数。恶性肿瘤的标准包括细胞结构(低、温和、高)和细胞安排(孤立或内聚),以及核的特点:存在核光环,统一hyperchromasia,突出单一的核仁和多个核仁,核成型,伪包容,multinucleation,典型的有丝分裂,扩大核(karyomegaly),(细或粗聚合)染色质方面,宏观的核仁,核形态(圆形,椭圆形和形成原纤维)。标准也考虑细胞质等特点广泛或稀缺的细胞质,液泡和伪足,同类相食,嗜碱性粒细胞,嗜酸性粒细胞和胞质形态(形成原纤维或梭状);红细胞大小不均,anisocariosis(离散,中度或标记);环境特征如炎症、不成熟的或成熟的骨基质;间质细胞的分布(软骨细胞、成骨细胞和破骨细胞)和血小板的存在。

我们首先进行了质量检测显微镜载玻片,没有考虑不足进行分析。染色技术用于染色和子宫颈细胞学幻灯片。

标准如核光环和伪包含相关数字,未发现与标准等发生食人和成纤维细胞的微环境(表3)。

表3。解剖部位受到阻塞性睡眠呼吸暂停综合症的二十个狗。它显示了每个受影响的部分相应的类别相关的百分比(附属物的或中轴骨)。

我们注意到的差异诊断系统和本研究的发现。前面两例诊断为成骨细胞的群,事实上,软骨肉瘤,由于大量的多形性软骨细胞和软骨的标记扩散矩阵,这种肿瘤的特征。另一个诊断差异是一个伤口,是显示骨重塑过程,细胞没有出现预期的恶性肿瘤的标准如杂乱无章的骨基质的扩散和明显的核仁。

讨论

虽然罕见,但骨髓炎诊断通过单元块细胞病理学诊断应该被考虑,所看到的这个研究的结果,尤其是考虑到长期和艰难的治疗这种疾病(4]。还应该考虑不足,延误治疗可能导致慢性骨髓炎,这是可能避免的快速诊断单元块细胞病理学技术(6]。

大品种像罗特韦尔犬、爱尔兰setter和拉布拉多显示阻塞性睡眠呼吸暂停综合症(伟大的倾向8,12,14]。此外,阻塞性睡眠呼吸暂停综合症经常困扰四肢的骨骼或长骨头,代表85%的情况下,以及metaphyses [12]。此外,55%受影响的动物是大型的,10%的选手是超大。

女性比男性更折磨,利率分别为55%和45%。尽管文献表明男性更折磨,仍有研究人员在这方面没有明确的共识(14,18]。本研究狗的平均年龄是9.5岁。根据Vanel和黑樱桃,动物受到的平均年龄群七到八岁。文学和研究之间的差异可能是由于预期寿命的增加的宠物由于若干因素。其中,我们可以提到疫苗的更高的可用性,提高意识的主人对宠物的老年问题和宠物食品的营养品质的改善39]。此外,通过cytopathological肿瘤疾病的早期诊断和组织病理学分析使越来越多的有效的治疗方法,以及更高的患者预期寿命(23]。

cytopathological测定结果表明,可能确实作为一个明确的诊断自发的阻塞性睡眠呼吸暂停综合症的狗,几个作者证实,由于恶性肿瘤的标准表示通过这种技术配合这些表达为这种类型的肿瘤组织病理学检测,如类骨质,巨大的多核细胞和单个或多个明显的核仁(28,34- - - - - -38]。然而,为了强调形态标准,进一步研究样本量足够大,达到代表性是必要的。

结论

根据这一研究获得的结果,我们可以得出这样的结论:cytopathological化验是可行的诊断方法对骨髓炎和犬自发的阻塞性睡眠呼吸暂停综合症,被一个同样充足的分级的恶性肿瘤的方法。这些因素允许外科医生进行更充分的和快速治疗协议,这可能显著改善预后的动物面对这些自然积极的骨骼疾病。

确认

我感谢商学院的支持——UNESP实现这个项目,FAPESP,必须占州政府斗篷和CNPq金融资源。

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