e-ISSN: 2320 - 0812
Wankupar Sakthivel斯里尼瓦桑Wankhar, Sheeladevi Rathinasamy和拉詹文德兰花*
生理学系ALM PG基本医疗科学研究所博士,马德拉斯大学Taramani校园,钦奈113年- 600年,印度
收到日期:2015年5月20接受日期:2015年6月23日发表日期:2015年6月30日
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本研究的目的是调查gc - ms分析和保护作用Indigofera tinctoria (I.tinctoria)噪声诱导行为和纯种白化大鼠的生化变化。噪音压力是由宽带白噪声发生器,连续15天每天100 dBA, 4 h和Indigofera tinctoria(300毫克/公斤.b.w)的口服药物。七个化合物通过gc - ms分析,分离出的l -(+)抗坏血酸2,6-dihexadecanoate, N - (3 - (3、4、5-trimethoxyphenyl)丙酰)piperidin-2-one和3,6-diacetyl-9-ethylcarbazole报道表现出抗氧化能力。暴露在噪音压力,显著(P ?0.001)增加固定减少饲养,梳理,在开放领域和移动行为。这一结果表明,sub-acute压力影响大鼠的运动活动。Sub-acute噪音压力显著增加谷胱甘肽过氧化物酶的水平,脂质过氧化作用,一氧化氮,谷胱甘肽S转移酶和超氧化物歧化酶的水平降低,过氧化氢酶,减少谷胱甘肽,谷胱甘肽还原酶,维生素C、蛋白质硫醇,表明氧化不平衡在免疫器官暴露sub-acute噪音。然而,口服的我。tinctoria显著诱导行为和防止噪音生物化学变化。这些结果得出的结论是,我。tinctoria补充可以清除噪音引起的自由激进的一代,表明其抗氧化性质,可以被视为一个antistressor。
gc - ms分析;免疫调制剂;噪音压力;Antistressor;行为
压力是常见的所有生物的经验。噪音是许多现代社会的一个普遍方面和工作环境1]。根据国际化学品安全规划(2)噪声的一个负面影响是定义为一个有机体的形态和生理变化导致损伤的功能容量,或一个障碍能力弥补额外的压力,或增加一个有机体的易感性的有害影响其他环境的影响。
噪声会造成健康影响听力障碍,干扰口语交流,睡眠障碍、心血管紊乱、任务性能受损,干扰在心理健康,和消极的社会行为和烦恼反应(3]。当任何形式的接触噪音超过90分贝时,噪声成为压力源(1]。噪声对免疫状态的影响也被报道(4]。环境压力血液中发挥着重要作用的糖皮质激素水平,既抑制了先天以及后天免疫功能和结果在对感染的易感性5]。-促激素释放压力,刺激促肾上腺皮质激素的释放进而从肾上腺皮质释放肾上腺酮(6]。各种压力与增强自由基生成导致氧化损伤。氧化应激来自助氧化剂和抗氧化剂之间的不平衡支持前者,导致氧化损伤的一代7]。代的自由基是一种正常的细胞功能的积分特性,相比之下,过度生成和/或清除自由基导致破坏性的不足和不可逆损伤细胞(8]。
植物Indigofera tinctoria (I.tinctoria)属于家庭豆科,发现在印度。即tinctoria原产于印度的一个古老靛蓝染料生产的中心。提取筛查植物化学的分析被发现含有生物活性的化合物如类黄酮、皂苷、丹宁酸、甾萜,酚类化合物和anthroquinone9]。根、茎和叶即tinctoria是苦的,产生热量,泻药,用于王亚南,抗癌、癫痫、神经病变,慢性支气管炎、哮喘、溃疡,和皮肤疾病(10]。干叶粉是用于治疗哮喘的11)、便秘、肝脏疾病、心脏心悸和痛风12]。煎煮的树叶用于叮咬或有毒的昆虫和爬行动物来缓解疼痛13]。植物含有几个植物化学物质具有强大的抗氧化活动(14]。但是我的水提物的有效性。tinctoria避免噪声应激诱导自由基的生产在动物模型中尚未报道。因此,本研究进行评估我的抗氧化性能。tinctoria对噪声应激行为和纯种白化大鼠的生化变化。
收集和识别
植物即tinctoria收集(2013年5月至11月)从KSG企业(Tindivanam、泰米尔纳德邦、印度)和验证博士d·阿拉(医学植物学和研究所Siddha钦奈,印度)。凭证标本存放标本的研究所Siddha Reg没有:NIS / MB / 83/2013。收集到的植物被分开不需要的材料和干置于阴凉处。树叶停飞,粗粉的帮助下一个合适的磨床。粉末被存储在一个密封的容器中,保存在阴凉黑暗和干燥的地方,直到分析。
提取过程
即tinctoria干树叶粉30 g和250毫升无菌蒸馏水提取使用索氏仪器在100C。水提取与绘画纸第一滤纸过滤,然后冷冻干燥和储存在4C进行进一步的调查。提取效率量化通过确定提取物的重量和百分比收益率被计算为16%。
实验设计
威斯特应变男性白化大鼠体重180 - 220 g是随机挑选的。动物们保持在标准实验室条件下和美联储随意与食物(M / S Hindustan Lever有限,孟买,印度)和水。所有的老鼠被安置的条件下控制温度(26±2°C) 12 h光线黑暗和12 h曝光。动物们被分成四组,每组六个动物。组我控制,第二组动物的动物受到噪音压力4 h每日15天(Sub-acute暴露),第三组(Indigofera tinctoria独自)是对待我。tinctoria 48天,实验进行了49天,第四组由噪音压力与我。tinctoria对待动物。这些动物是预处理的与我。tinctoria 33天,然后暴露于噪音压力为15天。噪音压力期间,他们也给了我。tinctoria口服摄入的提取,所有的实验都是49天。伦理批准获得伦理委员会的实验开始前(IAEC不:22/02/2013)和委员会控制和监督的目的动物实验(CPCSEA)。
噪音压力感应
宽带白噪声在100 - db强度是由白噪声发生器,放大的放大器连接到扬声器固定30厘米以上动物的笼子里。声级计是用来测量噪声的强度(1]。
血液样本和隔离脾脏、胸腺、淋巴结和骨髓是8 - 10点,以避免昼夜节律感应变化。无压力收集血液样本按费尔德曼和Conforti[描述的技术15]。实验周期结束时所有的动物被暴露于轻度麻醉和血液收集从颈内静脉血浆和血清3000 r.p分别通过离心分离。在4°C m 15分钟。之后所有的动物都牺牲了深麻醉下使用硫喷妥钠(40毫克/公斤合著)。脾脏、胸腺和淋巴结被切除,在冰冷的生理盐水清洗,涂抹干燥。快速称重和脾、胸腺淋巴结和骨髓样本被使用聚四氟乙烯玻璃均质机均质。组织匀浆的制备10%磷酸盐缓冲剂(0.1米,pH值7.0)和离心机在4°C 3000克15分钟去除细胞碎片和用于生化检测,得到上清液。
生化决定
估计血浆皮质甾酮是由辛格和胆量的过程16]。蛋白质是估计的方法(17]。脂质过氧化决心在免疫器官18]。一氧化氮(NO)水平测定总亚硝酸盐使用格里斯(硝酸+水平19]。确定蛋白质硫醇(20.]。超氧化物歧化酶(SOD)根据Marklund Marklund [21)和过氧化氢酶(CAT)根据Sinha的方法(22]。谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)的活动估计的方法(23]。减少谷胱甘肽(GSH)的免疫器官被白痴的方法估计et al。24]。维生素c(抗坏血酸)含量组织决心的方法Omaye et al。25]。
开放的现场试验
开放的现场试验被广泛用于测量一般运动和准备活动(26]。老鼠在这项研究中的应用是放置在空地的中心,这是动物小说,和下面的变量得分5分钟:(i)固定:老鼠睁着眼睛,抱着它的头对重力,但没有任何的头,身体或肢体动作。(2)梳理:有节奏的爪子运动在脸和/或主管脸洗可能包括的咬和清洁的爪子。(3)饲养:静止在其后肢直立。(iv)移动:当所有的四肢都在一个特定的广场(中央或外围)。
安捷伦6890气相色谱仪配备直接停用2毫米直接喷射器班轮和15 m Alltech EC-5列(250μ我。D, 0.25μ膜厚度)。分裂注射用于样品导入和分流比设为10,1。烤箱温度程序编程开始35°C,保持2分钟,然后坡道每分钟20°C到260°C和保持5分钟。氦载气被设置为2毫升/分钟的流量(恒流模式)。
质谱分析:JEOL GC伴侣II台式双聚焦扇形磁质谱仪在电子电离(EI)运营模式与tss - 2000软件用于所有分析。低分辨率质谱的分辨能力获得1000(20%高度定义)和m / z扫描25 m / z 700 0.3秒每0.2秒inter-scan延迟扫描。高分辨率质谱的分辨能力获得5000(20%高度定义)和扫描磁铁从65 m / z 750 m / z 1秒/扫描。
质谱库搜索:纯化化合物的识别组件的匹配记录光谱的数据银行NIST质谱库V 11所提供的工具软件。
统计分析
结果提出均值±。爱有地区差别的自由基清除酶的分布。结果提出均值±金丝数据统计评估使用单向方差分析(方差分析),其次是图基SPSS-20多重比较测试。
gc - ms分析
的水提物进行gc - ms分析I.tincoria。结果,这些化合物识别通过与GC附加质谱(图1)。结果显示7个化合物的质谱分析来确定的。孤立的分子量、分子式、结构化合物。结果列表表1显示的存在即不同phytocompounds提取l -(+)抗坏血酸2,6-dihexadecanoate (2.3%)、3-Indoleacetonitrile (14.8%)、N - (3 - (3、4、5-Trimethoxyphenyl)丙酰Piperidin-2-One(14.68%)、硬脂酸甲酯(4.27%),3,6-Diacetyl-9-Ethylcarbazole (47.06%)、5-Hydroxy-L-tryptophan(4.02%)和Tetrachloro-1, 2-benzoquinone (12.73%)。
开放的现场试验
开放的结果给出了进行实地测试表2。经过15天的暴露在噪音,在经常有显著减少移动在中心广场,周边广场、饲养、梳理和粪便丸而显著增加固定观察相比,控制。这噪音压力感应周围的变化,中央,固定、梳理和抚养我虽然显著提高。tinctoria治疗大鼠在所有这些参数而与控制明显显示下降。
生物化学分析
皮质甾酮:皮质甾酮的结果给出了估计表3在均值±s.d噪音压力暴露大鼠显示显著(p < 0.001)海拔皮质甾酮水平。尽管与我的治疗。tinctoria在噪声暴露可以显著(p < 0.001)降低皮质甾酮水平相比,噪声应激组。
自由基和压力标记:一氧化氮水平的结果脾、胸腺,腘淋巴结和骨髓意味着±S进行了总结。D (图2)。一氧化氮水平控制动物与我相似。tinctoria仅48天对待动物。另一方面噪声仅4 h每日15天治疗动物的(脾、胸腺、腘淋巴结和骨髓)明显增加(p < 0.001)一氧化氮水平。不过我。tinctoria治疗期间噪声暴露动物显著降低免疫器官没有水平。脂质过氧化作用的结果在脾、胸腺、淋巴结和骨髓概括为均值±S。D (图3)。我的法律流程外包水平。tinctoria单独治疗动物类似于控制动物。而在sub-acute噪声暴露组显著增加(p < 0.001)提供法律服务外包的水平在免疫器官。尽管与我的治疗。tinctoria在噪声暴露可以减少法律外包水平显著,仍从控制法律外包水平显著升高。结果显示蛋白质硫醇与平均数±标准差(图4)。硫醇的蛋白质水平即tinctoria对待动物类似于控制动物。硫醇的蛋白质水平噪声应激组显著降低(p < 0.001)在所有免疫器官与控制。尽管与我的治疗。tinctoria硫醇在噪声暴露会增加蛋白质水平显著,仍从控制蛋白质巯基水平明显下降。
自由基清除酶
超氧化物歧化酶(SOD):结果进行了总结表4在均值±金丝sub-acute应力诱导显著(p < 0.001)降低免疫器官SOD水平与控制。尽管与我的治疗。tinctoria在噪声暴露可以显著提高SOD水平,仍然SOD水平显著减少控制。此外,我。tinctoria当给正常的动物,他们不会改变的SOD水平控制。
过氧化氢酶(CAT):过氧化氢酶的结果免疫器官(脾脏、胸腺腘淋巴结和骨髓)进行了总结表5在均值±金丝过氧化氢酶水平的我。tinctoria单独治疗动物类似于控制动物和没有意义。噪音压力显著减少猫水平的免疫器官。然而治疗我。tinctoria在噪声暴露会增加猫显著水平,仍然猫从控制水平明显降低。
谷胱甘肽过氧化物酶(GPx):谷胱甘肽过氧化物酶的结果总结表6。我的酶GPx水平。tinctoria单独对待动物是类似于控制变化观察动物和没有意义。sub-acute噪声暴露增加GPx水平在所有免疫器官和意义(p < 0.001)的变化观察到当与控制。尽管治疗在噪声暴露可以减少GPx水平显著,从控制仍然GPx水平显著升高。
谷胱甘肽S转移酶(GST):皮质甾酮的结果估计中给出表7我与均值±金丝销售税的水平。tinctoria对待动物是类似于控制动物。而在sub-acute噪声暴露动物销售税水平显著增加(p < 0.001)相比,控制。之前的我。tinctoria处理噪音压力,销售税水平升高与噪声应激组相比显著降低。
谷胱甘肽还原酶(GR):结果GR的免疫器官(脾脏、胸腺、腘淋巴结和骨髓)进行了总结表8我的意思是美国南达科他州±。tinctoria单独治疗动物GR水平与控制动物。sub-acute应力显著(p < 0.001)降低了GR水平的免疫器官。但在我。tinctoria与噪声处理组GR水平显著提高。
非酶促
减少谷胱甘肽(GSH):结果意味着±S进行了总结。D (图5)。我的谷胱甘肽水平。tinctoria单独治疗动物控制动物有关。在噪声暴露,免疫器官中谷胱甘肽水平显著下降(p < 0.001)相比,控制。虽然我。tinctoria与噪声强调组显著增加谷胱甘肽水平与sub-acute相比噪声暴露的动物。
维生素C (C):结果概括为均值±S。D (图6)。non-enzymatic维生素C水平的i tinctoria单独治疗动物类似于控制动物。另一方面噪声暴露动物(脾、胸腺、腘淋巴结和骨髓)维生素C水平下降和意义p < 0.001。但在我。tinctoria与噪声治疗组服用维生素C水平显著增加,与噪音。
GS-MS色谱图
植物被认为是一个巨大的几种药物活性来源原则和化合物常用的家庭疗法对多种疾病(27]。更精确的信息定性植物化学的分析可以获得的色谱法结合质谱(gc - ms) [28]。植物GS-MS色谱显示7化合物(表1)。质量光谱数据库给了超过90%的匹配以及确认化合物结构匹配。
l -(+)抗坏血酸2,6-dihexadecanoate组成的2.3%提取,据报道,一种抗氧化剂,抗炎和antinociceptive属性。它甚至表现出抗菌活性对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等。它还提高精子质量,防止精子凝集从而使他们更加能动的向前发展(29日]。
3-Indoleacetonitrile最早的(14.8%)化合物存在于我。tinctoria提取物表现出光致auxin-inhibitory物质,它也有色氨酸加双氧酶抑制剂pyridyl-ethenyl-indoles作为潜在的抗癌和免疫调制剂(30.]。
N - (3 - (3、4、5-Trimethoxyphenyl)丙酰)piperidin-2-one比例由14.68%的峰值。这种化合物来源于哌啶组。哌啶药效基因是非常重要的,因为它是在许多生物碱、医药、农用化学品和合成中间体。哌啶已知中枢神经系统抑制作用在低剂量水平和刺激性活动增加剂量。此外,细胞核还具有镇痛、神经节阻断和麻醉属性(31日]。
硬脂酸甲酯(4.27%)是脂肪酸化合物鉴定具有许多生物活性报道有止泻的,细胞毒性和anti-proliferative活动(32]。
3.6 -diacetyl-9-ethylcarbazole(47.06%)化合物来源于咔唑组和这个是一个主要的化合物存在于tinctoria提取。咔唑是一种芳香杂环有机化合物。据报道有抗菌、抗肿瘤、抗糖尿病的,自由基清除,亲神经的33),抗炎,避孕的,杀虫。
5-Hydroxy-L-tryptophan拥有最高比例的4.02%。印度最古老的已知中心之一的靛蓝染料生产和来自5-Hydroxy-L-tryptophan。5-HTP作为睡眠障碍、抑郁(34)、焦虑、偏头痛、紧张型头痛、纤维肌痛、暴食与肥胖有关,经前期综合征(PMS),经前焦虑障碍(PMDD),注意缺陷多动障碍(ADHD),连同处方药治疗癫痫症和帕金森病(35]。5、5-HTP调节GPG-generated节律性活动,包括运动,游泳,呼吸和咀嚼,在许多无脊椎动物和脊椎动物36]。
Tetrachloro-1, 2-benzoquinone化合物在我面前12.73%。tinctoria提取。由苯醌(导致)。Tetrachloro-1 2-benzoquinone具有特效,白色和红色的血细胞计数和它加强在红细胞delta-aminolevulinic酸脱水酶的活动37]。
行为分析
开放的领域模型(OFT)检查焦虑和运动相关的行为特征是动物的正常厌恶一个开放的、明亮的区域。动物远离他们适应笼和放置在环境表达焦虑和恐惧,通过展示在全部或部分参数变更。抗焦虑治疗减少动物的这种可怕的行为在空旷的田野38]。在目前的研究中,噪声暴露动物显示增加了OFT的固定。随着这些变化,降低饲养,梳理,粪便丸和步行广场还透露,噪声暴露组表达焦虑、恐惧和改变运动的活动。噪声应激行为的变化经常阻止我。tinctoria治疗组(表2)。gc - ms分析发现5-Hydroxy-L-tryptophan(4.02%)在植物提取物。5-HTP已报告有睡眠障碍,抑郁焦虑、偏头痛、紧张型头痛的存在5-HTP可能作为一个抗焦虑药或恢复正常功能34]。
生化估计
氧化应激是接触氧化剂和抗氧化剂损耗的一般现象,或oxidant-antioxidant平衡39]。ROS / RNS,也被称为自由基,是正常的细胞有氧代谢的产物,这些不稳定的分子可以损害细胞脂质,蛋白质和核酸DNA是否中断对应的抗氧化剂的平衡。过剩的自由基会导致细胞死亡启动核和细胞膜脂质过氧化,破坏细胞的完整性,导致坏死细胞死亡。氧化应激发生在一个细胞或组织时产生的ROS浓度超过细胞的抗氧化能力。
没有是一个自由基与细胞起源的多样性和潜在的功能。一氧化氮(NO)是不断生成的活体,和作为重要的生理中介。在目前的研究中,没有证明,噪音水平显著增加免疫器官产生自由基。没有水平的增加可能由于氧化应激诱导噪声暴露。相同的结果建议Reha et al。40)报道,海拔在老鼠没有水平的氧化应激指标。一氧化氮被认为与超氧化物阴离子反应获得一个激进的财产,这也是一个强有力的氧化损伤(来源41]。法律流程外包可能是增加一氧化氮的增加,符合噪声应激的自由基的生成。法律流程外包是一个free-radical-mediated过程。增加数量的法律流程外包sub-acute噪音压力在这项研究中协议的结果Aravind et al。42]。增加的脂质过氧化水平作为直接证据表明氧化应激(7]。显著减少蛋白质硫醇在这项研究中观察到可能是由于蛋白质氧化的氧化过程。
这些抗氧化酶包括过氧化氢酶、SOD、GPx -酶是重要的自由基的消除。在目前的研究中SOD水平明显降低噪声组。噪声诱导脂质过氧化可能增加SOD活性降低,SOD的去除多余的活性氧。这当然是代表噪声是一种压力,它通过氧化失衡影响正常生理功能。因为SOD酶是一个重要的家庭在活细胞为维持正常的生理条件和应对压力。SOD的作用是保护细胞和组织的生物完整性对有害影响的超氧化物自由基(43]。在目前的研究显示,噪音降低过氧化氢酶水平压力集团。这是验证,降低酶活性较长的持续时间可能与消费有关的酶氧化应激。蚂蚁的活动减少氧化酶类此外可以归因于他们的协同运作的本质,这可能部分解释的机制减少活动(44]。增加GPx酶系统为了防止自由基的积累(45]。进一步得出结论,增加酶GPx暗示,有一个工人在嘈杂的环境中氧化应激。本研究的发现后,改变存在于这些酶水平sub-acute暴露在噪音,这表明噪声压力不容易适应我们的身体。
谷胱甘肽脂质过氧化物等直接淬灭ROS。抗氧化的酶,谷胱甘肽过氧化物酶,催化H的转换2O2水通过减少谷胱甘肽(GSH)和降低NADPH作为辅助因子。在这项研究中谷胱甘肽明显降低了噪音压力由于氧化过程中氧化蛋白质也是合理的水平下降的一个主要硫醇谷胱甘肽的物质。这与报告Sokolovski et al。46谷胱甘肽系统的改变发生,当老鼠暴露在90分贝的白噪声。噪声暴露组中的谷胱甘肽水平降低可能是由于增加的脂质氧化产品可能会减少可用性所需的NADPH谷胱甘肽还原酶的活性。谷胱甘肽水平降低与减少GR活性可能支持本研究的解释作为证据(47]。GR是谷胱甘肽酶的转换,允许再生氧化谷胱甘肽(GSSG)来减少氧化谷胱甘肽的NADPH辅酶ii + (48]。谷胱甘肽还原也可以解释维他命C的浓度下降,进入细胞主要以氧化形式,减少谷胱甘肽(49]。维生素C是一种亲水性还原剂直接与超氧化物反应,氢氧根和各种脂氢过氧化物更有效地比其他水溶性抗氧化剂(50]。因此减少维生素C水平足以改变免疫功能sub-acute噪音压力(4]。
我以前管理。tinctoria噪音暴露大鼠归一化酶的活动和non-enzymatic抗氧化,从而防止自由基介导的免疫器官的氧化损伤。我在gc - ms分析。tinctoria包含一个主要的化合物有47.06%是3,6-Diacetyl-9-Ethylcarbazole源自咔唑组。咔唑是一种芳香杂环有机化合物。这个化合物具有清除自由基的能力(33]。除了高峰的比例2.3% l -(+)抗坏血酸2,6-dihexadecanoate被确定。Okwu et al。51)报道,l -(+)抗坏血酸2,6-dihexadecanoate反压力的活动,据报道,3-Indoleacetonitrile免疫调节活动(30.]。这些报告进一步支持我们的研究,我。tinctoria包含antistressor和体内抗氧化能力在大鼠免疫器官。
通常情况下,自由基的抗氧化机制失败通过生产过剩或不足清除酶的活动。从这些调查结果可以强烈认为噪音压力可以导致免疫器官自由基损伤。噪音压力改变行为和生化异常被我阻止了。tinctoria补充。因此,目前的研究表明,我。tinctoria补充可能发挥抗氧化作用,可以视为一个保护性药物对抗压力。
这项工作是支持的财务UGC-UPE-Phase II(没有:2013 / PFEP / C3/280)大学的马德拉斯,印度。
我们声明我们没有利益冲突。