无花果对n -亚硝基二乙胺和ccl4诱导的大鼠肝癌的保护作用

摘要

的王亚南不同提取物的活性热带榕属植物sycomorusL. (FS)抗N亚硝基二乙胺(NDEA)和ccl4诱导hepatocarcinogenesis(HCC)在大鼠中首次被研究。肝组织组织学观察表明，木材(FSWE)和叶提取物(FSLE)均具有显著的肝保护活性，茎皮提取物(FSBE)表现出中等活性，而水果提取物(FSFE)作用不显著。

关键字

热带榕属植物sycomorus;王亚南活动;N-nitrosodiethylamine;hepatocarcinogenesis

简介

热带榕属植物sycomorusL. (F. Moraceae)生长在埃及，被称为梧桐或gimmeiz。1果实可食用，在许多非洲国家，这种植物的不同部分被用于治疗许多疾病和失调，如腹泻、痢疾、皮肤感染、胃部疾病、肝脏疾病、黄疸、胸部疾病、咳嗽和结核、炎症、喉咙痛、真菌疾病、癫痫、哺乳障碍、蠕虫病、精神障碍、镰状细胞病、不孕症和不育。[2-7］

有关抗肿瘤植物特性，以往的生物学研究表明，果实提取物在马铃薯盘中表现出抗肿瘤活性生物测定．［8，9此外，根皮提取物显示出对ccl4诱导的肝保护活性肝毒性在老鼠身上。3.此外，叶提取物对曼氏血吸虫感染小鼠肝脏有保护和抗病理作用。[10］

在本研究中，我们研究了西柚不同提取物对N-的肝保护活性nitrosodiethylamine以及ccl4诱导实验大鼠肝癌的发生。这在阻止肝癌发生、延缓其进展、减少对肝细胞的损害或减少其并发症方面可能是有希望的。

材料和方法

材料

植物材料

新鲜样品热带榕属植物sycomorusL.包括叶子、茎和未成熟的果实，收集于2010年2月至4月，来自阿西特大学农学院观赏植物实验站，并由阿西特大学农学院观赏园艺和花卉学教授Naeem E. Keltawy教授进行了鉴别和鉴定。凭证样本一份(编号:2010 FS)已保存于埃及阿西特大学药学院生药学系植物标本室。

动物

成年白化大鼠(雌雄各100-150克)用于急性毒性。使用体重150-200g(4-5周龄)的雄性白化大鼠进行肝保护作用。这些动物在标准化的环境条件下饲养在阿西特大学医学院药理学系临床前动物房。他们被喂食标准的饮食，并允许免费获得饮用水。根据实验设计将动物随机分组。

化学物质

n -亚硝基二乙胺(NDEA)购自德国斯坦海姆的Sigma-Aldrich公司。四氯化碳(CCl4)是从埃及开罗的El-Faronia公司获得的。Tween 80购买自Sigma化学公司，圣路易斯，美国。0.9%生理盐水来自(埃及El-Nasr制药和化学公司)。所用的所有其他化学品均为分析级，并在当地购买。

提取物的制备

用70%乙醇在室温下浸渍法分别提取桑果风干粉叶(1.0 kg)、茎皮(0.5 kg)、木材(1 kg)和新鲜未熟果实(1.5 kg)。每种提取物在减压下浓缩，得到粗提物重量分别为60g、60g、60g和50 g。

给药用提取物的制备

将叶(FSLE)、茎皮(FSBE)、木材(FSWE)和新鲜未成熟水果(FSFE)的干燥提取物按特定重量(急性毒性研究分别为2.5 g，保护肝活性研究分别为40 g)，在含3% v/v Tween 80的生理盐水中制成乳剂。

急性毒性研究

急性毒性研究按照Lorke 's方法进行。［11，12这项研究分两个阶段进行，共使用了25只大鼠。在第一阶段，13只大鼠被分为5组。I-IV组，分别腹腔注射每种提取物10、100和1000 mg/kg体重(b.w.)(每剂1只大鼠)，以确定可能产生任何毒性作用的剂量范围。另设第五组1只大鼠为阴性对照，腹腔注射3% v/v Tween 80生理盐水。

在第二阶段，将每种提取物的进一步特定剂量(1600、2900和5000 mg/kg b.w)给予3只大鼠(每剂1只大鼠)，以进一步确定正确的LD50值。提取物经腹腔给药。治疗当天对所有动物进行频繁观察。不同浸提物对大鼠的急性致死作用显示，浸提物处理后24小时内无大鼠死亡(表1)．中毒后24小时内发现的主要症状包括呼吸困难、食欲不振、全身无力、易怒、扭动、体温过低例如，运动协调性丧失、肌肉松弛、镇静和深度睡眠。这些症状在100 mg/kg b.w.剂量组中没有出现，但随着剂量增加到5000 mg/kg b.w.，这些症状会进展并变得越来越明显。LD50，大于5000 mg/kg b.w.。

实验设计

肝保护作用按照Sundaresan和Subramanian 2003的方法进行[13]。雄性大鼠55只，随机分为6组图1）;除第一组5只外，每组10只。实验设计及处理方案如下:第一组:正常对照大鼠饲喂标准饲粮9周。第二组:阴性对照大鼠，在NDEA给药前给予3% v/v Tween 80生理盐水(1ml /kg b.w.，每日)口服2周，持续至实验结束(即9周)。III -VI组:大鼠在NDEA给药前给药2周，连续给药2周(FSLE、FSBE、FSWE和FSFE)，每日400mg/ Kg b.w.。第二组至第六组给予NDEA单次腹腔注射(200 mg/kg b.w.)。一周后，他们每周给予CCl4皮下注射一次，剂量为3ml / kg b.w.，持续6周，以确保诱导HCC。试验第9周结束时，处死全部大鼠，取肝，各肝叶取肝标本。标本立即浸泡在10%缓冲福尔马林溶液中固定，升级酒精脱水，苯甲酯清除，石蜡包埋，4微米厚切片，按标准方案用苏木精(H)和伊红(E)染色，进行组织病理学检查。在本实验中，在暴露于NDEA和CCl4的大鼠中观察到椭圆形细胞的增殖。 These cells were characterized by a small oval blue staining nucleus and a faintly basophilic cytoplasm.

结果与讨论

I、IV、V组动物无死亡率，而II、III、VI组动物死亡率分别为40%、40%、30%。组织学研究(图。2)显示正常对照大鼠(I组)肝脏切片结构正常，肝细胞呈多面体状，胞浆颗粒状，细胞核小而均匀。在第二组，NDEA和CCl4诱导肿瘤出现前的不同大小的病灶，卵形细胞增生及胆管增生．肝小叶可见癌前灶。周围正常细胞未见压迫性萎缩。肝细胞典型的小梁排列丧失，肝窦塌陷。的细胞质与正常相比，具有丰富的嗜酸性粒细胞，并具有“磨玻璃外观”。细胞变大，细胞核大，核仁突出(图2B)。在癌前灶内观察到不同数量的空泡大肝细胞(图2C)。空泡细胞具有植物细胞样(透明细胞)，胞浆膨大，细胞核深染多形性。卵形细胞增殖，在细胞间扩散肝实质(图2D)。这些细胞的特征是有一个小的卵圆泡状核和微弱的嗜碱性细胞质。胆管增生的特征是胆管细长，内衬一层或多层胆管上皮细胞(图2E)。表2数据显示，v组肿瘤前灶、卵形细胞增殖及胆管增生受到抑制。III组肿瘤前灶及胆管增生受到抑制，卵形细胞增殖百分率降低至16.6%。在IV组，肿瘤前灶的百分比和卵形细胞增殖胆管增生被抑制。VI组肿瘤前灶及胆管增生发生率无明显降低。

A:正常对照大鼠(I组)肝脏。

B: II组大鼠肝脏，瘤前灶，周围正常细胞未见压性萎缩，细胞质丰富，呈“磨玻璃样”，细胞较大，核大，核仁突出。

C:显示空泡细胞的II组大鼠肝脏呈植物细胞样(透明细胞)(箭头)。

D: II组大鼠肝脏，可见卵圆形细胞在肝实质间扩散(箭头)。

E:ⅱ组大鼠肝脏显示胆管增生，特征为胆管细长，内衬一层或多层胆管上皮细胞(箭头)。H & E染色。

F. sycomorus介导的预防ndea诱导肝癌的确切机制尚不清楚。有报道称，这可能是一种作用机制。口服剂量为500 mg/kg的CCl4诱导大鼠肝损伤，其对肝脏的保护作用可能是由于其抗氧化作用或抑制细胞色素P450s，从而损害CCl4的生物激活，使其成为相应的活性物种。[14此外，猕猴桃根皮水提取物在640 mg/kg的口服剂量下，对α-amyrin和黄酮类化合物混合存在的CCl4诱导的大鼠肝毒性具有保护作用。[3.综上所述，桑果可能通过清除活性氧抑制NDEA和CCl4诱导的大鼠肝毒性的形成。

黄酮、香豆素、单宁和甾体/三萜及其苷类化合物已被报道为该属的成分。［15由于这些成分是自由基清除剂，并具有肝保护活性，因此可以推测，这些成分是无花果树的保护作用的原因。［3.，14，16］

结论

从本研究可知，木提取物和叶提取物对NDEA和ccl4诱导的大鼠肝癌均有显著的肝保护作用，而茎皮提取物活性中等，未成熟果实提取物作用不明显。这是首次在动物模型中报道西柚叶、茎皮、木材和未成熟果实提取物的保肝作用。

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