我在实践中指导方针:开发和验证的效果方法同时估计Ketorolac氨丁三醇与氧氟沙星眼药配方。

文摘

Ketorolac氨丁三醇(刃)和氧氟沙星(笔)散装和滴眼剂配方精确、准确地确定使用高性能薄层色谱(效果)的方法。分析了硅胶60 f254固定相与铝薄层色谱板的支持。二氯甲烷:甲醇:氨25%(6:3:1)被用作流动相。这两种药物都圆满地解决了射频0.79±0.03,0.41±0.02分别为刃和笔。性能验证方法按照我的指导方针。线性被发现在25 - 75 ng /带刃(r2 = 0.999), 15 - 45 ng /带笔(r2 = 0.9998)。分析结果发现99.14±0.413% w w / w / w和98.11±0.232%分别刃和笔。%复苏刃是在99.74 - -99.95%的范围w / w和笔是99.78 w / w的-99.87%。这种验证方法可用于同步估计刃,从散装和笔眼科配方。

关键字

Ketorolac氨丁三醇、氧氟沙星、效果、验证我的指导方针

介绍

Ketorolac氨丁三醇(图1)是5-benzoyl-2 3-dihydro-1H-pyrrolizine-1-carboxylicacid 2 -(羟甲基)- 1,3 propanediol1。这是一个有效的镇痛和温和的抗炎活性。

氧氟沙星(图2()化学9-fluro-2, 3-dihydro-3-methyl-10) - 4-methyl-1-piperizinyl 7-oxo-7h-pyrido [1, 2, 3-de] - 1, 4 - benzoxaine 6 -carboxylicacid [1]。氧氟沙星是氟喹诺酮类药物的合成化学疗法的抗生素类被视为第二代氟喹诺酮类。

尿酮体已经被紫外光谱估计(2),效果3)和高效液相色谱法(4,5,6,7,8]。笔估计单独或与其他药物使用技术相结合紫外分光光度法(9,10,11,12,13,14,15),高效液相色谱法(16- - - - - -27)和电化学分析(28]。刃(5毫克/毫升),笔(3毫克/毫升)组合的形式在市场上可用的眼科(KETLUR)的解决方案。本文提供了简单、经济和验证方法,同时评估刃和笔在滴眼剂配方。

Expermental

化学药品和试剂

纯药物Ketorolac氨丁三醇(卢平制药有限公司,普纳)和氧氟沙星(Litaka制药有限公司,普纳)获得样品作为礼物。所有其他化学试剂均为分析纯,购自默克的化学物质。

仪器及色谱条件

Aluminum-backed TLC板(20厘米×10厘米),涂上250μm层硅胶60 F254 (e .默克,达姆施塔特,德国)。板是由甲醇和水洗激活在110°C 5分钟。样本应用8毫米波段使用25μl Linomat V涂布(Camag Muttenz瑞士)配备了汉密尔顿注射器(Bonaduz、瑞士)。一个常数应用程序使用1μl / s的速度和两个乐队之间的空间是10毫米。

优化燃烧室流动相饱和时间是10分钟在室温(25°C±2) 60±5% RH。提升发展的板块进行二氯甲烷:甲醇:氨25%(6:3:1)作为流动相,在Camag 20×10厘米双槽玻璃室色谱运行8厘米。效果板块在当前发展干后的空气在空气干燥器的帮助下,在一个木制室有足够的通风。一个单向气流保持在实验室。光密度测量进行使用的狭缝尺寸6.00×0.30毫米,20毫米的s - 1文件的扫描速度和单色仪带宽20海里。每个跟踪扫描三次使用Camag效果扫描仪三世在307 nm反射吸收模式。

制备的标准解决方案

准确称取刃和笔(每50毫克)溶解在20毫升甲醇分别在50毫升容量瓶。解决方案进一步稀释与甲醇体积浓度1毫克ml-1的药物。标准库存解决方案进一步稀释100μg /毫升的甲醇浓度药物。

优化流动相

各种二进制移动阶段所示表1最初被用在一些试验中笔显示尾矿和尿酮体被发现保留因子接近1。三元流动相也试图减少尾矿笔。

滴眼剂配方的分析

分析,1毫升的销售制定包含刃(5毫克),笔(3毫克)稀释至10毫升甲醇生产浓度为0.5毫克/毫升为笔刃和0.3毫克/毫升。解决方案是用近10分钟,透过whatmann滤纸41。股票的解决方案是得到最终的浓度稀释50 ng /乐队为笔刃和30 ng /乐队。板是在一个优化的移动开发的阶段。分析重复了一式三份。赋形剂的可能性,分析研究了干扰。

方法验证

TLC方法的验证是按照我的指导方针(29日)使用以下参数:

线性和范围

校准曲线是准备使用一个标准的解决方案包含50μg /毫升和30μg /毫升甲醇分别刃和笔。六个浓度被发现在TLC板获得的最终浓度范围25 - 75 ng /乐队(刃)和15-45 ng /乐队(笔)。每个解决方案应用三次板,每个浓度的平均峰面积为307 nm。这是策划针对相应的浓度,获得校准曲线。残差的药物策划对分析物的浓度来确定线性方法。

精度

系统精度是由六个重复应用程序的标准解决方案包含50 ng /乐队为笔刃和30 ng /乐队。方法的精密度成立于重复性,盘中和Interday研究。重复性研究应用执行的标准解决方案包含50 ng /带刃和30 ng /带笔分别(代表100%的测试浓度)六次,TLC板发展紧随其后。每一个解决方案是单独准备。

盘中精度评估通过分析标准药物解决方案测试浓度的100% (50 ng /带刃和30 ng /带笔)在同一天的三倍。每个解决方案应用六次。Interday精度的方法是通过重复检查一项研究在三个不同的日子和%为峰面积计算。

精度

方法的准确性进行了应用示例的方法(刃和笔组合在眼科的解决方案)一个已知数量的刃和笔标准溶液对应于80年,100年,和120%的标签要求添加了初始阶段的样品制备,混合,并分析了运行优化流动相的色谱图。%恢复计算每一层。

检测极限(LOD)和定量限度(定量限)

LOD分析物的浓度,得到信噪比3和10在定量限。LOD和被测量的大小确定定量限分析发现一个空白背景,计算信噪比刃和笔,发现一系列的解决方案,直到3得到的信噪比的定量限的LOD和10。

特异性

通过分析,确定该方法的特异性药物标准和样品。乐队的身份为刃和笔经确定峰纯度也通过比较的保留因子乐队与标准。

鲁棒性

小故意改变实验参数。这些包括时间从发现色谱和色谱扫描被+ 5分钟不同,Ultra-sonication混合物不一的时间+ 3分钟。盘子从不同批号。

结果与讨论

发达同时估计的效果方法刃和笔眼药水是简单和方便的常规分析两种药物。

优化的色谱条件

该方法使用60 F254硅胶作为固定相,示例应用程序的形式的速度8毫米波段1μl / s, 10毫米之间的空间两个乐队,室饱和时间10分钟在室温下,色谱运行8厘米,20毫米的s - 1文件的扫描速度,检测波长为307 nm和20分钟的平均开发时间。

标准溶液的制备

这两种药物表现出相同的吸收率在307 nm表示图3被选为分析波长。

优化流动相

等二元流动相的色谱发展的氯仿:乙酸乙酯(三)、氯仿:甲醇(9:1)不成功是由于尾矿刃的笔和保留因子接近1所示表1。使用二氯甲烷:甲醇:氨25%(6:3:1)导致了密集、紧凑和解决。色谱图所示图4。

分析销售配方

试验结果如图所示表2被发现是99.14±0.813 w / w 9%和98.11±0.232% w / w分别为刃和笔。

线性和范围

线性方法的研究发现6中药物浓度范围的25 - 75 ng /乐队和15-45 ng /区间分别刃和笔。校准曲线中找到图5和图6被发现是线性的。残差没有显示的积极或消极的价值观和随机分布的回归函数所示图7。这证明了线性的方法。发现这些药物的相关系数接近1.00意味着线性的方法。提出了线性数据表3。

精度

结果的系统精度,重复性,盘中的研究和inter-day精度研究显示所示表4 - 6。%为峰面积在6后续注入相同的标准溶液的药物并不指示系统精度超过2%。相对标准偏差后的峰面积百分比应用六个独立的解决方案相同的浓度小于2%。这种证明方法的精度。

精度

该方法的回收率激增后,申请销售制定标准这两种药物被发现99.74 - -99.95% (表7)。

灵敏度

所示的灵敏度的方法表8被证明的下限检测0.077/0.2165 ng /乐队(刃/笔)和定量限度0.2357/0.656 ng /乐队(刃/笔)。

特异性和鲁棒性

所示的灵敏度的方法表8被证明的下限检测0.077/0.2165 ng /乐队(刃/笔)和定量限度0.2357/0.656 ng /乐队(刃/笔)。

特异性和鲁棒性

%的低价值后,峰面积RSD为做深思熟虑的小方法参数的变化表示方法的鲁棒性(表9)。所示的r值表1大于0.99意味着峰纯度分析物。从高峰纯洁和缺乏药物之外的山峰证明了该方法的特异性。

该方法利用简单的流动相。相比其他色谱方法该方法经济报道。因此它可以用于常规分析的两种药物剂型相结合。

结论

发达的薄层色谱技术同时测定尿酮体和笔验证精度,专一性、健壮性、准确性、定量、检测极限的极限。人们发现它符合所有验证参数。统计分析证明,该方法适用于分析刃和笔原料药和眼科的配方没有任何辅料的干扰。

Acknowlegement

作者为女士们,感谢现代药学院苎麻和Anchrom实验室、孟买提供设施的研究工作。作者也承认卢平制药有限公司,Litaka制药有限公司提供礼物样本的药物进行分析。

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