免疫调节的影响平菇(侧耳属sajor-caju)提取Balb / c小鼠

文摘

侧耳属sajor-caju(平菇,PSC)广泛用于烹饪,由于它的各种对人体健康的好处。然而,没有研究已经报道了其immunomodulating属性。栽培蘑菇粉用于热水使用索氏萃取技术。PSC被提取到CMC和准备分成3组:0.2克/公斤,1克/公斤,2克/公斤。Balb / c小鼠口服每日连续21天。治疗的老鼠与不同浓度的PSC显示增加人口的CD3 +、CD4 +, CD3 + / CD8 +, CD14 + 19 +细胞和CD。有趣的是,PSC-treated老鼠表现出显著增加CD3 + CD4 +、CD19 +细胞。最重要的是,老鼠治疗PSC显示提高CD4 + / CD8 +比值;这表明潜在immunostimulating PSC的活动。此外,任何物理变化和死亡率从PSC-treated老鼠可探测到的迹象。 The results suggest that PSC may improve general immune status when consumed consistently as a daily food option.

关键字

侧耳属sajor-caju、平菇、免疫调节、淋巴细胞Balb / c小鼠

介绍

免疫调节和它的前景对人类健康存在自古以来。其确切作用效果几乎没有理解尽管广泛实践。化合物,如蛋白质、多肽、多糖在免疫调制剂通常发现他们的反应对免疫系统是至关重要的调控或显示主机响应的特定方面(1]。基本上,这些免疫调制剂提高身体的自然抵抗感染(2]。的活性免疫调制剂不仅是促进免疫细胞还规范化当免疫系统激活。因此,它是一个代理维护和调节系统的现有平衡(1,3]。执行这些活动主要是通过吞噬作用刺激,刺激淋巴细胞,细胞免疫功能增强(4]。因此,植物和草药自然免疫调制剂已经获得伟大的优先级保持健康检查以及提高免疫系统。最近,许多都采取了理解常用烹饪植物在日常饮食和高声称药用价值对各种疾病和疾病(5]。

蘑菇有悠久的历史,作为一种食物来源科学传统,也因其药用价值而受到称赞。蘑菇被认为是健康食品,因为他们是低热量,脂肪,必需脂肪酸,富含植物蛋白、维生素和矿物质(6- - - - - -9]。此外,蘑菇具有各种疗效即抗菌、抗病毒(10]。抗癌(11]。降低胆固醇水平(12和也immunomodulating效应13,14]。

灰平菇或科学上称为侧耳属sajor腰果(PSC)是一种可食用的蘑菇在热带地区常见。这种可食用的蘑菇是假定拥有相当大的重要性在人类饮食富含非淀粉碳水化合物,膳食纤维,β-glucans、矿物质和维生素b和脂肪含量较低。(15)由于这些营养价值,PSC已经商业化种植的满足高需求尤其是食品和营养食品行业。(16这个PSC)的营养价值,还拥有各种重要的药用价值。最近的研究表明,PSC具有抗氧化和抗癌特性17),有一个潜在的调节免疫系统。(18]然而,到目前为止还没有进行此类研究的免疫调节特性这蘑菇在体外动物模型。本研究调查了热水提物的免疫调节效应的灰色平菇、PSC蘑菇常见在马来西亚通过评估其对淋巴细胞亚群的影响Balb / c小鼠和细胞因子水平。

材料和方法

化学物质

在目前的研究中,使用以下试剂:RPMI 1650媒介购买从西格玛化工有限公司(美国);羧基甲基celulose (CMC)购买从西格玛化工有限公司(美国);磷酸缓冲盐,PBS(美国Amresco);表面标记抗体PerCP CD3、FITC CD4、PE CD8、FITC CD14和FITC CD 19从BD PharmingenTM购买(美国)。

制备PSC中提取

培养干蘑菇获得国家洋麻纤维和烟草委员会的马来西亚。蘑菇是地面和粉和热水使用渗透和索氏提取技术。然后提取的解决方案是冻干成冻干粉末形式。冻干提取当时暂停CMC(0.5%粘度)和准备进入3不同浓度即0.2克/公斤,1克/公斤,2克/公斤。

动物和实验设计

雄性Balb / c小鼠(年龄6 - 8周;20-25g重量)被用在这个实验中。聚苯乙烯的笼子里的老鼠被安置一个气动的房间。所有的动物都维持在动物房和自来水被随意。动物们适应实验前1星期。老鼠被分为5组。治疗(对照组);CMC溶液在0.3毫升/小鼠每日剂量(车辆),0.2克/公斤PSC, 1克/公斤PSC PSC和2克/公斤。动物口服美联储使用填喂法每日21天。预处理和后处理血清收集来自所有组小鼠在实验时间。

器官和体重

预处理和后处理的身体重量的动物都记录下来。在研究结束时,老鼠被颈椎脱位牺牲。脾脏被切除,重,放在无菌15毫升离心管1毫升rpmi - 1640中再储存在4°C作进一步的分析。

单个细胞悬液的制备

每个脾放在无菌文化板块和被压缩在两个无菌玻璃幻灯片。然后从组织均质悬挂收集板和过滤单元过滤器70μm (BD猎鹰™)到一个新的无菌离心管。管是在1500转离心5分钟10°C。上层清液被丢弃,小球resuspended 1毫升的PBS。细胞计数进行使用hematocytometer总共5×105细胞制备和整除的RPMI 100μl流式细胞仪圆底管。

通过流式细胞术脾T淋巴细胞亚群测定

脾细胞被各自的表面染色标记即PerCP CD3抗体⁺,FITC CD4⁺、PE CD8⁺、FITC CD14⁺和FITC CD19⁺。在染色过程中,样本在黑暗中孵化面积20分钟在4°C。后,1毫升PBS的样本被停职,混合并再次离心。在仔细吸气上层清液,染色细胞resuspended 500μl RPMI细胞被储存在4°C,在黑暗中过夜。样品使用FACSCantoTM流式细胞仪进行分析识别淋巴细胞细胞分布子集。

统计分析

数据被表示为意味着±SD来自不同团体的每一个鼠标。实验进行了一式三份。统计分析进行了使用Wilcoxon W测试和曼Whitney U测试由社会科学统计程序(SPSS) 20.0版。差异视为具有统计学意义,p值低于0.05 (p < 0.05)。

结果

PSC提取对体重的影响

每日口服PSC提取物21天没有导致死亡。没有中毒的迹象被发现证明了终端的身体重量的变化以及身体重量监测预处理和后工序(图1)。分析小鼠和治疗后的身体重量显示PSC没有显著差异,因此展品少影响体重。

PSC提取物对细胞亚群分布的影响

老鼠和PSC管理提取显示增加淋巴细胞亚群(CD3百分比⁺/ CD4⁺,CD3⁺/ CD8⁺,CD19⁺和CD14⁺管理与不同浓度的PSC提取(后)图2所示模拟)。结果表明CD3的显著增加⁺/ CD4⁺和CD19⁺当比较治疗组细胞子集。CD3 PSC-treated老鼠也显示增加⁺/ CD8⁺和CD14⁺尽管增加的百分比不显著。有趣的是,CD3的数量⁺/ CD4⁺,CD3⁺/ CD8⁺,CD19⁺和CD14⁺在治疗小鼠显示最高的种群子集与0.2克/公斤的PSC管理时提取。最重要的是,PSC-treated组显示显著增加CD4的比率⁺/ CD8⁺细胞(表1)。

讨论

食用蘑菇通常用于烹饪或替代疗法可能会对健康造成重要的影响,甚至在治疗疾病。先前的研究显示,许多物种的食用菌已经表现出免疫调节活动19]。这可能是由于存在许多真菌多糖等化合物(主要是β-和一些α-glucans),蛋白聚糖和蛋白质,被广泛报道的免疫调节能力和活动(1]。最近,一直注意膳食成分对多种生理活动。灰平菇在马来西亚或PSC广泛种植和消费因其可口的味道和营养属性(16]。先前的研究显示,重大的多重影响的PSC治疗各种疾病(11,13,14,10]。然而,到目前为止,没有具体研究报告在PSC的免疫效果。披露其免疫学特性的重要性将启动各种新的应用程序,包括增值食物或营养补充剂。

在目前的工作中,我们研究了影响水提物的口服PSC的体内模型。口服PSC表明Balb / c小鼠治疗PSC提取显示某些淋巴细胞亚群的显著增加。百分比的重要性和辅助T细胞(CD4细胞的比例⁺)和细胞毒性T细胞(CD8⁺)的人口已经成为重要的在确定免疫调节的平衡状态和响应的稳态固有免疫系统(20.]。之前的研究表明,一些食物来源为例从牛肽,大豆和乳清蛋白具有那些能力增加CD4的百分比⁺细胞或CD4⁺/ CD8⁺比(21- - - - - -23]。流的脾细胞CD3仪分析⁺/ CD4⁺抗体的研究显示显著增加辅助T细胞数量在所有治疗组比对照组(图2一个)。然而,在CD3没有显著增加⁺/ CD8⁺从PSC-treated老鼠细胞人口可以观察到;尽管小鼠接受0.2克/公斤,1克/公斤的PSC提取证明高细胞毒性T细胞的人口相比,对照组(图2 b)。鲁贝尔等人那里找到对应动物对待灵芝选择性报道CD3的人口减少⁺和CD8⁺在脾细胞(24]。最重要的是,这项研究表明CD4显著增加⁺/ CD8⁺在所有PSC-treated组织细胞。

蘑菇的真菌细胞壁是由甲壳素,β-glucans和mannan-containing糖蛋白25]β-glucan,一个共同的蘑菇多糖已被描述为一种有效的免疫调制剂与特定活动T细胞和抗原递呈细胞如单核细胞和巨噬细胞1]。巨噬细胞、树突细胞(dc)和B淋巴细胞的主要细胞类型是CD4参与外源性抗原的表达⁺T淋巴细胞。所有这些细胞表达受体即表面免疫球蛋白(slg) B细胞(26(货代)[],Fc受体27),以及不同的甘露糖受体(夫人)巨噬细胞和树突细胞(28,29日)抗原的摄取,调解(30.)允许表达的抗原。这一研究获得的结果表明PSC-treated老鼠产生明显高于B细胞数量。然而,CD14⁺巨噬细胞也表达的细胞主要DCs在PSC-treated老鼠发现表达略高。先前的研究表明,β-glucan也刺激单核细胞和巨噬细胞的增殖和强大的造血活动31日,32]。柴田等人报道,β-glucan参与巨噬细胞形态学的改变和增加了磷酸酶活性和脂多糖(LPS)刺激没有生产(33]。最近的证据也表明,蘑菇或β-glucan调节促炎细胞因子的生产(24,34,35]。

总之,本研究表明,PSC有潜力流感增强体液和细胞宿主的免疫系统的组件。此外,积极的免疫调节,PSC最有可能归因于辅助T细胞的刺激;表明通过提高CD4细胞的比例⁺/ CD8⁺细胞。也有显著的淋巴细胞百分率下降的模式亚种群随着治疗剂量的增加可以解释最佳剂量及其功效。因此,PSC可能在最优消费时提高常规免疫功能部分,并定期日常食品的选择。

确认

我们要感谢实验室文化的员工,健康科学学院和颅面科学实验室,他们贡献的牙科学院的科学研究。本研究在经济上支持交付卓越科研补助金(顶点)从1002年马来西亚理科大学/ PPSK / 910314。

引用

1. Tzianabos AO。多糖免疫调制剂治疗药物:结构方面和生物功能。ClinMicrobiol启2000;13 (4):523 - 533。
2. Patwardhan B, Kalbag D, Patki PS, Nagasampagi英航。搜索的免疫调节因子——审查。印度药物。1990;28 (2):56 - 63。
3. 宫,Saxena R, Saxena RP, Saxena KC,斯利瓦斯塔瓦V,经脉,JS。免疫刺激剂的活动Nyctanthes arbor-tristisl . J Ethnopharmacol。1994;42 (1):31-37。
4. 亚太区VK Shukla年代,金正日m .植物天然免疫调制剂的潜在来源。雷竞技苹果下载评价在环境科学和生物/ Technology.2012;1卷。
5. 露西的。的影响PleurotusSajor-caju饮食对性能和生化参数在实验老鼠。J减轻食品科学》2011。
6. Agrahar-Murugkar D, Subbulakshmi g .食用野生蘑菇的营养价值来自梅加拉亚邦的Khasi山。食品化学,2005;89 (4):599 - 603。
7. Sanmee R,戴尔B, Lumyong P, Izumori K, Lumyong美国流行的野生食用菌的营养价值从泰国北部。食品化学,2003;82 (4):527 - 532。
8. 曼齐P,逐渐减小,Pizzoferrato l .蘑菇的营养价值在意大利广泛使用。食品化学。2001:73 (3):321 - 325
9. 曼齐P, Gambelli L,马可尼年代,Vivanti V, Pizzoferrato L .食用菌营养:一个跨物种的比较研究。食品化学,1999;65 (4):477 - 482。
10. Breene WM。专业蘑菇的营养和药用价值。J食品Prot。1990;53:883 - 894。
11. Lindequist U, Niedermeyer TH, j WD。mushrooms.eCAM药理的潜力。2005:2 (3):285 - 299。
12. 弗吉尼亚州Aletor成分研究食用热带种蘑菇。食品化学,1995;54 (3):265 - 268。
13. 罗文新泽西,史密斯我,沙利文r .蘑菇葡聚糖免疫调节活动,polysaccharide-protein复合物在动物和人类(审查)。Int J地中海Mushrooms.2003;5:95 - 110。
14. 茂杰,曹国伟GR,吴KT次方。methanolic提取物的抗氧化特性的几个耳朵蘑菇。J Agr食品化学。2001;49 (11):5461 - 5467。
15. Strmiskova G、F Strmiska Dubravicky j .平菇的矿物成分。食品/ Nahrung。1992:36 (2):210 - 212。
16. Wan Rosli WI, Solihah MA。影响的Pleurotussajor-caju(PSC)身体和知觉的牛肉馅饼的属性。Int食品Res j . 2012;19 (3):993 - 999。
17. Finimundy TC, Gambato G,丰塔纳R, Camassola M,萨尔瓦多,莫拉,S。,等。水提取的Lentinulaedodes和Pleurotussajor-caju表现出较高的抗氧化能力和有前途的体外抗肿瘤活性。减轻杂志2012;33 (1):76 - 84。
18. Carbonero呃,露丝AC、Setim CF Utrilla P, Galvez J,席尔瓦EVD, et al。化学和生物特性的高度支化ß-glucan可食用的蘑菇Pleurotussajor-caju。碳水化合物聚合物。2012;90 (2):814 - 819。
19. Borchers,萨•,我敏锐的CL,迈耶斯陆地格什温。蘑菇的免疫生物学。ExpBiol医学。2008;233 (3):259 - 276。
20. 普雷齐奥西Dhur,罗•P, P, Hercberg s .胸腺淋巴细胞亚群,淋巴结和脾脏缺铁和恢复的老鼠。J减轻。1991;121 (9):1418。
21. Gauthier科幻,Pouliot Y, Saint-Sauveur d .免疫调节肽的酶法水解得到的乳清蛋白。Int乳制品j . 2006;16 (11):1315 - 1323。
22. 郭P,朴X, y Ou D, D,郝表征大豆蛋白的抗原特异性ß-conglycinin及其对小鼠生长和免疫功能的影响。拱动物减轻。2007;61 (3):189 - 200。
23. 金SK,金次,Byun HG,南KS, Joo DS, Shahidi f .隔离和表征的抗氧化肽水解明胶的阿拉斯加狭鳕皮肤。J Agr食品化学。2001;49 (4):1984 - 1989。
24. 鲁贝尔R, Dalla圣诞商品,Bonatto SJ,贝洛年代,费尔南德斯LC, Di贝尔纳迪R, et al .药用蘑菇Ganodermalucidum(草地:Fr)岩溶。在老鼠身上triggersimmunomodulatory效果和减少一氧化氮合成。J地中海食物。2010;13 (1):142 - 148。
25. Catalli, Kulka m .甲壳素and-glucan多糖的免疫调制剂气道炎症和过敏性疾病。最近的专利内分泌、代谢及免疫药物发现。2010;4 (3):175 - 189。
26. Lanzavecchia a抗原T细胞和B细胞之间的相互作用。Nature.1985;314:537 - 539。
27. Manca F, Fenoglio D,水虎鱼GL Kunkl, Celada F抗原/抗体的效果比巨噬细胞摄取、处理和显示的T细胞抗原和多克隆抗体。J Exp。1991;173 (1):37-48。
28. 江W, Swiggard WJ, Heufler C,彭M,殿下,斯坦曼RM,压力MC。表达的受体- 205年12月由树突细胞和胸腺上皮细胞参与抗原处理。Nature.1995;375:151 - 155。
29. 摘要达涅利C部Sallusto F,内堂,Lanzavecchia a树突细胞使用macropinocytosis和甘露糖受体大分子集中在主要组织相容性复合体II级室:downregulation由细胞因子和细菌的产品。J Exp。1995;182 (2):389 - 400。
30. Lanzavecchia a受体介导的抗原吸收及其影响类II-restricted T淋巴细胞抗原表达。安Immunol牧师。1990;8 (1):773 - 793。
31. Patchen ML, Lotzova大肠调制葡聚糖的小鼠造血作用。ExpHematol。1980:8 (4):409。
32. 里奇SJ, Di Luzio NR在酵母聚糖网状内皮组织的刺激的识别代理。美国的杂志——遗产内容。1961;200 (2):297 - 300。
33. 柴田Y,本田,正义JP,范·斯科特先生,中村RM, Myrvik QN。Th1佐剂N-acetyl-D-glucosamine聚合物让Th1免疫力但下调Th2免疫对分枝杆菌蛋白质(MPB-59) interleukin-10-knockout和野生型老鼠。正Immun。2001;69 (10):6123 - 6130。
34. 吴SJ, Lu TM赖MN, Ng中尉免疫调节活动的药用蘑菇Grifolafrondosa提取及其生物活性成分。美国J中国医学。2013;41 (1):131 - 144。
35. 金年。免疫调节活性水提取物的药用蘑菇纤孔菌属obliquus。Mycobiol。2005;33 (3):158 - 162。