体外愈伤组织诱导和愈伤组织和种子提取物的抗菌活动种草L

文摘

在这项研究中,提取黑种草种子及其诱导的愈伤组织进行了对四个标准细菌抗菌活动(杆菌subtilus、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和绿脓杆菌)和两个真菌(白色念珠菌和黑曲霉)用琼脂扩散法。诱导愈伤组织,下胚轴和子叶外植体从n .漂白亚麻纤维卷在MS培养基培养补充不同类型和不同浓度的生长调节剂。外植体的n .漂白亚麻纤维卷显示快速启动的愈伤组织两周后在媒体补充乙酰天冬氨酸女士为1.0 mg / l和5.0 mg / l的分别而缓慢的愈伤组织诱导率时观察到的下胚轴生长在媒体补充女士5.0 mg / l 2, 4 - d和0.5 mg / l 2, 4 - d,子叶外植体。NAA在这项研究中被发现的激素调节适合n .漂白亚麻纤维卷两种外植体使用。Methanolic提取种子和愈伤组织的n .漂白亚麻纤维卷显示活动对大肠杆菌抑菌圈(21毫米)和(23毫米)分别观察和抗真菌活性的种子和愈伤组织中提取。青霉素的抗菌活性,测定庆大霉素对细菌和测试与测试提取物的抗菌活性的n .马唐种子和愈伤组织。Methanolic提取显示对大肠杆菌抗菌活性高于庆大霉素和青霉素µg 10点/盘。植物化学的种子和愈伤组织的筛选提取表示存在的次生代谢产物,如生物碱、类黄酮和单宁可能负责测试提取物的抗菌活性。

关键字

抗菌活性,愈伤组织诱导黑种草,植物化学的分析。

介绍

黑种草l .属于毛茛科。这是一个草本几个世纪以来工厂,用于治疗各种疾病包括传染病(1]。

研究人员越来越多地将注意力转向天然产品寻找新的导致开发更好的药物对病毒和微生物感染(2]。n种子和/或其组成已报告证明许多药理活性。抗氧化、抗菌和抗真菌的活动已被许多研究人员研究[3- - - - - -9]。n .马唐的种子有很长的历史用于食品和医药用途,没有不良的副作用已报告在推荐剂量使用时(10]。研究人员认为,它的一个组成“nigellone”证明是一种有效的预防剂在哮喘和支气管炎疗效较高的儿童比成人(11]。n马唐种子提取物可能对脑缺血的治疗效果(12]。

Yasni等人的抗菌活性黑孜然(n .漂白亚麻纤维卷)提取物抑制致病性和腐败细菌的增长,乙醇提取是最好的提取抑制细菌的生长,而水和己烷提取物都少有效抗菌药物(13]。

Kamal等人研究了抗菌活性的n .种子,马唐各发芽阶段,对五个致病性细菌抵抗抗生素可用,他的研究结果表明,该活动依赖于生长阶段而不是剂量,他们得出的结论是,n .马唐种子有温和的抗菌活性14]。

Acharyya等人筛选的植物化学的粗甲醇提取,发现含有酚醛树脂和黄酮类化合物,这些化合物具有抗菌活动曾被报道。Zahra等人研究了原油提取phyto-constituents n .种子马唐对两个G + ve(杆菌subtilus、金黄色葡萄球菌)和两个G-ve株细菌(大肠杆菌、Pasturella multocida)和真菌(黑曲霉)菌株之一。植物成份显示不同程度的抑制对所有四种细菌和真菌。类黄酮对四个测试显示抑制细菌最大抑制对b . subtilus(29毫米)。生物碱对G + ve显示抑制,而鞣酸对G-ve显示抑制,对真菌抑制单宁酸显示出相当大的价值(18毫米)(15,16]。

兰达等人研究了粗甲醇提取物格拉愈伤组织培养的物种(n .薄荷:damascena: hispanica: integrifolia和n .漂白亚麻纤维卷)的抗菌活性。生长抑制决心在G + ve和G-ve菌株以及酵母。测试结果表明,提取的愈伤组织表现出显著的抗菌活性,尤其是对b的仙人掌,金黄色葡萄球菌和epidermidis。格拉与其他物种相比,n . hispanica的愈伤组织培养是最有效的反对在他们的研究中使用的微生物。Purkayastha等人发现初步植物化学的分析证明大部分的植物化学物质的存在包括皂苷、强心苷、类固醇、萜类化合物、类黄酮和单宁,可Juniperus osteosperma和种草17,18]。

哈桑et al。(2013)表明,甲醇提取物浓度的100毫克/毫升的黑种草种子有一个显著的敏感性对某些致病性菌株(绿脓杆菌,链球菌pyogene Klebseilla肺炎和变形杆菌寻常的)(19]。

材料和方法

黑种草,微生物药物和参考:

黑种草种子在喀土穆州购买从不同的当地市场。本研究中使用的标准微生物:芽孢杆菌subtilus(8236年国家反恐怖主义中心的),金黄色葡萄球菌(写明ATCC 25923)、大肠杆菌(写明ATCC 25922),铜绿假单胞菌(写明ATCC 27853),黑曲霉(写明ATCC 9763)和白色念珠菌(写明ATCC 7596)。

测试得到了生物的微生物学、药用和芳香植物研究所,喀土穆。

本研究参考药物用于氨苄青霉素(10μg /盘)和庆大霉素(10μg /盘)敏感性从Himedia光盘,并从美籍西班牙人庆大霉素50μg /毫升,中国。

种子表面消毒和发芽:

n是马唐的种子表面消毒浸泡在50%次氯酸钠(0.5%游离氯)和2滴Tween-20 5分钟,并在无菌蒸馏水冲洗3 - 5次。

表面消毒的种子n直接马唐女士在萌发培养基培养(20.]。基础培养基。n种子在孵化马唐25±20°C下凉爽的白色荧光灯和16光周期(4 - 5周)。

愈伤组织诱导:

下胚轴和子叶作为外植体黑种草在这项研究。使用MS培养基。两种类型的生长素(2,4 - d、NAA)分别使用不同浓度(0.0控制,0.05,0.5,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,6.0,和7.0)mg / l,评估其影响外植体的愈伤组织诱导黑种草。

每个外植体消毒、使用无菌手术刀切成2 - 3毫米的块。四块在每个瓶包含接种无菌培养基(MS培养基)与不同浓度的生长调节剂。文化是培养8周在黑暗中在25±20 c和数据记录每两周。

植物粗提物的制备:

粗粉植物材料详尽为4小时与石油醚索氏提取器。石油醚提取物用滤纸过滤和蒸发减压30°C下使用一个旋转蒸发器装置(Rota-vap)。提取的植物又风干和改装,用甲醇提取。methanolic提取用滤纸过滤和蒸发压力减少使用Rot-evap 65°C。

愈伤组织粗提物的制备:

这样做是在一个时尚类似植物萃取除老茧起初干使用冷冻干燥机,然后通过冷冻干燥粉和两种不同的溶剂提取,石油醚和甲醇在索氏仪器。

细菌悬液的制备:

一毫升整除的肉汤培养24小时测试生物体无菌分布在营养琼脂斜坡和孵化24小时37°C。细菌生长收获,与无菌生理盐水冲洗掉,最后悬浮在100毫升生理盐水生产包含关于暂停(108 -109)集落形成单位/毫升,平均每毫升的可行的生物数量的股票暂停决心通过表面可行的计算技术(21]。暂停在40°C到存储在冰箱里使用。

制备真菌悬架:

真菌文化保持Sabouraud葡萄糖琼脂,孵化25°C为4天。真菌生长收获,用无菌生理盐水洗净,悬浮在100毫升无菌生理盐水。暂停是储存在冰箱里,直到使用。

抗菌活性提取物的体外测试:

cup-plate-agar扩散法(22被采用。消极的控制涉及到的相应的溶剂代替提取物分别进行。孵化后合成生长抑制区域的直径测量。的意思是值列表。对真菌生物营养琼脂,Sabouraud使用葡萄糖琼脂。

植物化学的初步筛选:

一般植物化学的筛查所有提取物进行了使用方法描述墙et al ., Sofowora Harborne,马丁内斯和瓦伦西亚,一些小的修改(23- - - - - -26]。

结果与讨论

愈伤组织诱导:

结果(表1)表明,在所有浓度的NAA, 1 mg / l给最高的从下胚轴愈伤组织诱导外植体,而5.0 mg / l显示最高从子叶愈伤组织诱导外植体。生长素的2,4 - d为0.05 mg / l没有活动在愈伤组织诱导下胚轴外植体。最高的愈伤组织开始从下胚轴外植体获得5.0 mg / l 2, 4 - d,而0.5 mg / l 2,4 - d显示最高的愈伤组织开始从子叶外植体。奎布斯等人从不同品种的愈伤组织获得n利用MS、B5媒体马唐补充0.1 mg / l激动素和2,4 - d或NAA(1.0或3.0 mg / l),愈伤组织诱导显示品种之间的差异。阿尔安尼发现最好的愈伤组织生产从n漂白亚麻纤维卷叶外植体在女士中补充了1.0 mg / l 2, 4 - d和1.5 mg / l激动素。(表2 - 3)表示,生长素NAA有更多的影响愈伤组织诱导从n下胚轴和子叶外植体比生长素2,4 - d (27,28]

抗菌活动六从种子和愈伤组织中提取得到的黑种草对四种细菌和两种不同的真菌,以抑制带的直径用琼脂扩散法所示(表4)。n .马唐种子的石油醚提取物对微生物测试而没有活动methanolic提取的n .种子和马唐愈伤组织被发现具有显著的抗菌活性。百里酚和Thymoquinon存在n .种子马唐的甲醇可溶部分石油,所以他们将在甲醇溶剂提取[29],这也许可以解释石油醚提取物的无效的原因。(数字1 - 4)表明,所有的methanolic提取种子和愈伤组织表现出对大肠杆菌的抗菌活性与最大抑制带methanolic提取物(23毫米)的下胚轴愈伤组织(NAA)。几乎没有观察到抑制对金黄色葡萄球菌和抑制观察对铜绿假单胞菌和只有methanolic提取物的子叶愈伤组织(2,4 - d)对b . subtilus抑制。相反Zuridah等人,哈立德等人发现methanolic n .马唐种子的提取物显示最大抑制对金黄色葡萄球菌和b . subtilus但大肠杆菌和绿脓杆菌弱敏感,结果发现大肠杆菌显示的最大灵敏度提取(30.,31日]。

我们的结果同意,通过兰达et al .,他们的研究结果表明,愈伤组织的提取测试方面表现出显著的抗菌活性(32]。

比较的结果中给出(表4 - 5)显示,methanolic提取的n .马唐种子,下胚轴(NAA)和子叶(2,4 - d)是更有效的比庆大霉素10μg /盘,而氨苄青霉素10μ/盘显示明确耐药大肠杆菌。这些结果证实的效率methanolic提取物对大肠杆菌的n,诱导愈伤组织。抗真菌活性的调查显示,没有一个所有提取显示活动对真菌进行测试。

植物化学的筛选:

结果(表6)代表植物化学的初步筛选的结果n .种子和愈伤组织methanolic马唐提取生物碱、类黄酮和单宁。种子和愈伤组织存在falvonoids显示积极的结果。种子和子叶的methanolic提取物(NAA)愈伤组织表现出生物碱的存在。只有种子methanolic提取单宁的存在显示积极的结果。我们的发现同意Kamal等人发现提取的n在不同马唐的种子萌发阶段,揭示了生物碱的存在,单宁和类黄酮。许多其他的研究发现,n .马唐的种子含有活性化合物如:固定和精油,蛋白质、生物碱、以及丰富的黄酮类化合物,单宁和皂苷(18,14]。

本研究得出的结论是,n及其派生马唐愈伤组织有一个潜在的生产活动与抗菌活性化合物,药物相比,参考。n .马唐的methanolic提取种子,下胚轴(NAA)愈伤组织和子叶(2,4 - d)愈伤组织更积极比庆大霉素10μg /阀瓣对大肠杆菌。

结论

尽管许多研究已经出现在植物的抗菌活性及其次生代谢物,很少研究愈伤组织中导出体外。在这项研究中,主要的重点是能够使用的体外抗菌活性的愈伤组织。

1。媒体补充生长素NAA女士更适合诱导愈伤组织的黑种草,4-D.2

2。下胚轴的合适的外植体愈伤组织的形成n漂白亚麻纤维卷。

3所示。甲醇是一种合适的溶剂提取的活性化合物n马唐及其诱导愈伤组织。

4所示。本研究的结果表明,n .漂白亚麻纤维卷及其派生的愈伤组织潜在的生产活动与抗菌活性化合物,用参考药物相比。

5。这一研究获得的结果表明利用植物生物技术的技术能力对发展所需的生物活性代谢物提取植物愈伤组织培养而不是使用完整的医药用途。

6。n .愈伤组织提取物显示活动高于马唐methanolic种子提取物对大肠杆菌。因此,在开发新的抗生素可以强调生物技术方法

7所示。进一步的分离纯化工作的主动原则提到植物及其愈伤组织将把新的光中药新药的开发当地使用广谱抗菌剂。

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