体外自由基清除和膜稳定的活动Paederia麻叶子

文摘

Paederia麻是一个本机孟加拉工厂,用于治疗各种疾病的民间传说。在这项研究中,Paederia麻提取物的抗氧化潜力评估通过使用一系列的良好抗氧化试验系统。Paederia麻提取物清除DPPH自由基以剂量依赖的方式。提取也显示强大的自由基抑制活动产生的硝普酸钠作为一氧化氮自由基和过氧化氢。此外,Paederia麻提取物表现出温和的还原能力和强大的红细胞膜膜稳定活动在低渗的媒介。所有系统的提取物表现出显著的抗氧化活性进行了研究。清除活性氧(ROS)可能是由于大量的酚类化合物的提取。进一步的研究是必要的隔离和表征抗氧化剂中提取,可作为潜在来源的自然氧化应激和炎症性疾病的治疗。

关键字

Paederia麻、活性氧、抗氧化剂、DPPH、总抗氧化能力。

介绍

氧化应激在各种退化性疾病中起着至关重要的作用。细胞抗氧化系统受损的氧化应激和细胞不能充分清除自由基,可能造成进一步的破坏。因此,补充抗氧化剂将是有益的。目前,合成抗氧化剂的可能的毒性已经被批评。植物富含多种次生代谢物,如单宁、萜类、生物碱、黄酮类化合物等强大的抗氧化剂和显示不同的药理活性。普遍认为,经常食用植物的植物化学物质从蔬菜、水果、茶、和草药可能造成足够的抗氧化状态在各种疾病1,2]。茜草科的植物五大家族之一,包含611属和13143种迄今为止公认的(3]。大量的这个家庭的成员ethnomedicinally重要,展示了各种各样的生物活性。Paederia麻属茜草科的家庭,是一个攀登,草本,多毛的或非常光滑,细长的葡萄树分布几乎遍及孟加拉国(4]。Paederia麻已经广泛用于传统医学。据称,促进性活力,增加精子的数量和身体力量和产生一个青春的光芒5]。叶子被认为是一个好的治疗腹泻和痢疾和用作家庭治疗在康复期从急性疾病4]。叶子也用作湿敷药物来缓解腹部由于肠胃气胀和膨胀也用于治疗疱疹和耳痛4]。煎煮的叶子被认为是利尿剂。种子是有用的治疗痔疮和leucoderma [4]。整个工厂也在内部和外部同时用于风湿性疾病。一些调查也报道Paederia麻提取物显示有趣的生物活性。据报道(抗炎活动对carrageenan-induced老鼠爪子水肿6]。最近的报告表明,Paederia麻提取物是王亚南7和具有抗氧化活性8]。

我们正在进行的调查的一部分从孟加拉当地药用植物天然抗氧化剂9,10,11,12),本研究报告在体外Paederia麻提取物的抗氧化活性。评价抗氧化剂进行了一系列的活动在体外DPPH清除等化验分析,还原能力测定,没有清除试验,H₂O₂扫气分析、总抗氧化能力测定和红细胞膜稳定分析。

材料和方法

化学物质

DPPH (1 1-diphenyl 2-picryl hydrazyl),电视台(硝基蓝四唑)、柠檬酸(Trichloro乙酸)和氯化铁从西格玛化工有限公司获得美国。抗坏血酸是来自SD精细化学。Biosar,印度。过氧化氢(H₂O₂)是获得Qualigens精细化学品,孟买,印度。萘乙二胺盐酸盐是来自Roch-light有限公司,英国萨福克郡。钠硝基prusside得到从兰伯西实验室。莫哈里(,印度。从5月和支持者,获得了铁氰化钾达格南,英国。

植物材料

Paederia麻草药收集来自斯坦福大学的孟加拉国,Siddeswari校园,达卡2011年5月,经过身份验证凭证标本Abdul Ghani博士和教授是存入生药学实验室。

提取

shade-dried叶粗粉和提取乙醇的混合物:水(7:3比例)索氏仪器。溶剂完全被旋转蒸发器和粘性分泌物。这个粗提取液用于进一步调查潜在的抗氧化性能。

植物化学的筛选

提取的植物化学的筛选是使用以下试剂和化学物质:执行与Dragendorffs试剂,生物碱类黄酮使用Mg和盐酸;单宁与氯化铁和重铬酸钾溶液和皂苷产生泡沫的能力。胶测试使用Molish试剂和浓硫酸。

抗氧化活性测试

DPPH自由基清除活性

提取物的自由基清除能力的测定用DPPH。DPPH溶液0.004% (w / v)准备在95%乙醇(10]。乙醇提取Paederia麻混有95%乙醇的准备(5毫克/毫升)股票的解决方案。刚做好的DPPH解决0.004% (w / v)摄于试管和Paederia麻提取物添加随后连续稀释(1μg 500μg)每一个试管,这样最后的体积是3毫升10分钟后,使用分光光度计吸光度是阅读515海里(哈希4000 DU紫外-可见分光光度计)。抗坏血酸作为参考标准和溶解在蒸馏水,使原液浓度相同的(5毫克/毫升)。控制样品制备包含相同体积的没有任何抗坏血酸提取和参考。95%的乙醇作为空白。%的清除DPPH自由基测量通过以下方程:

% =清除活动(吸光度控制-样品的吸光度)/吸光度控制x 100

抑制曲线绘制的重复实验,用%表示意味着抑制。

一氧化氮自由基抑制试验

一氧化氮自由基抑制是由使用格里斯Illosvoy反应(10]。在这次调查,Griess-Illosvoy试剂改性用萘基乙二胺盐酸盐0.1% (w / v)而不是1-napthylamine (5%)。反应混合物(3毫升)含硝普酸钠(10毫米,2毫升),磷酸缓冲盐(0.5毫升)和Paederia麻提取物(320年10μgμg)或标准溶液(抗坏血酸,0.5毫升)在25°C孵化150分钟。孵化后,0.5毫升的反应混合物混合1毫升的磺胺酸试剂20%冰醋酸(0.33%)和允许站5分钟完成重氮化作用。然后,1毫升的萘基乙二胺盐酸盐是补充说,混合和允许30分钟25°C。粉色的发色团形成漫射光。这些解决方案的吸光度测量在540 nm相应的空白的解决方案。

清除过氧化氢的

修改方法基于鲁赫et al。(13)是用来确定提取的能力清除过氧化氢(14]。过氧化氢(43毫米)准备在磷酸缓冲盐(pH值7.4)。标准(抗坏血酸)和提取浓度的解决方案准备50到250 mM。整除的标准或提取的解决方案(3.4毫升)被添加到0.6毫升的过氧化氢溶液。反应混合物在室温下孕育了10分钟,在230 nm和吸光度测定。对于每个浓度,另一个空白样品用于背景减法。清除的百分比计算,如下所示

% H₂O₂清除=(吸光度控制-样品的吸光度)/吸光度控制x 100

还原能力

Paederia麻的还原能力是决定根据先前描述的方法(15,16]。Paederia麻提取物不同浓度(100μg - 1000μg)在1毫升蒸馏水混合磷酸盐缓冲剂(2.5毫升,0.2 M, pH值6.6)和铁氰化钾(K3Fe (CN) 6](2.5毫升,1%)。混合是在50°C的环境中20分钟。部分(2.5毫升)的三氯乙酸(10%)被添加到混合物中,当时在3000转离心10分钟。解决方案的上层(2.5毫升)与蒸馏水混合(2.5毫升),FeCl3(0.5毫升。0.1%)和吸光度测量在700海里。增加反应混合物的吸光度表示增加还原能力。抗坏血酸作为标准。

由phosphomolybdenum总抗氧化能力的测定方法

提取的总抗氧化能力评价了phosphomolybdenum前面描述的方法(17]。分析是基于减少开发的莫(VI) - Mo (V)的提取和后续形成绿色磷酸/ Mo (V)复杂酸博士0.3毫升提取结合3毫升的试剂溶液(0.6 m硫酸,28毫米磷酸钠和4毫米钼酸铵)。包含反应溶液被孵化的管子在950 c 90分钟。然后溶液的吸光度为695 nm使用分光光度计(哈希4000 DU紫外-可见分光光度计)对空白后冷却到室温。乙醇(0.3毫升)提取作为空白的地方。抗氧化活性是表示为抗坏血酸的数量的等价物。

膜稳定活动

红细胞悬液的制备

获得了全血与肝素化注射器从老鼠到心脏穿刺。血液和等渗缓冲溶液洗了三次(154毫米氯化钠)10毫米钠磷酸盐缓冲剂(pH值7.4)。血液是离心机每次10分钟3000 g。

低渗的solution-induced鼠红细胞溶血

膜稳定提取使用低渗的评估活动solution-induced鼠红细胞溶血(10]。测试样本由股票红细胞(RBC)暂停(0.50毫升)5毫升的低渗的溶液混合在10毫米(50毫米氯化钠)磷酸钠缓冲盐水(pH值7.4)包含提取(0.25 - 2.0毫克/毫升)或消炎痛(0.1毫克/毫升)。控制样品由0.5毫升的红细胞混合低渗的缓冲盐溶液。混合物被孵化在室温和离心机离心10分钟10分钟在3000 g和上层清液的吸光度测量在540海里。抑制溶血或膜稳定比例计算如下

%抑制溶血= 100 x [OD1-OD2 / OD1]

地点:

OD1 = hypotonic-buffered盐溶液的光密度

OD2 =光密度的测试样本在低渗的解决方案

结果

植物化学的筛选提取表明黄酮类化合物的存在,皂素、口香糖和单宁(表1)。

1-diphenyl-2-picrylhydrazyl DPPH(1)自由基清除活性Paederia麻了图1。的IC50值提取被发现是98.13μg /毫升而抗坏血酸的IC50 13.40μg /毫升。

抑制没有·释放可能部分归因于直接·清除活动。Paederia麻提取物降低亚硝酸盐的量产生的硝普酸钠的分解在体外(图2)。一氧化氮的植物提取物的清除是剂量依赖性的方式增加。的IC50值提取40.56μg /毫升,而维生素C的IC50值为13.04 (表2)。

我们的数据在测试提取物的还原能力表明适度减少属性。与其他抗氧化剂化验,Paederia麻提取物的还原能力是随着样本的数量的增加而增加。图3显示了Paederia麻提取物的还原能力相比,抗坏血酸。

H的清除₂O₂提取的维生素C和Paederia麻孵化后10分钟增加样品的浓度增加而增大。提取表现出较高的H₂O₂清除活动比维生素C浓度相似。的IC50值提取和抗坏血酸133.00μg /毫升99.66μg / mL,分别为(表2)。

总Paederia麻提取物的抗氧化能力,表示为相当于抗坏血酸的数量,所示图4。总抗氧化能力也增加剂量依赖性的方式。

Paederia麻的提取物的浓度范围0.50 - -2.0毫克/毫升显著保护大鼠红细胞膜对溶解引起低渗的解决方案(表3)。相比之下,消炎痛(0.10毫克/毫升)提供了一个重要的保护大鼠红细胞(RBC)的破坏性影响低渗的解决方案。

值是重复的实验和表示为平均值±标准差。

讨论

酚类化合物和黄酮类化合物表现出广泛的生物活性在活的有机体内和作为强抗氧化剂清除单线态氧分子和自由基18- - - - - -20.]。药用植物酚类化合物和黄酮类的良好来源。以前的报告表明,Paederia麻提取物预防β-carotene和亚油酸的氧化,抗氧化活动abt自由基清除实验系统[8]。在这个报告中,我们表明,Paederia麻叶萃取精华具有强大的抗氧化活性在其他在体外抗氧化试验系统,如DPPH自由基清除实验,减少权力,H₂O₂彻底清除试验、总抗氧化能力测定和膜稳定分析。

DPPH抗氧化测定主要主要是开发基于的观点存在的抗氧化剂,一个稳定的自由基,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl (DPPH)将使脱色(21]。DPPH自由基包含一个奇怪的电子,负责在515 - 517海里和吸光度也发展一个可见的深紫色。当DPPH接受一个电子捐赠的抗氧化化合物,DPPH使脱色,可定量测量吸光度的变化。Paederia麻活动清除DPPH (1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)自由基。这个活动增加了样品提取物的浓度增加。

一氧化氮是重要的炎症、癌症和其他病理条件22]。毒性和造成的损害没有••- 02乘以他们反应生成活性过氧亚硝基(•-OONO)导致严重不良反应与生物分子(22]。植物提取物可能属性来抵消的效果没有形成进而防止过多的有害影响人体没有生成。进一步清除活动也可以帮助逮捕链式反应由过剩代没有更多活性peroxynitrate (•-OONO)。抑制没有•可能部分归因于直接发布•Paederia麻提取物清除的减少亚硝酸盐的量产生的硝普酸钠的分解在体外。一氧化氮的清除Paederia麻提取是剂量依赖性的方式也增加了。

还原能力试验开发基于Fe3 +转换价转换在提取样本,作为潜在的抗氧化活性的重要指标(15]。抗氧化活性之间的直接联系,减少权力的某些植物提取物(早些时候报告了23,24]。减少属性通常与还原酮的存在已被证明能够发挥抗氧化作用,打破了自由基链通过捐赠一个氢原子24,25]。在我们的研究中,Paederia麻提取物的还原能力也增加了以剂量依赖的方式。

过氧化氢本身不是很活泼,但有时是有毒的细胞,因为它可能产生单线态氧(1 o2)和氢氧自由基,然后变得非常强大的氧化剂细胞(26,27]。因此,消除H₂O₂是非常重要的在细胞或食物抗氧化防御系统。膳食多酚保护哺乳动物细胞免受过氧化氢引起的细胞毒性,特别是与orthodihydroxy酚醛化合物结构如槲皮素、儿茶素、没食子酸酯、咖啡酸酯(28,29日和萜类化合物30.,31日]。因此,Paederia麻提取物的抗氧化成分可能可能参与消除H₂O₂。在我们的研究中,抗坏血酸和Paederia麻提取物清除H₂O₂浓度依赖方式。

phosphomolybdenum方法减少它工作的原理是:莫莫(VI)的(V)的抗氧化化合物可能形成一个绿色磷酸/ Mo (V)复杂[17]。这个绿色的磷酸/ Mo (V)复杂的发色团从而可以测量在最大吸收与分光光度计695海里。总抗氧化能力是通过增加Paederia麻提取物的浓度增加试验介质。Paederia麻提取物的总抗氧化能力表示为抗坏血酸的数量的等价物。

细胞的活力取决于细胞膜的完整性(32]。血红细胞接触有害物质如低渗介质和苯肼可能引起膜的破裂伴有溶血和氧化血红蛋白(32]。这种损伤红细胞膜将进一步呈现细胞更容易受到二次伤害通过自由radical-induced脂质过氧化(32]。类黄酮是有效的抗氧化剂保护人类从免费radical-induced红细胞氧化溶血(33]。建议与质膜蛋白质和类黄酮可以绑定能够穿透脂质双向层和改变膜流动性34,35]。因此,预计化合物membrane-stabilizing属性,应该提供重要保护细胞膜免受有害物质(33,34]。Paederia麻提取物的浓度范围0.25 - -2.0毫克/毫升显著保护大鼠红细胞膜对溶解引起低渗的解决方案相比,消炎痛(0.10毫克/毫升)。也观察到类似的膜稳定活动在先前发表的报告6]。

结论

植物Paederia麻包含各种植物成份乌索酸等三萜皂苷,epifriedelinol和无羁萜36]。常用药用通常是强有力的抗氧化剂有效对抗氧化损伤。乌索酸(3β-hydroxy-urs-12-en-28-oic酸),五环三萜系化合物,广泛存在于自然植物,也具有强烈的抗氧化活动(37)和预防炎症、高血糖、高脂血症和肝损伤31日]。本研究证明的有效性Paederia麻叶子提取物作为一种强有力的抗氧化剂在不同在体外抗氧化试验。然而,进一步的研究在Paederia麻叶子征集的前沿进展在这个领域将利用植物氾滥和医药用途。

确认

这个项目是由美国制药、斯坦福大学孟加拉国和作者感谢大学当局。

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