针黄菊离体芽的再生。(椴树科)。

摘要

针刺科草本植物是一种重要的药用植物，属椴科。本研究描述了该物种通过叶片外植体标准化的高效体外再生方案。叶片外植体在添加2,4- d (1.5 mgl-1)和NAA (0.2 mgl-1)的MS培养基上培养，愈伤组织诱导率为84.43%。在IBA (2.0 mgl-1)和TDZ (0.2 mgl-1)强化的MS培养基中，多芽(83%)形成。在含IBA (2.0 mgl-1)和Kn (0.2 mgl-1)的半强度MS培养基上生根效果较好(74%)。再生植株在培养室内驯化硬化后移栽至温室，成活率达81%。

关键字

Corchorus acutangulus，药用植物，在体外再生。

简介

微繁殖为药用植物的保护和大规模繁殖以及后续的开发利用提供了巨大的潜力。此外,在体外培养技术需要发展遗传转化和建立细胞悬液生产次生代谢产物。在这方面，利用组织培养技术进行无性繁殖是值得特别关注的，它是一种可能的替代方法，可以克服更传统技术的有限成功[1,2]。的物种,Corchorus acutangulus分布在河岸小气候区，有沙质土壤，也有阴凉条件下的不受干扰的地区[3]。本文介绍了从青苗中诱导愈伤组织、芽再生和生根所需的培养条件和植物生长调节剂的优化Corchorus acutangulus。

材料与方法

的年轻和健康的分枝的叶片段c . acutangulus用作外植体。它们是从雾室中盆栽培养的个体中收集的。为了表面杀菌，收集的未成熟叶片用自来水冲洗两次，然后用5%吐温- 20溶液处理5分钟，然后用自来水冲洗。为了消除真菌污染，外植体进一步用5%的抗生素(氨苄西林和利福平)处理30分钟，然后在无菌双蒸馏水中冲洗3次。此外，通过将外植体浸入0.1% HgCl2中3分钟，然后在无菌双蒸馏水中冲洗3-4次，进行表面灭菌。

媒介文化状况

使用含有3%蔗糖和1%琼脂(组织培养级，Himedia，印度)固化的Murashige和Skoog[4] (MS)培养基。加入琼脂前，将培养基pH调至5.6-5.8,1210℃高压灭菌15 min。所有培养瓶保存在25±20℃的培养室内，光周期为16/8小时(明/暗)，光强为2000勒克斯，由冷白色荧光管提供，相对湿度为60-65%。

愈伤组织诱导培养基

将外植体转移到含有25 mL添加不同浓度2,4- d和NAA的MS培养基的培养瓶中诱导愈伤组织。

芽诱导培养基

采用IBA(0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mg/l)和TDZ (0.2 mg/l)不同浓度和组合的MS培养基进行射击属性测定。

长枝生根和驯化

在适当的芽诱导后，小心地从培养基中取出，用消毒的双蒸馏水适当清洗，以避免培养基在根部留下痕迹。在体外将再生芽(5 ~ 6 cm)切除，转移到含半强度MS + IBA + Kn的生根培养基上生根。在生根生根后，将生根植株移栽到由园林土、沙土和蚯蚓堆肥按不同比例组成的硬化培养基中，在温室条件下养护，以了解其成活率。

统计分析

所有的实验都至少用三份重复做了两次。数据进行统计学处理，均数比较采用Duncan’s Multiple Range Test (P<0.05)。

结果与讨论

微繁殖方案的优化取决于多种因素，即培养基、外植体、生长因子和培养条件。因此，本研究通过筛选不同的因素，对不同的微繁阶段进行了标准化。研究了不同生长调节剂组合和浓度对愈伤组织发生的影响c . acutangulus显示在表1．在添加生长调节剂2,4- d (1.5 mg . l)的MS培养基上，叶片外植体可有效形成愈伤组织(84%)^－1)和NAA (0.2 mg^－1)．结果表明，生长素、2,4- d单独或与NAA联合培养30 d后，可产生高效愈伤组织。Ganesan和Paulsamy[5]报告说，对于这个物种，半边莲nicotianaefolia在2,4 - D含量较高、NAA含量较低的MS培养基上愈伤组织形成较好。外植体对愈伤组织形成的不同反应可能与外植体的性质、生长因子和全能性程度等因素有关。以往的报道也描述了MS培养基中较高含量的2，-D对愈伤组织诱导程度较高的类似模式[6,7]。叶片外植体的反应更明显可能是由于在植物物种中观察到的内源性生长调节剂水平，柴胡属fruticosum[8],柴胡属kaoi[9],Anaphalis eliptica[10]。

TDZ (2.0 mgl-1)与IBA (0.2 mgl-1)的细胞分裂素组合，继代培养叶片愈伤组织时，芽增殖率最高(83%)，芽数最多(13.56个芽/愈伤组织)，芽长(6.3厘米)。表2)．为了支持这一事实，Arya和Shekhawat [11]， Cobman和Ernst[12]和Dewan等人[13]报道了细胞分裂素是许多植物芽分化介质的必要组成部分。对于根的归纳，在体外将生长好的芽转移到添加了不同组合和浓度的生长调节剂的MS培养基上。在添加生长调节剂IBA和Kn(分别为2.0和0.2 mg / l)的MS培养基上继代培养，可获得有效生根(74%)、根数(10.37根/枝)和根长(6.9 cm)^－1分别为(表3)．在MS培养基中较高浓度的生长素生根效果较好，类似的结果已在几种药用植物中报道过Catharanthus roseus也叫[14],Leptadenia网状[15]。生长素浓度越高，根发生越好。不同工作者报道了许多物种需要细胞分裂素(TDZ)才能更好地生根[16,17,18,19,20]。

Quint et al[21]报道，植物对生长素的生根反应包括通过改变pH值和钙来促进细胞的快速生长，基因表达在生长素、IBA和NAA组合中比其他任何生长素组合中更有效，因为这两种生长素的相互转化更有可能和成功，这是有效生根所必需的过程。

根部发育后，将植株从培养瓶中取出，用消毒蒸馏水清洗，去除粘附的琼脂培养基，以防止污染。然后将这些幼苗转移到含有花园土、沙子和蚯蚓堆肥(体积比为1:1:1)的硬化培养基中，叶片愈伤组织产生的幼苗存活率较高，为81% (表4)．这三种组分的掺加可分别为植株提供适宜的养分、充足的通气和所需的矿物质，从而提供有益的环境。本文介绍了一种主要的、易于使用的植物大规模生产方案Corchorus acutangulus．

参考文献

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