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隔离反微量评价

米塔尔帕塔尼一号*曼德夫派特尔2孔门德拉萨瓦3和AnilBhadari一号

一号Jodhpur国立大学,印度拉贾斯坦

2一药院 Naroda古吉拉特邦

3迪布鲁加尔大学Dibrugarh-78604,印度阿萨姆

对应作者
米塔尔帕塔尼
Jordhpur国立大学,印度拉贾斯坦
移动 :+91909365

接收日期 :01/04/2013接受日期:25/04/2013

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抽象性

此项研究工作是为了调查Bexa欧拉那和Linumusitismum单片对五种菌类和五种真菌病原体的反微生物活动叶粉二叉和种子粉Linumusitasimum提取分片分解通过柱色谱分析净化薄层色谱学直到实现分片同质性HPLC检验同质性分片纯度进行了单片反微量评价分二分FR-1(352mg)和FR-2260mg收集自Bexaorlana分片3和4与linumusitismum隔离0.45Rf和0.25与标准二叉素比较时,一二分数对各种菌株都有良好的抗菌活性,而所有菌株均以甘蓝分数3和4为最穷活性,而所有菌株均以甘蓝分数3和4为最穷活性与标准药数组分片1和2相比,真菌菌类活动非常好,分片3和4则中度杀真菌菌类活动

关键字

Bixaorellana,Linumusitasimum,TLC,HPLC,列色谱学,反微生物活动

导 言

在发展中国家,原住民使用BixaorellanaL常名'achiote/anatto'(Family:Bixacee)'从B.orellana种子口浆中获取染料(称为bixin)在世界各地使用,作为红树染料,用于染米、干酪、软饮料、油油、黄油和汤染料还用在某些地区染色纺织品和Sionas和Secoyas颜色布料并带武器在菲律宾,种子红纸浆用作Russet皮革油使用,种子用在地面并用作调料[12,34]各种土著群体用纸浆刷理头发和身体以击退昆虫并防晒Bixin也是原创美洲印第安人Warpaint种子分给公牛 令公牛攻击公牛 并被印地安人取为aphrodisia光素从树皮中获取Trypanosamatiee家族的旗手从B.orellana果实中分离1987年从巴西出口种子平均价格为每公斤1.57美元,随着产量增长,价格保持低水平最近发现粒子损耗和撞击而非溶解提取是处理红焦素bixin的成本效益更高方法松树或树籽为油纤维种植最古老作物Linacee家族植物名称Linumusitisum北美和亚洲均分别使用常用名称松软和linse微信油籽品种和纤维品种是这种物种的专门开发 [5,6,7,8,9,9,10,11,12]

在当前反推倍数复合二联环和linumusitismum被隔离并接受抗菌活动

材料方法

微生物

所选用细菌菌株基于其致病性2数组阳性和3数组负性测试细菌菌株取自昌迪加尔MTCC表1

microbiology-biotechnology-Bacterial-strains

表1细菌菌株取自昌迪加尔MTCC

拟使用复古菌株是根据它们的致病性选择的昆虫病和寄生虫病是今日全世界流行的主要真菌感染Candida和Aspergilus真菌类引起这些疾病,因此Candida3株和Aspergilus2株测试趣味菌株取自昌大加尔MTCC表2

microbiology-biotechnology-Fungal-strains

表2菌带MTCC数

植物素材

植物不同部分按Ayurveda使用和传统医学系统收集自 Chhattishgarh大区植物标识由环境科学局R.K.Verma博士认证,CSVTU,Bhilai Chhatishgarh植物材料在树荫下干链表植物使用表3

microbiology-biotechnology-Ayurvedic-Uses

表3植物用法清单及其Ayurvedi

准备火药提取

Mallotus Philipinesis、Bexaorellana和Linumusitism干料24小时存放在350摄氏度的炉中后被机械粉刷

热持续提取

实验规模使用Sexhlet设备由酒瓶、苏格勒提取器和回流冷凝器组成原生素通常放入滤波纸并插入提取器广中心管反之,药经月经注入后,可打包提取器,注意提取物底端出口不阻塞60%甲醇放入酒瓶并带入沸点蒸发器穿过较大的右手管插进提取器上部并转至冷凝器后再凝结并投回药在此期间,可溶性成分提取提取量到达回文管顶部时 整卷提取回文注入瓶过程持续到完全提取

物理化学筛选

按照标准方法对所有提取物进行物理化学检验

microbiology-biotechnology-chromatogram

图1HPLC分片色谱

列色谱分离

植物样本的中度提取通过用迫击炮剖析并离开约10小时干燥而吸附到硅胶上列打包用湿滑法解决silica凝胶N-butanol需要准备Silica凝胶解析法,并装有n-butanol求分解并快速加到列中使用这种方法防止捕捉气泡一球羊毛推入列 沉浸在打包 silica凝胶乙类复合苯:乙醇:形式酸(10:5:1)和甘coide量氯仿:甲醇(95:5)连续倒入列中并允许排水但无法达到棉毛收集的数量倒回列周期性地用一块橡皮管来扰动列 允许解压气泡列分数再次用TLC染色图测试,并判定Rf值

薄层色谱

丁层色谱研究马洛图斯菲利浦斯和比克斯欧拉那分片LinumusitatismTLC板块使用silica Gel-G解析500gmSilicaGel-G混合足够的蒸馏水制作泥浆泥浆立即倒入一个伸展器,板块通过向玻璃板铺开所需要尺寸的泥浆来准备厚层固定为1.5毫米平台允许风干1小时,图层通过105oC干燥固定1小时使用针头和针头, 约10微升1%W/V解析提取物逐步加载板上装有芬特片段的板块被含有苯:乙醇:正式酸(10:5:1)和甘地分片被装有氯仿:meble(95:5)的合适易用混合休眠前,罐体允许用30分钟饱和适配精灵混合分片显示分离带色谱显示可见光和紫外线辐射(254纳米和346纳米)并拍下照片并测量Rf值

高性能液色谱

HPLC(泵:LC-10AD、Sshi18号猫721609.40号爵士1096117,Cection/Batch21401011,Macherey-Nagel和ephlicfliction4.0min/ml与bene

反微生物活动测定

反微生物代理

Gentamycin(10微克/毫升)和Tioconazole(0.7 mg/毫升)被列为研究标准参考药

反射波板法

隔夜培养机体从盘中取出两线循环机体并每人注射五毫升不育养分博音隔夜培养0.1ml机体并投入9.9mL消毒蒸馏水获取10-2aculum集中生物稀释生物体-20.2mL进制不育养分冷到约40-45摄氏度后倒入无菌Petri盘子并允许固化约45-60min水井使用直径8毫米的无菌cork-borer制成,根据实验测试管数制成八井打井使用每个植物样本的微水管(100mg)分解(1 ml)蒸馏水研究复制确认所得结果板块留置约2hrs,允许提取正确扩散进养分ag预扩散板块在37摄氏度18-24hr嵌入

反射表板法

无菌马铃薯dextroseagar0.2mL-2生物的阴极聚积分布于agar表面 使用无菌Petri-dish覆盖覆盖agar八口井用8毫米直径无菌软木桶无聊使用每个植物的微水管(100ml)分解(1 ml)蒸馏水中125mg板块留置2hr 允许提取正确扩散预扩散板块在25摄氏度72hr[1314151618]

结果与讨论

物理化学初步分析

乙醇提取bexaorlana(Extract-B)表示植物中存在tanins和phenlic复合物、saponein、flavonoid、alkaloids、蛋白质、amino酸和eroids乙醇提取Linumusitismum(Extract-C)表示工厂中存在蛋白质、氨基酸、碳水合物和甘油植物化学测试报告显示表4

microbiology-biotechnology-methanol-extract

表4理化分析甲醇提取厂

列色谱

乙醇提取二兆乙醇溶解提取除以4ml/min和2分FR-1(352mg)和FR-2260mg收集Linumusitismum(Extrap-C)(1.3g)甲醇提取物溶解2ml甲醇并仔细应用到列顶提取物除以1.0ml/min和2分FR-3(160mg)和FR-4(250mg)收集
单片phenlic复合体物理化学测试

熔化测试提取物用3至4滴二氯化物解法处理粗黑表示苯酚的存在

物理化学测试隔离胶片

修改Borntrager测试提取物用Ferric氯化物解析法处理并浸入开水约5分钟混合冷却并提取等量苯苯层分离并用氨溶液处理成形红花层表示有甘蓝

TLC测试

丁层色谱分析确认双亚拉那有phenlic复合物,Linum用益度m有glycoside分数一为phenlic分数bixaorlana为浅黄色,值为0.99Rf分数-2为phenlic分数bixaorlana为深绿色带Rf值0.35分数3为浅黄色,Rf值为0.45,根据Hortore计算此等值Rf值[7]分数4为浅黄色,Rf值为0.25

HPLC

从列色谱采集的分数在HPLC上进一步净化以隔离phenlic和glycoside分片1和2主要含有苯化物化合物由HPLC使用苯分离:甲醇:丙酸移动相位所有分数显示仅单峰分一和2为纯复合分数3和4主要含甘蓝化合物由HPLC使用氯仿分离:甲醇(95:5)移动相位所有分片3和4只显示单峰分片3和4纯复合高性液相色谱分析从列色谱中获取的分片描述分片纯度

反菌活动

微分反菌株多值显示表5分数一显示抗菌活动范围介于18-28毫米之间分数2对伪Aeruginosa活动最大分数2显示抗菌活动范围为16-26毫米显示最高抗菌活动 伪Aeruginosa分数1和2显示良好抗菌活动分数3反菌活动范围为2至0.4毫米分数3显示最穷抗菌活动分数4所有菌株都有最穷抗菌活动与常者二分三分之二相比,所有菌株都具有良好的抗菌活动,而树枝分三分四是所有菌株中最穷活度。

microbiology-biotechnology-diffusion-pour

表态5Agar反射波板法抑制植物样本

反假活动

微分对真菌菌株显示多值表6分数一反烟火活动范围介于16至20毫米之间分数2在10至22毫米范围有良好的反烟雾活动分数2对开曼菌株更有效 中度活性对asperlus菌株分数3对真菌增压作用良好 范围介于06至16毫米分段4显示中抗烟活动范围为10-18毫米标准药Tioconazole显示24至26毫米范式与标准药分片1-2相比,真菌菌类活动极佳,分片3和4则适中消除真菌菌类活动

microbiology-biotechnology-pour-plate-method

表6植物样本受Agar反射波板法阻抗Fungal

致谢

多人帮助支持我项目,最深切地感谢我的导师曼德夫·派特尔博士引导并纠正我各种文件并给予关注和关照并按需做必要校正

引用