研究和评论:微生物学和雷竞技苹果下载生物技术杂志》上
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P - ISSN: 2347 - 2286
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Mital那时1*,Mandev帕特尔2,Khomendra Sarwa3,Anil Bhadari1
3Dibrugarh大学Dibrugarh - 786004,印度阿萨姆邦
收到日期:01/04/2013接受日期:25/04/2013
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本研究工作进行了探讨抗菌活动孤立的部分Bixa奥雷利亚纳和亚麻属植物usitatissimum反对五细菌和真菌病原体。亚麻属植物的叶子粉bixa奥雷利亚纳和种子粉usitatissimum进行索氏提取。各种分数的分离是由柱层析法、薄层色谱(TLC)分析和纯化直到取得的分数的同质性。同质性和纯度不同的分数被高效液相色谱法检查。抗菌孤立的分数进行了评价。两个分数Fr-1(352毫克)和Fr-2(260毫克)收集Bixa奥雷利亚纳射频是o。99和0.35。分数3和4是隔绝亚麻属植物与射频usitatissimum 0.45和0.25。当比较的标准药物庆大霉素,酚醛的1和2有很好的抗菌活性对所有菌株糖苷分数3和4是贫穷的活动对所有菌株。当比较标准药物tioconazole fraction-1和2有很好的活动对真菌菌株和分数3和4有温和的活动对真菌菌株。
Bixa奥雷利亚纳,亚麻属植物usitatissimum、薄层色谱、高效液相色谱、柱层析法,抗菌活性
在发展中国家,人们的原住民社区使用Bixa奥雷利亚纳l .俗称“胭脂树/红木”(家庭:红木科)作为民间药物煎煮的形式,茶和果汁常见感染的治疗。的染料从纸浆获得B。奥雷利亚纳种子(称为胭脂树橙)使用世界各地的红橙色染料着色大米、奶酪、软饮料、油,黄油,和汤。染料也用在一些地区染料纺织品和辛娜Secoyas颜色面料和武器。在菲律宾,红髓的种子用于为黄褐色皮革)和波兰的种子,用作调味品(1、2、3、4)。各种土著群体与纸浆画他们的头发和身体排斥昆虫和防止晒伤。胭脂树橙也是原来的美洲印第安人的华装。给出了种子为斗牛士和公牛让他们积极采取的印第安人是春药。树皮纤维可以获得。家庭的鞭毛虫Trypanosamatidae隔绝B.orellana的果实。 Average price of seeds exported from Brazil in 1987 was $1.57 per kilogram, and as production increases, prices remain low. It has been found recently that particle attrition and impact rather than solvent extraction is a more cost efficient method for processing the red carotenoid bixin. Flax or linseed is among the oldest crop plants cultivated for the purpose of oil and fiber. It belongs to the genus Linum and family Linaceae. The botanical name, Linum usitatissimum was given by Linnaeus in his book “Species Plantarum”. It is an annual herbaceous plant with shallow root system.16-17 The common names flax and linseed are used in North America and Asia, respectively, for L. usitatissimum. Oil seed varieties and fiber varieties are specialized development of this species [5,6,7,8,9,10,11,12].
在目前调查的酚类化合物bixa奥雷利亚纳和亚麻属植物usitatissimum隔离并受到了其抗菌活性。
微型生物
菌株的基础上选择使用他们的致病性。2株革兰氏阳性和3株革兰氏阴性菌株被抗菌感受性测试。菌株从MTCC,昌迪加尔了表1
表1:从MTCC菌株获得,昌迪加尔
真菌菌株的基础上选择使用他们的致病性。念珠菌病和曲霉病是主要的真菌感染全球流行的今天。这些疾病是由念珠菌和曲霉菌真菌物种,3株念珠菌和曲霉菌的第2的抗真菌敏感性测试。真菌菌株从MTCC,昌迪加尔了表2
表2:真菌菌株MTCC数量
植物材料
植物的不同部分根据他们的使用在阿育吠陀医学和传统系统收集来自不同地区的3月到6月期间Chhattishgarh。植物识别被上面博士身份验证Verma、环境和植物科学系CSVTU, Bhilai Chhatishgarh。植物材料干置于阴凉处。植物和他们的阿育吠陀使用提到的列表Table.3
表3:工厂使用列表和他们的阿育吠陀的用途
粉末的制备和提取
植物的不同部分Mallotus Philipinesis, Bixa奥雷利亚纳和亚麻属植物usitatissimum收集和干在阴凉处。这些干材料机械粉后让他们在烤箱350°C 24小时。
热连续萃取(索格利特)
在实验室规模,索氏仪器使用。它由一个烧瓶,索氏提取器和回流冷凝器。原料的植物通常是放置在一个顶针滤纸和插入器的宽中央管。另外,药物,与溶剂吸入后,可能包装器照顾底部出口的提取并不阻止。60%甲醇放在烧瓶,使其沸点。其蒸汽通过较大的右手管的上部器和冷凝器的冷凝放回。在此期间,可溶性成分被提取。当提取的水平达到顶端的虹吸管,整个提取虹吸到瓶的体积。这个过程一直持续到药物完全提取。
植物化学的筛选
植物化学的考试进行的按标准方法提取出来的。
图1:高效液相色谱色谱不同的分数。
柱色谱分离
methanolic提取的植物样本被吸附在硅胶磨碎在臼,大约10小时晾干。硅胶的列挤满了一个解决方案使用湿浆与正丁醇的方法。硅胶的这需要准备一个解决方案,正丁醇在这种情况下,在一个烧杯,随后添加到列直到大约四分之三了。的解决方案是搅拌分散并迅速凝胶落定之前添加到列。这种方法被用来防止气泡的捕获。一个球,羊毛被推入列来解决在硅胶。大量的酚类化合物的苯:甲醇:甲酸(10:5:1)和糖苷的氯仿:甲醇(95:5)不断流入列和允许流失但无法到达药棉。收集到的数量是倒回列。定期,一块橡胶油管被用来煽动列允许逃脱被困的气泡。列分数又测试了TLC色谱和Rf值测定。
薄层色谱法(TLC)
薄层色谱的研究酚醛一部分Mallotus Philipinesis Bixa奥雷利亚纳,糖苷的亚麻属植物usitatissimum。薄层色谱板是由使用硅Gel-G作为吸附剂。500年通用硅Gel-G与足够数量的蒸馏水混合浆。泥浆是立即涌入撒布机和盘子是由传播所需的泥浆的玻璃盘子的大小。固定层的厚度是1.5毫米。盘子被允许空气干燥1小时在105ºC层固定在干燥1小时。使用注射器和针头,大约有10个μl 1% W / V提取物溶液逐渐加载板。加载板与酚醛分数被筛选了合适的elutent混合物含有苯:甲醇:甲酸(10:5:1)和糖苷分数被筛选了合适的elutent混合物氯仿:甲醇(95:5)。在洗脱,坦克被允许30分钟与合适的饱和elutent混合物。分数显示分离成乐队。 The chromatograms were observed under both visible light and UV radiation (at 254 nm and 346 nm) and were photographed and Rf value were measured.
高效液相色谱法(HPLC)
同质性和纯度不同的分数是由高效液相色谱检查(泵:LC-10AD,日本岛津公司液相色谱,日本岛津公司有限公司)使用一列CC 250/4 Nucleosil 1000 - 7 C18猫。没有721609.40,Ser没有。1096117,电荷/批处理21401011,Macherey-Nagel和洗脱的酚醛fraxtion流量4.0分钟/毫升与苯:甲醇:甲酸(10:5:1)和洗脱的糖苷分数与氯仿:甲醇(95:5)1.0分/分钟的流量。
抗菌活性测定
抗菌药物
庆大霉素(10μg /毫升)和Tioconazole(0.7毫克/毫升)作为标准参考药物的研究。
琼脂diffusion-pour板方法(细菌)
一夜之间文化的每个生物都由两个线圈的有机体股票和接种每5毫升的无菌营养肉汤,每个孵化18-24hr在37°C。一夜之间从文化、0.1毫升的有机体被放入9.9毫升无菌蒸馏水获得102培养液浓度的有机体。稀释的有机体(102),0.2毫升被带进无菌准备营养琼脂冷却到约40到45°C,然后注入无菌培养皿和允许巩固约45 - 60分钟。使用无菌软木钻孔机的8毫米直径、井的数量是根据的试管实验。这项工作8井。使用微量吸液管(100μl)的每个植物样品的溶解(125毫克)(1毫升)蒸馏水,相应地在毛孔包括控制。重复的研究确定获得的结果。盘子被放在板凳上大约2小时允许提取正常扩散进入营养琼脂即扩散前。18-24hr盘子被孵化的37°C。
琼脂diffusion-surface板方法(真菌)
无菌马铃薯葡萄糖琼脂是相应的准备和无菌倒到无菌板块在一式三份和正常凝固。0.2毫升的102培养液浓度有机体的传播在琼脂表面使用无菌培养皿盖覆盖所有表面的琼脂。八井无聊使用无菌软木钻孔机的8毫米直径。使用微量吸液管(100μl)的每个植物的溶解(125毫克)(1毫升)蒸馏水,在毛孔包括控制。所有的盘子都离开在板凳上2小时允许提取正常扩散进入琼脂即扩散前。板块在25°C 72小时孵化(13、14、15、16、17、18)。
初步的植物化学成分分析
Methanolic Bixa奥雷利亚纳(Extract-B)提取显示单宁和酚类化合物的存在,皂苷、黄酮、生物碱、蛋白质、氨基酸、类固醇在植物。(Mohammed et al ., 2010) Methanolic亚麻属植物的提取usitatissimum (Extract-C)表示蛋白质的存在,氨基酸,碳水化合物和苷在植物。(Kumanan et al.2010)。植物化学的测试和报告所示表4
表4:植物化学的分析在甲醇提取物的工厂
柱层析法
Methanolic提取物Bixa奥雷利亚纳(Extract-B) (1.6 g)溶解在甲醇和2毫升小心地应用于列的顶部。与甲醇提取物的筛选了4毫升/分钟的速度和两个分数Fr-1(352毫克)和Fr-2收集(260毫克)。Methanolic亚麻属植物的提取usitatissimum (Extract-C) (1.3 g)溶解在甲醇和2毫升小心地应用于列的顶部。与甲醇提取物的筛选了1.0毫升/分钟的速度和两个分数Fr-3(160毫克)和Fr-4收集(250毫克)。
植物化学的测试孤立的酚类化合物。
氯化铁测试:提取服用3 - 4滴氯化铁溶液。形成蓝色黑色表明酚类化合物的存在。
植物化学的测试孤立的糖苷。
修改Borntrager的测试:提取物治疗和氯化铁溶液在沸水浸泡5分钟左右。混合物冷却,与相同体积的苯提取。与氨苯层分离和治疗方案。氨化亚层中形成的玫瑰粉色颜色表明苷的存在。
薄层色谱
薄层色谱法进行确认中酚类化合物的存在bixa orelana和亚麻属植物存在的糖苷usitatisimum。分数1酚醛分数Bixa奥雷利亚纳的淡黄色的颜色与Rf值0.99。分数2酚醛Bixa奥雷利亚纳的颜色是深绿色Rf值0.35。fraction-3是淡黄色的颜色和它的Rf射频的价值是0.45,这等于价值根据Harborre [7]。Fraction-4是淡黄色的颜色,其射频值是0.25。
高效液相色谱法
分数从柱层析法进一步提纯高效液相色谱分离酚类和糖苷。Fraction-1和2包含主要酚类化合物是由高效液相色谱分离使用苯:甲醇:甲酸(10:5:1)流动相。所有分数只显示单峰值这词句fraction-1和2是纯化合物。Fraction-3和4包含主要由高效液相色谱糖苷化合物分离使用氯仿:甲醇(95:5)作为流动相。所有fraction-3和4只显示单一峰值陶醉fraction-3和4纯化合物。高效液相色谱分析柱层析法获得的分数的分数的纯度。
抗菌活性
MIC值对菌株显示在不同的分数Table.5Fraction-1抗菌活性显示在18 - 28毫米的范围。对铜绿假单胞菌Fraction-2最高的活动。一系列16-26mm Fraction-2显示抗菌活性。它显示最高对铜绿假单胞菌的抗菌活性。部分1和2所示好的抗菌活性与标准药物庆大霉素。Fraction-3抗菌活性在02年到0.4毫米的范围。分数3显示贫穷的抗菌活性对革兰氏阳性细菌无效的革兰氏阴性细菌。对所有菌株Fraction-4有穷的抗菌活性。当比较的机架药物庆大霉素酚醛分数1和2有很好的抗菌活性对所有菌株在糖苷分数3和4是贫穷的活动对所有菌株。
表5。对细菌的抑制作用的植物样本区琼脂diffusion-pour板的方法
抗真菌活性
MIC值不同的分数对真菌菌株所示表6Fraction-1抗真菌活性在16 - 20毫米的范围。Fraction-2有很好的抗真菌的活动范围10 - 22毫米。Fraction-2更有效的在曲霉菌株念珠菌菌株和适度活跃。Fraction-3真菌有很好的活动strainin 06 16毫米的范围。fraction-4显示中度10-18mm抗真菌的活动范围。标准药物Tioconazole显示出24-26mm的抗真菌的活动范围。当比较标准药物fraction-1and 2有很好的活动对真菌菌株和分数3和4有适度的活动对真菌菌株。
表6:植物样品对真菌的抑制区琼脂diffusion-pour板的方法
我欠很多感谢许多帮助和支持我的人在我的项目。我最深的感谢我的向导Mandev Patel博士指导和纠正各种文档我的关注和关心。他痛苦的项目和作必要的调整,并在需要的时候。
