隔离淀粉酶产生菌从太阳能市辖区内的盐场,印度安得拉邦

文摘

α-Amylases类的内部α-1淀粉降解酶催化水解,在多糖4-O-glycosidic债券。下面的调查进行了隔离haloalkaliphilic细菌,一群生物双四肢的pH值和盐度、生产α-amylases从人造太阳能盐场的能力。共有25个离散的殖民地独立,21隔离了淀粉酶的生产。其中7隔离产生淀粉酶等极端条件下盐、碱度和温度。隔离的特点也为其他生化反应的酶。从结果势在必行,这些隔离可以进一步研究利用工业规模。

关键字

糖苷键,α-amylases haloalkaliphilic细菌。

介绍

α-Amylases(提到过3.2.1.1。)starch-degrading酶催化水解的内部α-1 4-O-glycosidic债券多糖的保留α-ano美力克配置的产品。大多数α-amylases金属酶,这需要钙离子(Ca^{2 +}为他们的活动),结构完整性和稳定性。他们属于家庭13 (GH-13)糖苷水解酶的酶(1]。淀粉酶是一种最重要的工业酶,有各种各样的应用程序从淀粉转换成糖糖浆,为制药行业生产环糊精。这些酶约占世界30%的产酶(2]。α-amylase家庭大致可以分为两组:淀粉水解酶和淀粉修改或transglycosylating酶(3]。酸水解的酶水解是首选的淀粉加工工业由于反应的专一性等许多优点,稳定生成的产品,降低能源需求和消除中和步骤(4]。由于需求增加这些酶在不同的行业,有巨大的利益在发展中更好的属性,如生淀粉降解酶淀粉酶适合工业应用和成本有效的生产技术5]。由于需求增加这些多功能酶的重点已经转向嗜盐的细菌、微生物生活在极端盐碱浓度(6]。

在这样的一个尝试haloalkaline盐场的市辖区内港Extremophilic组的微生物称为„嗜盐菌”由于他们抵抗大范围的盐浓度,选择[7,8]。适度的盐田自然条件高温的40到45°C, 8 - 9.5的碱性pH值,和盐浓度接近饱和,选择性地允许嗜盐菌的生存,分为耐盐(2 - 5%),中度嗜盐的(5 - 20%),极端嗜盐的(20 - 30%)基于对氯化钠浓度的阻力。随着这些嗜盐菌已报告生产高度thermo-resistant淀粉酶,(9)应用于各种工业过程在织物处理和糖化反应等(10]。

材料和方法

样品收集

沉积物样本收集从盐田区附近的一个15厘米深度盐卤水Muthukur安得拉邦的市辖区内。在温度范围在40到45°C, pH值超过8盐浓度接近饱和。收集的样本使用无菌的塑料袋和被转移到实验室,在24小时内处理的集合。所有的样品在4°C存储在冰箱里。使用无菌生理盐水系列样品进行稀释。稀释到10 - 7是执行结果扩散板技术。所有的样品都放在改良营养琼脂,修改模仿自然样本网站的条件。

盐、pH值和温度公差

所有分离筛选耐盐功效水平的增长在营养肉汤修改与浓度的盐(氯化钠)从0%到35%不等(饱和度),增长记录,对盐浓度的吸光度。修改营养肉汤准备在不同pH值范围检测分离的菌株的耐受度。烧瓶在旋转瓶孵化24小时370 c和O。每个瓶pH值D值。耐温性是由使用修改后的营养培养基提高温度和吸光度被记录。“haloalkaline”条件下孤立发展的最佳选择,进一步纯化和受到淀粉酶生产“haloalkaline”条件和生化特征。

筛查酶生产

最初的筛选是通过使用改性淀粉琼脂培养基修改检测淀粉水解的测试隔离。淀粉琼脂板准备通过修改南中7%氯化钠和pH值的8.5和接种24小时在400 c的隔离。碘是倒在滴板和清晰的区域在殖民地的预期。积极的隔离关于退化区被选中作进一步分析(11]。

淀粉酶生产下氯化钠、温度和pH值的影响

积极的隔离从最初的筛选是进一步检测酶活性在不同浓度和程度”的氯化钠,温度和pH值后24小时孵化在最佳温度下采用不同的温度和温度的影响。肯定的酶活性被列为度(+、+ +、+ + +等;)。

生化特性

革兰氏染色法进行研究的形态特征选择的隔离。各种生化测试被执行即柠檬酸的利用率,生产过氧化氢酶、氧化酶,吲哚,脲酶、酸产量和淀粉水解明胶液化。不同碳源利用率是筛选(12]。

结果与讨论

在目前研究沉积物样本Muthukur太阳能收集盐场和连续稀释的盐水和镀上修改后的营养琼脂培养基。稀释从10⁴到10⁷用于电镀。媒体是准备使用7% (w / v)氯化钠与其他常见的营养琼脂培养基成分。文化殖民地表现出有趣的特点快速增长和独特的文化特征和适量盐宽容高达12%。最后14株生产α-amylase被孤立和维护修改的营养琼脂培养基在370 c。淀粉降解生成区隔离能力的琼脂培养基被记录为positeveness(+、+ +、+ + +等;)。酶活性在不同的影响因素和生化鉴定结果列表表1和Table.2

所选菌株是基于其独特的淀粉酶生产范围的限制因素,进一步研究了不同的生化特征。选择隔离分析对不同碳源利用率和脂肪酶等酶,蛋白酶、纤维素酶、几丁质酶和果胶酶筛选。结果列表表3和表4分别。隔离显示增长和淀粉酶生产适度限制条件的pH值、温度和盐,可以利用他们的工业应用

结论

α-amylases是应用最广泛的制备所需的酶发酵食品(13]。除了食品和淀粉行业(14),他们的需求不断增加,他们也用于其他行业,如纸和纸浆,纺织、等(15]。增加其应用范围,与特异性酶的需求16]。研究专注于发展热宽容和pH值宽容a-amylase从微生物,修改基因或酶应用定点诱变获得所需的属性。商业上的大部分生产a-amylase进行深层发酵,但固态发酵被看作为一个潜在的工具的生产,特别是应用农工业的残留物作为衬底。

引用

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