Mesfin Shurbe1 *丹尼尔Gizaw2安瓦尔•3
2动物科学、国家动物健康诊断和调查,Sebeta,埃塞俄比亚
收到:2022年- 3月31日,手稿。集- 22 - 59111;编辑分配:04 - 4月- 2022年前质量控制。集- 22 - 59111 (PQ);综述:14 - 4月- 2022年质量控制。集- 22 - 59111;修改后:18 - 4月- 2022年手稿。集- 22 - 59111 (R);发表:22日- 2022年4月,DOI: 10.4172 / J Stud.7.3.003地中海中国情况。
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背景:犬瘟热是高度传染性病毒性疾病的犬类物种全球发生。然而,先前的研究已经低估了犬瘟热状态在埃塞俄比亚。因此,本研究的目的是评估发生乳糜泻临床狗协会和其他情况下在亚的斯亚贝巴的宠物诊所。
结果:的150只狗带到不同的宠物诊所,70例(46.66%)被发现暗示CDV感染的迹象。所有70例疑似病例的CD,眼部和鼻涕拭子样本被收集和筛选最快犬瘟热地带包病毒的存在。筛选样本,22.86%为犬瘟热是积极的。筛选阳性样本进一步证实了在维洛细胞作为黄金标准使用细胞培养技术。16的筛选阳性样本接种州立细胞,12个标本(75%)显示细胞病变效应(CPE)的形式合胞体形成24和48小时内接种其余4负样本通过州立电池前三次声明负的。未经变质处理的消极控制包含在每次运行没有任何影响。
结论:目前研究显示CD的存在显示16个积极的狗的70例不收到定期免疫根据CD菌株。除此之外,CD是首席疾病当地狗相对于外来品种。因此,孤立的临床国内从健康狗狗和常规免疫的动物根据流行株的CD是有启发性的。
CDV;细胞病变效应;狗;最快犬瘟热;带装备测试
缩写
NAHDIC:国家动物健康诊断和调查中心;CD:犬瘟热;CDV:犬瘟热病毒;CPE:细胞病变效应
犬瘟热(CD)是一种高传染性全球传染病引起的犬类物种发生犬瘟热病毒属(CDV)麻疹病毒属家庭的副黏液病毒科(1]。犬瘟热病毒是一个笼罩,单链,消极意义上讲RNA病毒包含六个结构蛋白:两个膜糖蛋白,融合(F)和血凝素(H), envelope-associated矩阵(M)的蛋白质,磷蛋白(P)、大型聚合酶(L)和核衣壳蛋白(N) (2]。额外配件基因,C和V蛋白质被发现主要是额外的转录单位,在P基因。病毒粒子周围的脂质包膜,包含两个表面糖蛋白F和H,它调节病毒宿主细胞的入口和出口。此外,螺旋neoclocapsid核心,包含N, P,和L蛋白,启动细胞内的复制和坐落在信封内。病毒M蛋白连接表面糖蛋白,在病毒核衣壳成熟3]。
犬瘟热病毒的宿主范围包括所有物种的家庭的犬科动物(狗、野狗、福克斯、豺、狼),浣熊科(长鼻浣熊Raccon熊猫),鼬科(黄鼠狼、雪貂、渔民、鼬獾,貂,水獭),大型家族成员猫科(狮子、豹子、猎豹、老虎)和成卷的野猪类(Tayassu Tajacu)。至少七个不同血统的犬瘟热是公认的在全球范围内,基于H基因的序列分析:Asia-1, Asia-2, American-1, American-2, Arctic-like,欧洲野生动物,和欧洲。额外的血统在未来可能会被识别(4]。菌株引起暴发的遗传分析表明CDV并不变得更加致命,扩散到新的主机物种在一个地区,但同样的应变循环在易感动物的几个主机物种在一个特定的地理区域(5]。
CD传染性很强,经常是致命的疾病在狗和狂犬病后死亡率很高。这种疾病是通过气溶胶传播,与淋巴细胞和巨噬细胞的病毒有很高的亲和力。疾病的持续时间和严重程度主要取决于被感染动物的能力迅速山CDV的免疫反应。如果血清抗体效价高水平的8 - 9天内感染,病毒消失从淋巴和其他组织和感染仍然是亚临床或轻微。然而,如果延迟或者免疫反应较弱,病毒传播组织太多导致高死亡率的急性或慢性疾病(6]。免疫天真的人口可能会经历高死亡率。由于CDV感染死亡率变化敏感物种和雪貂(可能高达100%7,8]。国内狗的死亡率将在很大程度上取决于动物的免疫状态可高达50% (9]。爆发在非洲野狗导致死亡率高达95% (10]。
犬瘟热的病毒通过呼吸道传播路线与最初的病毒复制在呼吸道上皮细胞和肺泡巨噬细胞(11]。最初的感染是在鼻咽上皮细胞和淋巴组织(12]。在区域淋巴结增殖后,病毒进入血液,循环在感染B和t细胞。主要病毒血症是同步与第一轮的发烧和病毒扩散到全身淋巴组织;循环肠道相关淋巴组织,和固定kuffer细胞在肝脏等组织巨噬细胞。这些网站是由血液中病毒粒子形成单核细胞在第二次病毒血症,伴随着发烧的第二个高峰。上皮细胞不具备CD150(大满贯)和受体促进病毒进入上皮细胞尚未定义(7]。
犬瘟热病毒可能脱落在几乎所有的身体分泌物和排泄物取决于感染的阶段。最常发生通过吸入的空气传播病毒传播或直接接触敏感,积极感染的狗。雷竞技网页版污染物或环境犬瘟热的传播病毒也是可能的,但病毒并不传染性停留的时间超过小时几天根据环境温度和其他条件。污染物和环境污染因此更顽固的疾病传播的重要性比犬细小病毒等病毒。因为病毒环境中的持续时间并不长,温和的影响和恢复动物在维持传输周期中扮演一个重要的角色在避难所13]。
在狗,犬瘟热病毒感染可能会导致亚临床感染或临床疾病。据估计,75%的感染发生在亚临床感染。临床疾病的特点是系统性的迹象(皮肤、呼吸道和胃肠道)频繁神经功能紊乱。瞬态热通常发生在感染后3 - 6天,可能会有白细胞减少(特别是淋巴球减少症)在这个时间,但这些信号可能会被忽视。发烧消退前几天发生第二次发烧,<持续1周。这可能是伴随着浆液鼻涕,mucoprulent眼部分泌物和厌食症。脚垫角化过度(硬垫疾病)和鼻平面的上皮细胞可能被看到14]。犬瘟热病毒将同时影响中枢神经系统的灰质和白质。因此,各种神经可能观察到的迹象包括行为变化、癫痫、小脑和前庭迹象,视觉上的缺陷,麻痹,瘫痪、四肢无力,震颤,肌阵挛(灰质信号特征的有节奏的抽动着单一肌肉或肌肉群)(15]。癫痫和肌阵挛通常灰质迹象,而视觉赤字和不同的运动损伤主要白质功能障碍的迹象。颈软脑膜炎的迹象,如刚度和广义感觉过敏,也可能发生(16]。
在犬瘟热疑似病例,一个完整的血细胞计数和胸射线照片分别用于访问白细胞反应和肺炎。与神经系统疾病在狗怀疑是由于CDV,例行的脑脊液(CSF)分析进行区分CDV感染和其他疾病。CDV的存在——特定的抗体在脑脊液可以确诊,但需要特殊的实验室17]。常规犬瘟热的诊断病毒通过免疫荧光(如果)应用于各种标本,包括conjuctival,鼻,和阴道涂片,用多克隆和单克隆抗体。这个测试是不敏感的,只可以检测犬瘟热病毒抗原后3周内感染,当病毒仍然存在于上皮细胞。血清学方法如ELISA和血清中和(SN)化验诊断价值因为高滴度的抗体犬瘟热病毒可能以前的疫苗接种的结果或亚临床或临床感染(18]。确诊犬瘟热的病毒隔离在犬类细胞是挑剔和费时,花几天几周,特别是当应用于临床标本(19]。在生活,可以证实临床诊断发现典型的细胞质和核内有包涵体涂片的呼吸道上皮细胞和外周血。不幸的是,这些夹杂物在所有情况下不存在;因此他们的缺席并不排除犬瘟热的诊断11]。犬瘟热夹杂物在犬红细胞不规则圆形环形状和污渍品红和Romanowsky Diff-Quik污渍(夹杂物可能与其他快速血迹)染色。犬瘟热瞬态(夹杂物20.]。这些夹杂物表现为均匀,红紫色,红色或淡蓝色,多形性但均匀细胞质内含物;他们发现在中性粒细胞,单核细胞,淋巴细胞和红细胞。他们之前可能发生在viremic早期阶段和临床疾病(21]。rt - pcr已成功地应用于犬瘟热的诊断(22,23]。
犬瘟热病毒感染控制是基于充分的诊断、检疫、卫生、和疫苗接种减毒病毒犬瘟热疫苗。病毒是非常脆弱,容易受到标准的消毒剂。然而,彻底消毒的前提可以非常具有挑战性的。治疗,超免疫血清或免疫球蛋白可以预防性接触后立即使用。抗生素治疗一般有有益的影响,减少二次机会的影响细菌感染(3]。犬瘟热病毒是单型的病毒定义的多克隆抗血清和一个接触病毒通常赋予狗长期持久的免疫力。一般来说,采用减毒活疫苗犬瘟热病毒疫苗在1950年代及其广泛使用大大降低了发病率犬瘟热的狗(24]。因此,在埃塞俄比亚之前漏报的犬瘟热连同其应变使本研究强制性的。本研究的主要目的是评估发生犬瘟热相对于其他传染性传染病和非传染性疾病在亚的斯亚贝巴的狗,和孤立CDV犬瘟热的临床病例。
研究区域
研究从2018年11月到2019年4月在亚的斯亚贝巴宠物诊所(Akaki kality, Sholla, Kera)在大多数临床狗狗犬瘟热的暗示。亚的斯亚贝巴位于海拔2000 - 3000米a.s.i。年平均降水1800毫米与双峰模式。有交替干燥和雨季。漫长的雨季从6月到9月的贡献约84%的年降雨量在旱季持续从10月到2月。短暂的雨季从三月持续到五月。年平均最低和最高温度分别为14°C和21°C的总体平均17°C。平均相对湿度是61.37 (25]。
研究动物
这项研究是进行本地和外来品种的狗带到亚的斯亚贝巴小动物诊所(Akaki-Kality、Sholla和Kera)。
研究设计
立意为犬瘟热的隔离和表征研究临床狗从11月,2018年至2019年4月,通过收集从眼拭子标本,鼻涕与犬瘟热病毒的临床狗事件在不同的宠物诊所发现在亚的斯亚贝巴。
临床检查的动物
国内的狗被带到不同的诊所确诊使用客户端历史和临床检查方法。那些动物表现出腹泻、眼部和鼻涕,咳嗽,vomition,数字角化过度,两相的发烧和中枢神经系统症状单一或混合形式被认为是疑似犬瘟热的临床病例和犬瘟热地带最快接受筛查的工具测试。
样本收集和运输
收集临床标本(眼、鼻拭子)犬瘟热疑似病例的临床检查的动物。拭子样本收集了眼部的无菌,鼻涕临床犬犬瘟热地带最快接受设备测试和冷冻在冰袋后立即收集和标本收集运输在病毒传输介质(VTM)用抗生素。添加了抗生素和抗真菌的防止微生物的生长。
犬瘟热地带最快装备测试
样品收集与临床体征提示狗犬瘟热被敏感测试,可靠的和具体的检测试纸测定,最快犬瘟热地带,为了检测狂犬病病毒抗原的鼻和眼部分泌物。这个测试是一个快速检测试纸检测犬瘟热的筛检试验病毒抗原在鼻和眼部放电。方法采用特定的抗体结合蛋白的独特组合,这是共轭染料颗粒,和第二个单克隆抗体固定到固相膜。作为测试样本流横向跨膜,具体结合抗体protein-dye共轭结合犬瘟热抗原的样本。然后,如果样本包含任何抗原犬瘟热,复杂的结合在固相抗体在测试区产生一个粉红色/紫色乐队。在缺乏犬瘟热抗原,没有线在测试区。液体继续沿着膜迁移并产生一个粉红色/紫色带控制区内证明试剂是否运行正常,下一个测试进行了正确的。测试组件包括标本管;试纸条在铝箔袋,犬瘟热测试样本收集棉签、滴瓶含5.0毫升缓冲稀释剂。
病毒隔离
每个拭子标本阳性筛选检测试纸测定领域分别接种于子培养单层维洛细胞标本在4000 rpm的离心20分钟后在组织培养瓶。60分钟的烧瓶在37°C的环境允许病毒吸收到细胞培养在湿润孵化器和日常检查细胞病变效应(CPE),观察是捷安特多核合胞体形成和分离的细胞。每个样本在维洛细胞接种,未经变质处理的烧瓶作为消极的控制被包含在每次运行。中的每个样本病毒隔离通道在细胞培养三次宣布标本负面的。
数据管理和分析
原始数据收集和输入计算机microsoft excel表格分析了然后使用占据,11个软件版本。卡方(x2)测试是用来确定协会的不同的风险因素和p值小于0.05的统计上的显著差异。
临床检查的结果
共有150只狗的临床检查,70家犬被确认为犬瘟热疑似病例根据客户历史和临床检查。这些确定情况下除了CD显示的相对重要性犬瘟热而比较它与其他类型的疾病研究期间表1)。
| 诊断疾病 | 频率 | 百分比(%) |
|---|---|---|
| 狂犬病 | 6 | 4 |
| 蛔虫 | 8 | 5.33 |
| 巴贝西虫病 | 13 | 8.67 |
| 脚气 | 6 | 4 |
| 犬瘟热 | 70年 | 46.67 |
| Ecto-parasitism | 6 | 4 |
| 狗咳嗽 | 7 | 4.67 |
| 细小病毒 | 13 | 8.67 |
| 杂项 | 13 | 13.35 |
表1。在亚的斯亚贝巴家犬的重大疾病临床诊断国内狗宠物诊所初步诊断病例。
筛选样品的最快犬瘟热地带包测试
70临床疑似病例的CD和测试使用最快的犬瘟热地带装备测试中,16例(22.9%)阳性。这是基于粉红色/紫色带线划定的地层测试和控制,形成在测试区,负样本。从16狗筛选试验测试的12(75%)小于一年,而4岁(25%)大于12个月大。11(68.75%)的阳性狗男性而其余5(32.25%)是女性。没有统计显著差异在两性之间的感染比例和不同年龄组的家犬。正样本2的16(12.5%)异国14(87.5%),其余的地方品种。有统计意义(p < 0.05)感染率的差异在不同的品种。所有六十积极的狗之前的历史没有疫苗接种CDV (表2)。
| 风险因素 | No检查 | No阳性 | 患病率(%) | Chi-value(χ2) | 假定值 |
|---|---|---|---|---|---|
| 性 | |||||
| 男性 | 51 | 11 | 21.57 | 0.1769 | 0.674 |
| 女 | 19 | 5 | 26.32 | ||
| 年龄 | |||||
| 小狗 | 48 | 12 | 25 | 0.3977 | 0.528 |
| 成人 | 22 | 4 | 18 | ||
| 品种 | |||||
| 异国情调的 | 24 | 2 | 8.33 | 4.3691 | 0.037 |
| 当地的 | 46 | 14 | 30.43 | ||
表2。犬瘟热地带最快装备测试结果与相关危险因素。
在细胞培养分离病毒
最快16犬瘟热地带工具包阳性标本处理和接种在组织培养CDV的隔离。12的16(75%)筛选阳性样本显示细胞病变效应(CPE)视为巨大的合胞体形成多核阳性标本中观察到24至48小时内接种,其他4负样本通道在细胞培养三次宣布为负。未经变质处理的消极控制包含在每次运行没有任何影响。
在临床家犬CD的临床特征
积极的12个狗在病毒隔离通过细胞培养和筛选试验,两系统表现出只有(vomition、腹泻、结膜炎、眼分泌物、抑郁,厌食症)。九狗显示系统和呼吸(9狗)和一条狗显示皮肤的组合(数字角化过度),系统性和呼吸道疾病的形式。没有狗只显示神经和呼吸的迹象(表3)。
| S.N | 性 | 年龄 | 品种 | 临床症状 | 疫苗接种史 |
|---|---|---|---|---|---|
| 1 | 男性 | 小狗 | 当地的 | 眼、鼻涕、咳嗽、出血性腹泻、抑郁、发烧、结膜炎 | 没有 |
| 2 | 男性 | 小狗 | 当地的 | 咳嗽,vomition,腹泻,鼻涕,结膜炎,厌食症 | 没有 |
| 3 | 男性 | 小狗 | 当地的 | 出血性腹泻、发烧、咳嗽、眼和鼻分泌物 | 没有 |
| 4 | 男性 | 小狗 | 当地的 | 咳嗽、眼部分泌物、结膜炎、腹泻、抑郁 | 没有 |
| 5 | 男性 | 成人 | 异国情调的 | 咳嗽、腹泻、抑郁、结膜炎、眼分泌物 | 没有 |
| 6 | 男性 | 成人 | 当地的 | 厌食、腹泻、抑郁、vomition、眼分泌物 | 没有 |
| 7 | 男性 | 成人 | 当地的 | 厌食、腹泻、vomition、眼、鼻分泌物 | N |
| 8 | 女 | 小狗 | 当地的 | 腹泻、抑郁症、厌食症、结膜炎、眼分泌物 | 没有 |
| 9 | 女 | 小狗 | 当地的 | 眼、鼻涕、厌食症、抑郁、无力、腹泻、结膜炎 | 没有 |
| 10 | 男性 | 小狗 | 当地的 | 咳嗽、腹泻、结膜炎、虚弱、发烧 | 没有 |
| 11 | 男性 | 小狗 | 当地的 | 咳嗽、出血性腹泻、眼和鼻分泌物 | 没有 |
| 12 | 男性 | 小狗 | 当地的 | 腹泻、眼部、鼻腔分泌物,结膜炎 | 没有 |
表3。描述CD的临床表现积极的通过筛选试验和动物细胞培养。
犬瘟热流行在非洲在世界的其他地方。在报告的特点几乎所有传染病在大多数发展中国家26]。几种方法已经使用了犬瘟热的诊断(27]。在这项研究中,CDV接受最快犬瘟热地带装备测试和孤立的细胞培养在维洛细胞临床生病的家犬。从疑似病例收集的70个样本的CD, 16(22.85%)被发现积极的与犬瘟热地带最快装备测试。这个结果远低于拉莎的发现和Srinikasan28]。报告70%所有流行基于conjuctival样本的筛选Dot-ELISA在印度。这可能是由于变化在全球分布的CDV菌株毒性,严重程度和收集到的样本的季节。犬瘟热的严重程度取决于病毒的毒性,免疫能力和影响狗的年龄。
在这项研究中,没有统计显著的家犬年龄组之间的差异除了数值不同。因此,小狗(小于1年)以及成人(大于1年)也同样容易感染CDV。这一发现不同于其他报告3 - 6个月大的狗更容易(29日]。根据拉莎和Srinikasa,狗的1 - 5岁,这意味着在我们的研究中成年人,容易感染CDV因为产妇在初级免疫抗体的干扰或贫穷的存储和处理动物的疫苗或免疫状态,这将导致疫苗抗体的快速消耗和缺乏常规疫苗接种的狗。小狗和成人平等的易感性的CD感染的年龄组在这项研究可能是因为缺乏常规疫苗接种的狗。如此,没有任何孕产妇派生犬瘟热传递给小狗开发免疫抗体,使平等的易感性两年龄组CD。改进疫苗减少了犬瘟热暴发的频率和大小表明缺乏对犬瘟热疫苗接种与几棵橡树在疾病的风险30.,31日]。然而,16 (22.85)CDV积极的狗在我们的研究一直未接种疫苗对CDV而不是狂犬病。
男女都同样影响(22:26%)CDV感染在这项研究。这是同义的结果(32]。在流行病学研究中250例在巴西和在德克萨斯州,美国(33]。CDV感染病例的比例是高的在当地品种的国内狗根据这项研究,而据27]。短头颅的狗已报告疾病的患病率较低,后遗症和死亡率与长头的品种。这可能是由于两个品种的免疫状态的变化(本地和外来)的狗也变化处理本地和外来品种的狗在埃塞俄比亚,管理两个品种之间的差异。
病毒感染的诊断的金标准很长一段时间一直在细胞培养分离病毒。病毒隔离不仅是重要的确认诊断和提供材料直接序列分析也为调查发病机理的动物实验和疫苗改进(34]。因此,病毒并不是孤立的从所有提交的眼和鼻拭子标本从病毒获得积极的狗。12拭子样品研究了CPE在24和48小时而其余4拭子样本的总负16眼和鼻拭子样本阳性筛选试验。这四个正样本筛选试验和成为负在细胞培养是可能是由于不同检测的敏感性和特异性。也可能由于问题而收集、运送标本的标本通过传输媒介和存储,在接种病毒污染子培养的单层细胞支持CDV的声明在接近冰点的环境中存活数周(0°C - 4°C)。隔离CDV使用Vero-Dog大满贯从大脑细胞在南非,脾脏和CSF (35]。因此,两个脑样本研究了CPE仅48小时后,脾脏样本相同的动物在24小时内产生了CPE,脑脊液样本研究没有产生CPE。
在目前的研究中,动物显示各种临床症状犬瘟热的特点。从12例(7.5%)阳性标本在测试中,两人全身只有迹象,9个狗的组合系统和呼吸迹象和一条狗显示皮肤的组合(数字角化过度),系统性和呼吸道疾病的形式。没有任何神经和呼吸的迹象。这些结果非常不同于回顾性研究133年在南非进行脑脊液样本34(25%)呈阳性,其中23日4和2只紧张,分别系统和呼吸的迹象。4人紧张和系统性的迹象,人都呼吸和系统性的迹象,也没有狗被观察到神经和呼吸的迹象(36]。在芬兰的一项研究中,据报道30%的死亡率,大多数经典的呼吸系统表现出数字角化过度和几例。淋巴结病已报告在尼日利亚狗与犬瘟热[37]。这种差异可能来自于不同菌株的分布在世界不同地区,不同品种在特定国家的易感性,疫苗接种的地位。
其余的负样本在这项研究中大多是来自动物表现出呼吸道和系统性。在这次调查,很多情况下被错误地诊断为犬瘟热当浏览其他相关临床症状通常可能由于病毒或细菌制剂可能显示CD基于临床检查诊断的困难
犬瘟热流行疾病在非洲和免疫天真的人口导致高死亡率的狗。本研究的结果显示CD在研究区域的存在。本研究表明,六十积极驯养狗的70例不接受定期免疫根据CD菌株主要是加剧了疾病发生。除此之外,目前的研究显示统计学意义差异的存在感染的比例和品种之间发生的CD表明,CD是当地家犬首席疾病。由于疾病是免疫抑制剂,主要与机会性感染有关,整个证实积极驯养狗显示在当前研究系统性CDV感染的迹象。因此,孤立的临床从健康的家犬,良好的管理实践,公众意识创造的疾病,常规免疫的动物根据流行株的CD是强制性的。
确认
表达我最衷心的感谢和特别确认去的所有成员国家动物健康诊断和调查中心(NAHDIC)的不断鼓励,指导,和对应的完成这项工作。
资金
这项研究是由Haramaya,埃塞俄比亚,最后论文的兽医博士从NAHDIC和作者使用的材料。
可用性的数据和材料
所有的数据是可用的请求。
作者的贡献
女士和ET参与研究设计、样本收集、数据分析和编写草案和最终版本的手稿。
伦理批准和同意参与
研究协议是国家动物卫生部门批准病毒血清学诊断和调查中心(NAHDIC) Sebeta。研究的目的是向客户解释和口头协议是在研究开始之前获得。
同意出版
还没有建立
相互竞争的利益
作者宣称没有利益冲突
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