隔离花蕾的芒果苷Mangifera籼稻L及其评价的体外抗菌活性

文摘

芒果(Mangifera籼稻L),属于Anacardiaceae家族,是一个富有的来源生物活性化合物芒果苷,这是一个自然的氧杂蒽酮C-glucoside。芒果苷(1、3、6,7-tetrahydroxy xanthone-C2-b-Dglucoside),被隔绝的各个部分Mangifera籼稻。芒果苷是一种药物活性的植物化学成分存在于大量的树皮,Mangifera籼稻的果实,根和叶子。芒果苷一直在世界的一些地区传统上被用来作为抗炎、抗菌、止痛、退热剂,抗氧化,抗肿瘤,抗病毒,免疫调节、驱虫剂和肥胖症的治疗。目前的工作目标是通过柱层析法分离芒果苷的乙醇提取的花蕾Mangifera籼稻L及其评估它抗菌活性。建立了结论性的孤立的化合物的结构薄层色谱,高效液相色谱法,UV / VIS、红外光谱和核磁共振光谱分析。孤立的芒果苷的体外抗菌活性研究对革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌的琼脂纸片扩散技术。孤立的芒果苷显示活动的解决方案对不同菌株的两种细菌种类:金黄色葡萄球菌(革兰氏阳性)和伤寒杆菌(革兰氏阴性)。目前的研究证实的抗菌效应孤立的芒果苷可进一步加工的发展作为抗菌剂。

关键字

葡萄糖苷;Ethanolic;抗菌;琼脂纸片扩散;革兰氏阳性

介绍

印度传统医学的丰富的文化遗产。印度药品提供了很多信息和传统的民间传说实践方面治疗重要的天然产物印度有丰富的文化遗产传统医学构成不同的组件,如阿育吠陀悉和Unani。这些传统药物系统的发展与安全的角度来看,功效和质量将不仅有助于保护传统的遗产,也合理化使用天然产品在医疗保健1]。非传统医学已成为近年来更受欢迎(2]。天然产品是我们最成功的药物来源。

植物化合物,用于药品的使用在世界范围内逐渐增加。制药行业的研究和发展推力是专注于开发新的创新/土著植物性药物通过调查从传统医学系统(3]。每个工厂都是像一个化工厂能够合成数量有限的高度复杂和不寻常的化学物质来源于植物视为重要的目前使用的药物,虽然其他药物简单合成修改的天然产品4]。Mangifera籼l . (Anacardiaceae)是世界上最重要的和丰富的热带水果和印度对世界芒果生产的一个主要部分。在印度佳肴,芒果被认为是所有的水果之王。Mangifera籼l . (Anacardiaceae)是世界上最重要的热带水果之一,像一些已知69种物种(5)和印度贡献世界生产的重要组成部分。芒果被认为是印度美味水果之王。这棵树(Mangifera籼)是印度次大陆和原住民已在印度栽培4000多年。它被认为已经达到东亚公元前第四和第五世纪之间和种植在东非和之后在巴西,西印度群岛,中国、美国、加勒比地区和墨西哥。

芒果(Mangifera籼l .),最重要的水果Anacardiaceae家庭,是一种热带水果,包括高营养和药用价值。据报道,芒果在Indo-Burmese地区首次发现,大约4000年前,但现在它被商业化种植在超过87个国家(6]。芒果苷(C₁₉H₁₈O₁₁),glucoxanthone (1、3、6, 7-tetrahydroxyxanthone-C 2-b-D-glucoside),是一个活跃的植物化学的报道出现在不同的部分Mangifera籼L即树叶(7)、水果(8),茎皮(9],心材[10和根11]。芒果苷是一种天然C-glucoside氧杂蒽酮(2-C-β-D-gluco-pyranosyl - 1、3、6, 7-tetrahydroxyxanthone;C₁₉H₁₈O₁₁;分子量422.35;熔点、无水271°C),多酚氧杂蒽酮被报道在各种被子植物和蕨类植物(12]。复合芒果苷存在于各种植物的家庭在不同浓度的通常是糖苷。芒果苷的植物来源包括:考察知母,Aphloia theiformis, Arrabidaea patellifera,Arrabidaea samydoides,Bersama abyssinica,木棉木棉,木棉malabaricum, Cratoxylum cochinchinense,独眼畸形genistoides,独眼畸形subtarnata,叶形mangiferae、叶形pyrrosiae龙胆lutiae, Gentianella nitida,贯叶连翘,Mangifera籼,Mangifera odorata,远志hongkongensis, Phaleria蚌,Phaleria macrocarpa, Pyrrosia gralla,根茎毛皮,Salacia oblonga, Salacia网状,獐牙菜属chirata,獐牙菜属macrosperma,獐牙菜属mussotii, Trichomanes reniforme, Zizyphus cambodiana。

最简单的芒果苷来源,然而,是芒果植物(Mangifera籼L)。芒果苷的主要组件(10%)Mangifera籼(芒果)属于家庭Anacardiaceae,主要生长在热带和亚热带地区,广泛应用于民间的各种药物治疗适应症(13]。发现不同的多酚化合物在芒果(14),芒果苷(7-tetrahydroxyxanthone C-2-β-D-glucopyranosyl-1 3 6日,也叫C-glucosyl氧杂蒽酮)是不同的。芒果苷是一种热稳定分子和各种天然药物活性的植物化学成分生物活性。

芒果苷,传统上使用的本地居民的玻利维亚,南部属圭亚那,安的列斯群岛、哥伦比亚、菲律宾和印度治疗许多疾病,随后被证明有多种抗菌等药理作用15),抗肿瘤,免疫调节,抗艾滋病毒(16,抗糖尿病17),氧化18)、驱虫剂和抗过敏(19),抗炎活动(20.],抗病毒[21[],macrophage-inducing活动22]。

最近,世界卫生组织(世卫组织)报告了大约119植物的药品,其中74%被用于现代医学与传统使用直接相关的草本植物药。在目前的情况下,约80%的世界人口目前为初级卫生保健使用草药。剩下的20%,他们主要居住在发达国家,消费昂贵的药物(23]。

自古以来,人们一直在探索大自然,特别是植物,寻找新的药物。这导致了大量的使用疗效的药用植物治疗各种疾病(24]。在印度,几乎95%的处方是植物性的传统系统Unani,阿育吠陀,顺势疗法和悉25]。植物的研究仍主要为次生代谢产物的发现小说。大约80%的产品是植物起源和2003年销售超过650亿美元(26]。

从植物中天然产物的发现感兴趣的抗菌化合物。今天,抗菌药物发现的速度已经放缓。在20年期间从1983年到2002年,FDA(食品与药物管理局)批准新的抗菌药物减少了56%27]。

由于报告增加人类病原体耐药性的发展以及某些抗菌药物的副作用,有必要寻找新的代理商,更好,更便宜、无副作用的治疗传染病特别是在发展中国家。各种各样的植物/天然产品用于治疗感染。发朵成分被发现抑制细菌、真菌、病毒和害虫(28]。药用植物有其内在的抵抗病原微生物的能力,这使得研究人员调查他们的行动的机制和隔离活性化合物。这使得开发药用植物治疗微生物感染的植物和人类开发新的抗菌药物。基于药用植物抗菌代理人代表一个巨大的未开发的药物来源。从而进一步探索植物抗菌药物需要为治疗传染病的发生在植物和人类的同时减轻许多的副作用常与合成抗菌药物。

次级代谢产物合成芳香植物拥有无限的能力包括酚类、酚酸类、醌类、黄酮类、黄酮、黄酮醇、单宁和香豆素类29日,30.]。这些化合物表现出抗菌效果和作为植物对病原微生物的防御机制。

本研究目的是隔离芒果苷的花蕾Mangifera籼使用不同的提取溶剂和孤立的芒果苷被薄层色谱,高效液相色谱,UV / VIS、红外光谱和核磁共振光谱分析。孤立的化合物被筛查对革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌的体外抗菌活性菌株分离人类感染。

材料和方法

工厂收集和验证

花蕾是来自当地的树木Mangifera籼胡格利,Sugandha,在2月的早晨。印度的植物材料验证植物调查,通过V P 23日普拉萨德先生^{理查德·道金斯}2014年5月的凭证标本no-CNH科技II / 102 / 47/2014 /分配,在凭证标本保存,供进一步参考。

芒果苷的提取

的花蕾Mangifera籼第一次被切成小块,然后他们干在室温和进一步的粗粉。m .籼稻的粗粉花蕾提取的详尽与石油醚(60 - 80°C)在索氏仪器56小时,消除脂肪。脱脂奶粉花蕾被使用索氏提取器所需数量的乙醇(95%)为溶剂21小时,集中在减压下产生半固体的质量(31日]。

半固体的质量是脱脂的反复,最后在室温下溶解在乙醇。ethanolic提取进一步集中在降低的压力下,产生了一个黄色无定形粉末。

隔离的芒果苷(32]

干酒精萃取物吸附在硅胶(60 - 120目)和色谱仪在硅胶柱用石油醚(60 - 80°C)。列筛选了与氯仿:丙酮:甲酸(8:1.5:0.5),使芒果苷作为一个淡黄色无定形粉末。这在使用乙醇结晶产生淡黄色针形状的芒果苷晶体。

最后,芒果苷的淡黄色针状晶体是孤立的和干。

孤立的化合物进一步使用薄层色谱特征,高效液相色谱,UV / VIS、红外光谱和核磁共振分光光度计。孤立的化合物的熔点也决定。

孤立的芒果苷的识别薄层色谱法(33,34]

吸附剂:预涂和预先激活TLC板(硅胶GF 254)被用于分析。

流动相使用:分离是最好的实现使用氯仿:丙酮:甲酸(8:1.5:0.5)作为流动相。

样品制备:0.05% w / v的样本(芒果苷)在乙醇和准备10μl应用TLC板。

检测方法:氨蒸汽作为喷雾剂。TLC板一直在观察紫外线室10分钟和Rf值在366海里。

高效液相色谱法(35,36]

芒果苷的测定是通过反相高效液相色谱法(rp)。分析测定产物是由(安捷伦1260∞)与紫外检测在278海里。

色谱分离了海波西尔™ODS C₁₈分析柱(4.6×100毫米;3.5μm)使用氯仿:丙酮:甲酸(8:1.5:0.5)作为流动相,在流量的1毫升最低为1,在室温下。注入体积是10μL,柱温25°C。检测是实现在278海里。

氯仿、丙酮,甲酸的高效液相色谱级采购从默克公司(达姆施塔特,德国),使用前未经纯化。

五(5)毫克的孤立的芒果苷晶体在10毫升甲醇溶解,过滤,注入高效液相色谱柱(ODS C 6倍₁₈),保留时间确定和比较的参考标准。

紫外光谱(37]

一(1)mg孤立的芒果苷晶体的溶解在甲醇和的最大吸收波长测定紫外可见分光光度计(uv - 1800 - 240 v日本岛津公司)。扫描执行分离化合物的波长范围200 - 400海里,而参考标准。

傅里叶变换红外光谱(38]

一(1)毫克的孤立的芒果苷晶体测量用溴化钾(KBr)颗粒方法在红外光谱谱仪(Bruker-Alpha)。

红外数据孤立的化合物与芒果苷的参考标准。

核磁共振光谱(39]

核磁共振光谱的孤立的芒果苷晶体得到力量皇冠ii - 400 MHz,光谱仪使用经颅磁刺激作为内部参考。

在体外抗菌评价(40,41]

准备:蛋白胨、氯化钠、牛肉膏是重要求,倒锥形烧瓶。水被添加到它。制备的pH值测量和琼脂添加到它。然后成交了。这是在121°C,然后由高压灭菌消毒15 psi 15分钟(表1)。

准备:蛋白胨、牛肉膏,氯化钠重要求,倒锥形烧瓶。水被添加到它;pH值测量和调整N / 10氢氧化钠。体积组成。这是在121°C,然后由高压灭菌消毒15 psi 15分钟(表2)。

准备(44]:6试管贴上标准0.5,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,上面数量如表所示,w / v 1%无水氯化钡溶液,稀释1% v / v纯硫酸被添加的解决方案。使用0.5麦克法兰标准,视觉比较细菌悬液的浊度与麦克法兰的浊度标准执行。的浊度测试暂停然后调整直到匹配标准(表3)。

琼脂扩散法(45,46]

在体外抗菌活性是由琼脂扩散法根据国家临床实验室标准委员会(NCCLS)。各种压力的两种细菌:金黄色葡萄球菌(革兰氏阳性)和伤寒杆菌(革兰氏阴性)。

营养琼脂板被浇注准备15毫升无菌petridishes熔化的媒体。盘子被允许巩固5分钟和标准化培养液悬浮均匀擦洗,培养液被允许干5分钟。孤立的芒果苷晶体受到连续稀释如下:10毫克/毫升,5毫克/毫升,2.5毫克/毫升和1.25毫克/毫升。的帮助下无菌软木钻孔机,威尔斯(6 - 8毫米直径)在琼脂板的中间挖。0.5毫升的样品溶液制备成然后引入适当标记无聊琼脂。每个板块也有控制,只有无菌水是补充道。

板块在37°C孵化24小时(47]。孵化后的直径抑制区形成每个在毫米测量和记录。

结果

色谱数据

高效液相色谱色谱:后图1显示了LC色谱获得的孤立的芒果苷的提取的花蕾Mangifera籼(表4)。

熔点:孤立的芒果苷的熔点是269°C。

紫外光谱法:孤立的芒果苷的紫外光谱和参考标准在甲醇显示两个主要峰值如下:278 nm和215 nm。

傅立叶变换红外光谱数据

红外数据孤立的化合物与参考标准相比,从光谱我们可以说ethanolic的孤立的化合物提取的花蕾Mangifera籼可能是芒果苷。芒果苷的结构图2和表5所示。

核磁共振数据:NMR数据(δppm)的孤立的芒果苷获得:13.81 (ArOH分子间键,1 h), 7.9 (ArOH 3 h), 6.82 (Ar-H 1 h), 6.36 (Ar-H 1 h), 7.4 (ArH 1 h), 2.5 (c哦,4 h), 3.7 (-CH-O - 2 h), 3.3 (-CH-O - 2 h), 3.5 (ch - 3 h)。

抗菌活性

抗菌活性的孤立的芒果苷对革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌了表6。

讨论和结论

在目前的研究中,花蕾Mangifera籼首先是与石油醚脱脂(60 - 80°C)之前用95%的乙醇提取。紧随其后,在硅胶色谱提取和筛选了氯仿:丙酮:甲酸(8:1.5:0.5)获得芒果苷作为一个淡黄色针形状的晶体。

孤立的芒果苷晶体通过射频,熔点,高效液相色谱法和紫外,FRIR和核磁共振光谱分析。从ethanolic获得孤立的芒果苷提取的花蕾Mangifera籼显示相同的TLC色谱法,高效液相色谱,紫外,红外光谱和核磁共振谱对芒果苷的参考标准。吸收最大值278 nm和215 nm孤立的芒果苷晶体密切相关的报告参考标准紫外光谱数据。芒果苷也证实了质子核磁共振信号。

可用的孤立的芒果苷的结构说明文献揭示了结论性的芒果苷(C的结构₁₉H₁₈O₁₁)可以建立glucoxanthone (1、3、6, 7-tetrahydroxyxanthone-C 2-b-D-glucoside)。

孤立的芒果苷的体外抗菌活性评估通过使用各种压力的两种细菌种类:金黄色葡萄球菌(革兰氏阳性),伤寒沙门氏菌(革兰氏阴性)。孤立的芒果苷的解决方案被发现对前途的抗菌活性对革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌。目前的研究发现了一个非常有前途的和现成的来源(芒果,Mangifera籼)治疗感染由细菌引起的。这是特别重要,因为人类病原体耐药性增加不仅在发展中国家,在世界各地由于滥用抗生素48]。所以从目前筛查可以得出结论:芒果苷具有抗菌活性和可能的发展做进一步的处理抗菌药物。

引用

1. Mukherje PK Wahile a综合方法对药物开发从印度阿育吠陀和其他系统的药物,J Ethnopharmacol。2006;103:25-35。
2. 艾森伯格DM,凯斯勒RC,促进C, Norlock铁、卡尔金斯博士等等。非传统医学在美国。患病率、成本和使用的模式。郑传经地中海J。1993;328:246-52。
3. Patwardhan B Vaidya亚行Chorghade m .阿育吠陀和天然产物药物发现。当前的科学。2004;86:789 - 99。
4. 匿名的,质量控制方法对药用植物材料(日内瓦)授权出版世界卫生组织,新德里:A.I.T.B.S.出版商和经销商(登记);2002年。- 24页。
5. Stoilova我Gargova年代,Stoyanova,何鸿燊l .抗菌和抗氧化活性的多酚芒果苷,草Polonica。2005;51 (1/2):37-44。
6. Tharanathan RN, Yashoda嗯,Prabha TN。芒果(Mangifera籼稻l .)“水果之王”——概述。食物牧师Int。2006;22 (2),95 - 123。
7. 德赛PD、Ganguly AK Govindachari TR, Joshi BS,令Kamat VN等。一些印度工厂的化学调查。印度J化学1996;4:457-9。
8. 马埃尔安萨里,Reddy KK Sastry KN, Nayudamma y Mangifera籼稻的多酚。植物化学,1971;10 (9):2239 - 41。
9. El安萨里马Rajadurai年代,Nayudamma y研究Mangifera籼稻树皮的多酚。皮革科学。1967;14:247-51。
10. 拉马纳坦JD,瑟哈德里TR。芒果苷的宪法。咕咕叫科学。1960;29:131-2。
11. 尼噶SK, Mitra CR。选民的芒果(Mangifera籼稻)的根源。印度J化学1964;2:378-9。
12. Sethiya NK, Mishra SH。芒果苷的调查,作为一个有前途的天然多酚氧杂蒽酮的多个目标阿尔茨海默病生物活性产品自然杂志。2014;4 (2):110 - 119。
13. Coe FG,安德森GJ。检查使用的药用植物加拉„一±funa东部尼加拉瓜的生物活性化合物。J Ethnopharm。1996;53:29-50。
14. Masibo M,他问:大芒果多酚及其对人类健康的潜在意义。压缩机转速食品科学。食物Saf。2008;7,309 - 319。
15. Srinivasan KK,苏党卫军,Kotaian公里,Shivananda PG。芒果苷的抗菌活性。Arogya。1982;8:178。
16. 年代,古哈Ghosal年代,将抗肿瘤,免疫调节,抗艾滋病影响的芒果苷:一种天然glucosylxanthone。化疗。1996;42:443-51。
17. Ichiki H,三浦T, Kubo说,石原E,小松Y, et al .芒果苷的抑制效果与运动对2型糖尿病患者的血脂。生物制药小羊。1998;21:1389 - 90。
18. 加西亚Leiro J D, M,埃斯卡兰特Delgado R, Ubeira调频。茎的驱虫剂和抗过敏药活动Mangifera籼稻l .组件Vimang和芒果苷。Phytother Res 2003;17:1203-8。
19. 加里多G,冈萨雷斯D, Lemus Y,加西亚D, L罗德伊罗,等。在vivoandin Mangifera籼稻L .提取物体外抗炎活动(VIMANG)杂志》2004;50 (2):143 - 9。
20. 郑女士,Lu ZY。芒果苷的抗病毒效应和isomangiferin Herpex单工病毒。下巴地中海j . 1990;103:160-5。
21. 年代,古哈将U, Ghosal S腹膜巨噬细胞的激活芒果苷:一种天然氧杂蒽酮。Phytother杂志1993;7:107-10。
22. 达席尔瓦EJ Horeau L。药用植物:重现健康援助。电子生物技术杂志,1999;2 (2):56 - 70。
23. Verpoorte r . Chemodiversity和次生代谢物的生物作用,一些想法为药物开发选择植物材料。Proc Phytochem Soc欧洲,Kluwer出版社,1998;43:11-24。
24. Sandhya B,托马斯,伊莎贝尔W, Shenbagarathai r . Ethnomedicinal植物使用的Valaiyan Piranmalai山社区(保留森林),Tamilnadu,印度。一个试点研究。补充和替代药物,2006;3:101 - 114。
25. Satyavati问,古普塔AK和经脉N,药用植物的印度,印度医学研究理事会,新德里,印度,1987。
26. Patwardhan B, Vaidhya ADB和Chorghade M,“阿育吠陀和天然产物药物发现,当前Sci, 2004;86:789 - 799。
27. Sumthong P, Verpoorte r .开发抗菌化合物从自然资源。:抗菌化合物从农业加工业方面产品,阿姆斯特丹,PrintPartners Ipskamp BV 9到18。
28. 马约莉MC。“植物产品作为抗菌药物,”中国Microbiol启1999;12日,564 - 582。
29. Cichewicz RH,索普PA。智利辣椒(辣椒物种)的抗菌性质及其在玛雅药物使用。J Ethnopharmacol。1996;52个;61 - 70。
30. Eloff约。应该使用哪个萃取剂的筛选和隔离抗菌素组件从植物?J。Ethnopharmacol, 1998;60 (1);1 - 8。
31. Lucchesi我,Chemat F, Smadja j .无溶剂微波提取的精油芳香草本植物;与传统hydro-distillation进行比较。J Chromatogr 2004;1043:323 - 327。
32. 辛格SK,女子RM, Sinha SK,它CC,普拉萨德SK。抗菌评价芒果苷及其合成类似物。亚洲太平洋热带生物医学杂志。2012;S884-S887。
33. 慕克吉PK。草药药物的质量控制:植物的评价方法。2002年商业视野。
34. Sethiya NK, Nahata武断的话VK。比较薄层色谱在印度调查商业Shankhpushpi来源。生药学杂志。2009;1 (3):224 - 226。
35. 所罗门年代,塞维利亚,贝当古R,罗梅罗,巴斯LN,等等。“芒果苷的提取从Mangifera籼稻l .树叶利用微波辅助技术”埃米尔。J食物阿格利司。2014;26 (7):616 - 622。
36. Sethiya NK, Mishra SH。快速验证高性能薄层色谱方法同时估计的芒果苷和东莨菪亭Canscora decussata(印度南部Shankhpushpi)提取。航空杂志上Brasileira de Farmacognosia, 2015;25日:193 - 198。
37. Jutiviboonsuk, Sardsaengjun c”三个泰国芒果叶中芒果苷(Mangifera籼稻l .)品种”。印第安纳州制药Sci.2010;6 (3)122 - 129
38. 有机化合物的光谱数据基地深发展(无= 27792)。可以在:http://sdbs.db.aist.go.jp/sdbs/cgi-bin/direct_frame_top.cgi。
39. 辛格SK, Kumar Y, Kumar党卫军,Sharma VK、Dua K,等等。“芒果苷类似物的抗菌评估”。印度J制药Sci 2009;71:328 - 331。
40. Ushimaruπ;达席尔瓦MTN;DiStasi信用证;费尔南德斯Jr.LBA“药用植物提取物的抗菌活性”。巴西J Microbiol。2007;38:717 - 719。
41. Selvamohan T,华美达V,热带雨林基肖尔党卫军。选定的药用植物的抗菌活性与一些选定的人类致病细菌。珀拉吉娅研究图书馆应用科学研究进展。2012;3 (5):3374 - 3381。
42. Collee詹,弗雷泽AG) Marmion BP,西蒙斯“麦基和麦卡特尼实用医学微生物学”。(14 thedn)爱思唯尔;2006:103 - 107。
43. Versalovic J,卡罗尔KC,凡克G,约根森JH,兰德里ML,等等。中国的手工。Microbiol。ASM科学2007。
44. 查宾KC,劳德黛尔t .试剂、污渍和媒体:细菌学,p . 358。:MurrayP。R。,BaronE. J., JorgensenJ. H., PfallerM. A., and Yolken R. H.(ed.), Manual of Clinical Microbiology,[8th ed]. ASM Press, Washington, D.C 2003
45. Doughari JH, Manzara美国原油叶提取物的体外抗菌活性Mangifera籼稻绝壁,非洲J Microbiol。杂志2008;2,67 - 72。
46. Shrivastava DK Das K,女子地基处理。技术评价药用植物产品作为抗菌剂:当前方法和未来的趋势。J地中海植物Res.2010;4 (2):104 - 111。
47. Mahalngam。r . Bharathdasan r . Ambkapathy V, Panneerselvam a .抗菌活性的药用植物的研究对人类致病性微生物。亚洲的植物Sci Res.2011;1 (3):86 - 90。
48. 巴列PS,“生物耐多药和抗生素管理,”外科诊所北美,2012;92 (2):345 - 391。