液相色谱测定Epalrestat估计和Methylcobalamin制药配方。

文摘

一个敏感、选择性和精确高效液相色谱方法的开发和验证的同时测定Epalrestat和Methylcobalamin都作为一个大部分药物和配方。方法采用Luna C18柱(250 x 4.6毫米id、5μm粒度)的固定相而乙腈:0.02 KH2PO4缓冲区(挺v / v, pH值6.5)作为流动相。Epalrestat Rt和Methylcobalamin被观察到的是5.2和2.1分钟,分别。分析进行了吸光度模式在254海里。的线性回归分析数据校准块呈良好的线性关系Epalrestat和Methylcobalamin 1 - 40μg /毫升的浓度范围和相关系数分别为0.2 -10μg /毫升Methylcobalamin Epalrestat的0.9995和0.9991。定量限是0.2μg /毫升epalrestat methylcobalamin 0.8μg /毫升。方法验证按照我的指导方针,它被发现是准确的,精确和鲁棒性。销售成功配方进行了分析。

关键字

Epalrestat (EPL) Methylcobalamin (MCA),液相色谱,验证

介绍

EPL是化学2 - [(5 z) 5 - [(E) 3-phenil-2-methylprop-2-enylidene] 4-oxo-2-thioxo-3-thiazolidinyl] [1,2]。Epalrestat工作通过抑制醛糖还原酶酶(3]。MCA化学3 - [({2 - [(diaminomethylidene)氨基]1,3-thiazol-4-yl}甲基)sulfanyl) - n -sulfamoylpropanimidamide [4,5]。MCA活跃形式的维生素B12。它是用于治疗周围神经病变、糖尿病性神经病(6,7]。

文献调查显示没有发表层析法这种组合的药物。本文描述了一个简单、准确、精确的方法反相液相色谱估计的EPL和MCA片剂剂型。该方法优化和验证按照国际协调会议(我)指南7]。在目前的工作,已经取得了一次成功的尝试同时估计这些药物rp -方法。

材料和方法

仪器

珀金埃尔默仪器美国、200系列、Phenomenex Luna C18柱(250 x 4.6毫米id、5μm粒子大小)是用于分析方法开发。Totalchrom导航器高效液相色谱的色谱数据处理6.3.1软件版本。

材料

Epineurone平板(50毫克EPL和0.5毫克MCA)贵族制药有限公司生产的基于“增大化现实”技术的使用的所有化学品和试剂级。

试剂

所有使用的化学品都是基于“增大化现实”技术的等级。

波长选择的分析

用紫外检测的高效液相色谱方法的灵敏度取决于检测波长的选择。理想的波长是给好反应的药物发现。覆盖的紫外光谱吸收药物显示EPL和MCA明显在254海里,所以检测进行了254 nm (图1)。

的制备流动相

缓冲区0.02 KH2PO4是由重达2.72克KH2PO4和溶解在1000毫升的水。流动相是由混合100毫升0.02 KH2PO4缓冲和乙腈的900毫升。pH值调整到6使用o-phosphoric酸(1%)或三乙基胺(1%)的流动相是6。解决方案是通过绘画纸过滤滤纸41号,用近10分钟,这个解决方案是作为流动相。

制备标准股票的解决方案

EPL(10毫克)和MCA(10毫克)准确称重和转移到两个独立10毫升容量瓶和乙腈溶解在几毫升。卷都是由与乙腈的产生解决方案包含1000μg /毫升的EPL和1000μg /毫升的MCA,分别。适当的整除从上面的解决方案被与流动相稀释获得最终的浓度100μg /毫升和100μg /毫升的EPL和MCA分别。

色谱条件

Phenomenex Luna C18柱(250 x 4.6毫米id、5μm粒子大小)与流动相色谱柱平衡0.02 KH2PO4缓冲:乙腈(10:90,v / v)使用。流动相流速保持在1毫升min-1and废水监测在254海里。使用20μL样本注入固定循环,和总运行时间是7分钟。

EPL和MCA校准曲线

适当的EPL的整除的股票解和MCA同样摄于10毫升容量的玻璃瓶。体积与流动相是由马克,获得最终的浓度1、5、10、20、40μg /毫升的EPL和0.2,0.5,1、5和10μg MCA /毫升,分别。

验证参数

线性

EPL被发现的校准曲线线性第1 - 40的μg /毫升相关系数为0.9995。MCA被发现的校准曲线的线性范围0.2 -10μg /毫升,相关系数为0.9991。校准曲线的回归分析报告(表1、2)(图2、3、4)。

精度

盘中精度

盘中的研究是由测量响应浓度为3一天3次。% EPL RSD为发现0.74 - 1.27%和0.77 -1.52% MCA (表3、4)。这些发现%相对标准偏差值小于±2.0表明,方法是精确的。

Interday精度

interday研究进行了通过测量响应3不同浓度为3 * 3天。% RSD为发现MCA EPL 0.76 - -2.01%和0.78 - -2.14% (表3、4)。这些发现%相对标准偏差值小于±2.0表明,方法是精确的。

可重复性研究

重复性研究进行了通过测量响应一个集中一天6次。% RSD为发现MCA EPL为0.42%和0.46% (表5)。这些发现%相对标准偏差值小于±2.0表明,方法是精确的。

精度

方法的准确性取决于计算复苏的EPL和MCA方法标准的补充。复苏发现100.56% -111.91% -101.71%和109.18%分别EPL和MCA。比较高的值表明,方法是准确的(表6)。

检测极限并限制的量化

LOD是能被探测到的分析物的最低水平。从色谱图的视觉观察,LOD EPL被发现0.08μg /毫升,MCA被发现0.2μg /毫升。定量限是分析物的最低水平,可以检测和量化。定量限的EPL被发现0.2μg /毫升和定量限MCA被发现0.8μg /毫升。

鲁棒性

鲁棒性的方法研究了通过改变流动相组成、流动相的pH值和流量(表7)。

溶液的稳定性

标准和样品溶液的稳定性EPL和MCA评估在室温下24小时。两种药物被发现是稳定的复苏超过98% (表8)。

系统适用性参数

系统适用性试验和结果进行了总结表9。

分析销售配方

20片重和细粉。平板电脑粉相当于10毫克EPL(和0.1毫克MCA)称重和转移到25毫升容量瓶包含几毫升的流动相。瓶是用近5分钟。解决方案是通过绘画纸过滤滤纸41号另一个25毫升容量瓶和体积是由马克用流动相(股票)。MCA估计进行了从股票在254海里。从股票一个适当的整除吸管在10毫升容量瓶,与流动相体积,获得40μg /毫升的EPL(股票B)。EPL估计进行了从股票B在254海里。通过使峰面积进行定量的回归方程和EPL和MCA测定(表11)。C

结论

EPL的rp方法同时估计,MCA了。方法验证按我Q2 (R1)指南精度,精度、线性、特异性和鲁棒性。发达的方法已成功应用于销售配方。

引用

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