埃博拉病毒的文献综述

文摘

埃博拉病毒是公认的最大致命的病原体污染的人。当前埃博拉疫情在西非是闻所未闻的大小和持续时间,截至11月30日,2014年,表明没有消退的迹象和症状。主要次例埃博拉病毒疾病已经意识到在美国,来自患者谁旅行的潜伏期。爆发产生的国际问题。埃博拉病毒病是一种严重和频繁的致命疾病的埃博拉病毒(EBOV)。EVD疫情通常开始从一个未婚十有八九人畜共患传播的情况下,观察到利用人际传播通过直接接触或接触病毒污染的物理流体或发炎。雷竞技网页版EVD病死率高费用;的特点通过发热、胃肠道和多个器官功能障碍综合征迹象。诊断需要混合的病例定义和实验室检查,通常实际时间逆转录PCR无意中发现病毒RNA或快速诊断检查完全基于免疫测定偶然发现EBOV抗原。随机科学试验的结果的临床实验疗法EVD证明生存受益于两个单克隆抗体的商品集中在EBOV膜糖蛋白。 EVD is currently one of the international's most feared diseases. In this literature evaluation, we describe the epidemiology, scientific features, diagnosis, and remedy of EVD.

关键字

埃博拉病毒,埃博拉出血热、公共卫生、传输、提供者、流行病学、分析、疫苗、治疗、控制、防范

介绍

埃博拉病毒,也称为埃博拉病毒病(EVD)或埃博拉出血热(EHF),是一种病毒性出血热在不同灵长类动物和人,因为埃博拉病毒。(1]症状通常开始到处都在天,3周后变成发炎的病毒。第一症状和体征通常发烧、喉咙痛、肌肉疼痛和并发症。这些通常是伴随着使用呕吐、腹泻、皮疹和降低肝脏和肾脏功能1此时,一些人开始流血每个内部和外部。这种疾病杀死25%至百分之九的感染者常见的大约50%。定期死亡是由于流体冲击损失,通常发生后6到16天的主要迹象出现(2]。埃博拉病毒(EBOV)属于亲戚圈丝状,属埃博拉病毒,通常原因致命感染人1]。EBOV疾病(EVD)也可能显示一个以上的,连续的,和nonspecific-ailment迹象如过度发热、头痛、呕吐、厌食、腹泻、疼痛的肌肉群(3]。不明原因的出血在眼睛、鼻、牙龈,和肠道发生在高级阶段(4]。第一次爆发的EVD变成表示,1976年在刚果民主共和国(5]。从那时起,已经有评论的小EVD暴发在一些国际的位置在非洲雷竞技苹果下载中部,包括苏丹和乌干达,估计有2350例EVD之间发生的死亡(6)(图1)。

病毒的分类

•(选手):病毒

•域:Riboviria

•王国:Orthornavirae

•门:Negarnaviricota

•类:Monjiviricetes

•顺序:Mononegavirales

•家庭:丝状

•属:Ebolavirus

物种

•Bombali ebolavirus

•本迪布焦ebolavirus

•莱斯顿ebolavirus

•苏丹ebolavirus

•大森林ebolavirus

•扎伊尔ebolavirus

病毒基因组

EBOV属于订单Mononegavirale (unmarried-stranded,不分节,预感RNA病毒)的家庭丝状,属Ebolavirus [7]。自己的家庭的其他成员包括Marburgvirus和Cuevavirus,其中Marburgvirus另外被卷入类似EBOV造成出血性疾病,和这两个是丝状病毒形状。属Marburgvirus包括一个物种。属Cuevavirus由一个未婚的物种,Lloviu Cuevavirus Lloviu病毒(LLOV)。EBOV在1976年成为第一个孤立接近扎伊尔谷在刚果民主共和国(扎伊尔)加油叫从孤立的区域,最初命名为一个类似于博尔纳病毒基因的病毒,成为后来变成EBOV在12个月的2002年。属Ebolavirus由5种即,(1)扎伊尔Ebolavirus(扎伊尔病毒ZEBOV),(2)苏丹Ebolavirus(苏丹病毒SUDV),(3)莱斯顿Ebolavirus(莱斯顿病毒RESTV), (4) TaA森林Ebolavirus (TaA森林病毒TAFV)和(5)本迪布焦Ebolavirus(本迪布焦病毒BDBV)和凯特科特迪瓦Ebolavirus使用配置的埃博拉病毒和它的基因组。埃博拉病毒具有negative-feel RNA基因组与明显14000海里长度3核蛋白质和5的RNA聚合酶停止。

流行病学

第一的埃博拉病毒感染病例已经有人在扎伊尔(现称为刚果民主共和国(DRC))在1976年。有318实例和280例死亡,病死率为88%。此次疫情的传播变成追溯到使用受污染的针头在医院门诊恩扎拉气质设施扎伊尔北部扬布库任务。此后,频繁暴发发生在中部和西部非洲。埃博拉病毒的最大常见物种负责疫情是扎伊尔ebolavirus,第二个最大的常见物种被苏丹埃博拉病毒。扎伊尔埃博拉病毒变得负责西非的爆发,开始于2014年,2016年完成。这是在2014年3月开始,是最大的爆发因为病毒变成于1976年首次被发现。基因测序证明,从受感染患者分离的病毒在2014年爆发是九十七年%类似于病毒第一次出现在1976年。它也负责小2017年至2021年在刚果民主共和国暴发。扎伊尔ebolavirus有记得病死率费用高达%九十前的爆发。 Direct contrast of case fatality rates among unique Ebola treatment centers and outbreaks need to be interpreted with warning as many variables can introduce bias and skew even massive cohort facts. The case fatality charge at some point of the 2014 outbreak changed into up to sixty-four. Three% in clinic admissions, falling to 31. Five% in some treatment facilities in West Africa and around 20% in sufferers managed outside West Africa.(28) In contrast to this, the Sudan ebolavirus has a decrease case fatality charge of 53% to 65% in previous outbreaks, with the biggest outbreak occurring in 2000 [4]。只有有一个本迪布焦ebolavirus爆发。2007年在乌干达西部,这爆发病死率为25% (6)(表1)。

表1。IAV,流感病毒-埃博拉病毒药物。

作用方式

埃博拉病毒需要获得的唯一席卷系统称为宏吞饮,它允许病毒“吃”通过使用波细胞膜的姿态(图4)[2]。一旦进入细胞,病毒劫持移动的设备创建额外的副本。埃博拉病毒感染人类细胞。(A) (B)埃博拉病毒的蛋白质称为糖蛋白是骄傲的膜结合受体(红色)在细胞表面。(C)的绑定这些受体触发细胞“吃”过程称为宏观吞饮,导致病毒被吞没了通过使用一个波的运动细胞。(D)一旦进入移动,该病毒的RNA裸,因素它劫持人类小细胞的蛋白质来创建更大的自我复制。(E)一旦新病毒颗粒聚集,他们通过手机膜和萌芽状态,此时他们可以污染新细胞(F)之旅。

传输

的人,接触液体可能另外由virus-sporting帧

•受感染的动物

•另一个男人或女人谁有疾病症状的或死于该病

被污染的物品,包括服装、床垫床单、门把手、针头和不同临床设备,或不同的人恢复后表面,病毒通常可以发现很多个月在某些体液,包括精液、乳汁和尿液。通过摧毁病毒进入人的毛孔和皮肤或粘膜,一起组织的眼睛,鼻子,喉咙或阴道。例如,您可能会被感染,以防你感动发炎帧液体之后,摸你的眼睛。从感染到迹象的到来的时间(孵化时间)一般是8到10天,但可以从21天不等。体液传播埃博拉病毒可能包括(图5)。

•血

•粪便

•呕吐

•尿

•精液

•唾液

•母乳

•阴道液体

•乳素液体

•眼泪

•汗

埃博拉病毒的症状

c编程语言的时间从感染埃博拉病毒的发病症状和体征two-21天,尽管eight-10天是最常见的。符号和符号组成

•热

•头痛

•关节和肌肉疼痛

•弱点

•腹泻

•呕吐

•腹部疼痛

•缺乏兴趣

材料和方法

维罗E6细胞和病毒,(猴肾)、293吨(人类胚胎肾)和U937人类单核细胞的细胞生长和维持在37°C在杜尔贝科的MEM (DMEM)或RPMI 1640 (Gibco)补充10%胎牛血清,2更易/ L谷酰胺,一百U /毫升青霉素和链霉素一百μg /毫升。主要人类巨噬细胞来源于健康的捐赠者的血液样本被远程的帮助下使用聚蔗糖梯度(Amersham)和孵化在37°C RPMI 1640补充人类AB型血清5 %。传染性的病毒滴度(focus-forming单位)通过计算各种感染细胞获得焦点,通过使用一个斜IFA使用兔多克隆anti-ZEBOV / VP40或小鼠单克隆anti-ZEBOV /糖蛋白(GP)抗体地板染色下面不透水条件和一只山羊anti-rabbit IgG-fluorescein异硫氰酸共轭或山羊anti-mouse IgG-Cy3共轭,别的地方定义(17、18)。所有绘画与传染性ZEBOV成为执行内部生物安全程度(声波测井)四个实验室在国家微生物实验室的公共卫生机构在温尼伯,加拿大马尼托巴(组织生活方式和老鼠实验),和美国陆军传染病医学研究所德特里克堡MD(非人灵长类动物)。

代的传染性cDNA ZEBOV包括eGFP基因的克隆。两传染性cDNA克隆ZEBOV特定eGFP记者从一个额外的蛋白质转录单位作为一个8基因是借助传统的分子克隆技术的使用。创建主eGFP-ZEBOV克隆,有针对性的“NP / 35-eGFP”eGFP开放分析体(ORF)变成工程侧翼ZEBOV NP转录起始和终止警报和成为NP之间插入和VP35基因通过使用新创建的restrict-enzyme网站在NP / VP35基因间的附近(IGR;辨别1 a)。2 d eGFP-ZEBOV克隆,通过插入不同的“VP30/24-eGFP,”变成eGFP的ORF VP30和VP24基因作为额外的转录单元组成的5′非编码(NCR)的地方。eGFP的表达盒VP30/24-eGFP拥有VP30副本/ VP24 IGR,模仿VP24基因转录机制1(察觉)。

现在氯喹不防范埃博拉病在EBOV-inflamed几内亚猪。十二豚鼠与EBOV挑战,6 h后的集合六一直服用33.75毫克公斤−1氯喹口服药。治疗坚持一天两次的时间表和生存chloroquine-treated动物变成了比6未经处理的控制。成为主要基于使用的剂量九十毫克公斤−1是被证明是有效的反对EBOV病在小鼠和使用一个转换元素为零。375年对豚鼠的统舱通过美国食品和药物管理局提供的基于帧面积(药物评价和研究中心,2005年)。一个广泛的贫困最终结果处理动物变成发现(P = 0.001, log-rank生存评价)(图6)。氯喹治疗也导致更快速损失框架重量比未经处理的管理动物(图6 b)。增加框架温度发生在相当程度上在每个chloroquine-handled和未经处理的动物今天5;但是,此后框架温度开始降低背部基线度在处理动物(图6 c)。临床症状和体征测量一天两次,一个数值价格被转化为有用的资源分配给每个签署和记录分析。氯喹导致严重疾病的快速发展把任务(5天之后图6 d)。

生存和临床症状和体征EBOV-challenged豚鼠处理口腔氯喹与未经处理的动物。(一)评价chloroquine-handled动物之间和未经处理的动物生存。(b)体重调整显示比例的区别。

在一个单独的考试,豚鼠将处理氯喹33.75毫克公斤−1通过静脉注射,鉴于口头管理变成了不再在豚鼠耐受良好,有一些动物重拾复合吞咽之前一次又一次。然而,获得的第一个动物静脉注射氯喹在30年代死于管理,所以看看变成中止。

氯喹治疗并不影响病毒血症在EBOV-infected几内亚pigsOn天8 submit-challenge,血液样本取自动物最终在看评估病毒血症。只有两个动物chloroquine-handled组织仍然活着,连同所有六个未经处理的动物。变成没有统计学上相当大的区别的病毒RNA chloroquine-dealt之间的范围和治疗组(P = 0。0668, Mann–Whitney statistical check), although the information indicated higher ranges of viral RNA within the chloroquine-dealt with the organization (图2一个)。血液成为另外取样验尸,而动物遇到临床放弃人文因素计划停止检查或被扑杀。病毒RNA度安乐死的时候不再被认为是异常的两个公司(P = 0.0656,曼-惠特尼统计测试)(图2 b)。

在体外病毒检测

磷酸氯喹(Selleckchem)变成用无菌水稀释至5毫米之前类似的稀释到所需的浓度与鹰的最小基本培养基(σ)。已经是最后的两倍稀释浓度考虑悬架交付相同数量的病毒。MRC-5细胞(从欧洲收集细胞培养,获得英国)被播种到96 -正确的板块。CL-four实验室中,媒介成为了从内部井96 -正确的盘子。结果,由于方面外井只剩下中交付。五个复制使用符合稀释(表2)。

表2。在不同的稀释影响磷酸氯喹。

第一在体外显示,EBOV悬挂(应变ME718最近更名为1976 / Yambuku-Ecran变成了大约500的意识TCID50据好一式三份井与氯喹稀释,剩下的两个井有媒介自己带到评估细胞毒性而EBOV的存在。基于后果的繁荣EBOV独特的移动痕迹,从MRC-5浮在表面的细胞已经在第三天把up-infection收获。一百年和40微从每个变成送到560公升μL AVL缓冲区(试剂盒)RNA提取和PCR检测。

验证的消遣氯喹对EBOV、筛选化验对结果反对EBOV重复使用MRC - 5细胞。然而,修改之前的方法组成的病毒剂被使用(约高10倍。5000年TCID50一致)和样品后2天。

统计分析

boom-kinetics实验中所有的病毒滴度和eGFP-fantastic细胞的百分比。平均SE P值暗示死亡时间在老鼠实验中已经计算通过使用学生的t检查(2-tailed分布和两个样品不平等的方差)。P !。05become taken into consideration to be statistically considerable.

在体外eGFP-ZEBOV的表征。我们首先检查eGFP的稳定转录单位的帮助下使每个eGFP-ZEBOV 10实例州立E6细胞。EGFP表达保持固体在所有段落,确认额外的转录单位的稳定在体外(记录不再如图所示)。eGFP-ZEBOV显示应用程序,我们检查细胞趋向性在体外使用1的两个重组病毒(NP / 35-eGFP)。维罗E6细胞和人类巨噬细胞,这可能是ZEBOV宽容污染,和293 t细胞,它可以为ZEBOV感染和非许可的作为消极管理,已感染NP / 35-eGFP莫伊的零。05年,eGFP-advantageous细胞已经被漂移血细胞计数量化在感染后的第四天。维罗E6和巨噬细胞培养证实感染eGFP表达程度的百分之九和13 %,分别指示异常层这些靶细胞的敏感性排序(图7 b和7 d)。相比之下,293 t细胞被证明对NP / 35-eGFP感染(图6 e和6 f)。此信息对应的趋向性wt-ZEBOV(数据不再显示)(图8)。

印第安纳州印第安纳vesiculovirus前身水泡性口炎病毒或水泡性口炎病毒(VSIV或VSV病毒,表明VSV综述)属于Rhabdoviridae圈亲戚,属vesiculovirus。VSV病毒是牲畜,即使人类致病性病毒感染是一个非凡的场合与流感样感染有关。VSV病毒可能在实验室BSL-2控制和处理,因此,它已被用来作为模型来看看许多元素的节段RNA病毒进入和复制。VSV会议发生在质膜,随后通过出芽病毒粒子用子弹形状与七十五nm一百八十海里的细胞表面。水疱性口炎病毒在萌芽中,获得一个信封包括脂质双分子层由质膜和峰值蛋白质组成的三聚VSV病毒糖蛋白G (VSV-G) (36)。水疱性口炎病毒的一个极好的住宅,其病毒粒子不是主要选择性与欣赏的那种膜蛋白可以被纳入病毒信封。这样的功能耦合的萌芽在糖蛋白G的缺席带来VSV-G-encoding基因的重组病毒的发展变成删除(rVSV-delta)和改变了基因编码一个无关的包膜蛋白(复制准备rVSV) (37)。一个明显的方法是基于更换VSV-G-encoding基因和报告基因,包括基因。

在体外细胞趋向性扎伊尔ebolavirus (ZEBOV)表达更可取的经验荧光蛋白(eGFP)。维罗E6细胞,主要人类巨噬细胞,和293 t细胞被感染了NP / 35-eGFP变异的莫伊0.05。污染后4天,各种各样的eGFP-fine细胞是通过浮子血细胞计数量化。每个小组中的水平线表示eGFP-nice门用于评价;没有。高于水平线eGFP-fine细胞的百分比。

我们后续的增长特征NP / 35-eGFP相比,VP30/24-eGFP, wt-ZEBOV州立E6和U937细胞。所有三种病毒的生长动力学州立E6细胞无法分辨(确定3),这是常规结果之前(4)说。在人类单核细胞的U937细胞,这可能能够诱导一个健壮的抗病毒状态,我们位于一个小统计大衰减与eGFP-expressing病毒,特别是NP / 35-eGFP (1-log不同污染后五天),而wt-ZEBOV(父母3 b)。因此,突然,eGFP-expression盒式ZEBOV基因组内的本地化做的现在没有显著影响病毒的复制在体外。

讨论

在这看看,我们生成2 eGFP-ZEBOV变化表达GFP从一个单独的转录单位附近的三个停止(NP和VP35之间)或5退出(VP30和VP24)的基因组(父1 a)。类似于不同非分段负链RNA病毒(NNS),在体外表征证实这两个eGFP-ZEBOV版本是固体和证实了平等在体外2细胞趋向性wtZEBOV(察觉)。这两种病毒只是被略减在体外但表现出更明显的衰减在活的有机体内,与wt-ZEBOV相比。NP / 35-eGFP,额外的转录单位接近3放弃的基因组,显示最致命的表型,这可以由改变6下游的转录病毒基因(VP35 VP40, GP、VP30 VP24,和L),而不是只有2基因的转录改变(VP24和L) VP30 / 24-eGFP。比较基因组function-dependent对基因转录的影响,从一个外源基因的出现,提出了不同NNS RNA病毒和稳定的想法转录梯度与单链NNS RNA基因组。eGFP-ZEBO相比略有衰减。

结论

这项研究提供了工程、救援和在体外和在活的有机体内两个eGFP-expressing-ZEBOV-based病毒的特征。我们应该表现出这些病毒的有效性在活的有机体内在小动物模型研究基于免疫缺陷STAT1 /老鼠,即使毒性强烈的衰减成为位于非人灵长类动物。计划包含病毒毒性eGFP-ZEBOVin大型动物的跟踪,包括恒河猴、和改善eGFP-ZEBOV使用免疫活性的小鼠和豚鼠,改编ZEBOV菌株的存在。病毒突变体表达报告基因的使用将大大促进未来的发病机理。

引用

1. 国家生物技术信息中心。PubChem CID的复合总结439212年,糖蛋白。2021年从检索https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/Glycoprotein。
2. 斯蒂芬斯B, et al。微生物通过污染物交换和对人类健康的影响。咕咕叫Pollut众议员2019;5:198 - 213。
3. 达也,et al . anti-phospholipid抗体的免疫学和代数余子式。第四。肿瘤成像。2004。
4. https://sitn.hms.harvard.edu/flash/2014/ebola-virus-how-it-infects-people-and-how-scientists-are-working-to-cure-it/
5. https://bestpractice.bmj.com/topics/en-us/1210/epidemiology
6. EbiharaIn H,等。在体外和在活的有机体内重组埃博拉病毒的特征表达增强绿色荧光蛋白。J感染说。2007;196:313 - 322。
7. Dowall SD, et al。氯喹抑制埃博拉病毒复制在体外但未能防止感染和疾病在活的有机体内豚鼠模型。J创微生物学报。2015;96:3484 - 3492。