红鼻花(L)的微繁殖。重要的药用植物。

摘要

采用叶片、节点和多模态外植体进行愈伤组织诱导、器官分化和植株硬化后存活的快速增殖方法。是一种重要的药用植物，具有抗肿瘤、抗糖尿病和保护肝脏的特性。结果表明，在三种外植体中，叶片部分对愈伤组织的形成反应良好。因此，利用叶片愈伤组织进行了进一步的器官发生和硬化研究。结果表明，在MS培养基中添加生长激素2,4- d和TDZ，分别为0.1mg/Land 0.5mg/L时，愈伤组织诱导效果最佳。将叶片愈伤组织传代到添加BAP、IAA和Kn (0.5mg/l)的MS培养基上，可快速增殖出芽(15.33个/根)。继代培养时，在含BAP和IAA (0.5mg/l)的MS培养基中生根数较高(12.66根/枝)。体外再生植株在园土、农家肥、沙土以2:1:1体积比配制的硬化培养基中驯化成功，成活率达90%。

关键字

Rhinocanthus nasuta,药用植物，微繁殖，

简介

Rhinacanthus nasutus(林)。Kurz。棘花科是一种灌木，广泛分布在印度、台湾、泰国、中国南部、锡兰和马达加斯加。在传统医学实践中，它被广泛用于治疗皮肤和肝脏疾病，也用于治疗溃疡。此外，据报道，它具有抗肿瘤，保肝和抗炎[1]。在土著医学体系中，根和叶r . nasutus用于治疗疱疹和其他病毒感染[2,3]。近几十年来，由于部落和传统治疗师对其药用用途的人为干扰，这个物种似乎很少出现在其栖息地，如Nilgiris低山上的丛林和落叶森林。因此，为了提高它的数量，现代的繁殖方法在体外利用叶片、节间和节间外植体进行了再生研究。

材料与方法

健康和未成熟的叶，节和节间节段Rhinacanthus nasutus取自温室条件下生长3个月的植株，作为外植体。在自来水下清洗这些片段，然后用表面活性剂处理，温度为20 (5% w/v) 5分钟。在双蒸馏水中反复清洗后，为消除真菌污染，外植体也用多菌灵(50% w/v)杀菌剂(10%)处理15分钟，并用双蒸馏水冲洗2或3次。为了消除细菌污染，外植体用5%的抗生素(氨苄西林和利福平)处理30分钟，然后用无菌双蒸馏水冲洗三次。此外，通过将外植体浸入0.1%的HgCl2中3分钟，然后在Laminor气流室中用消毒的双蒸馏水冲洗3-4次，进行表面灭菌。

将这些外植体分别接种在MS[4]培养基中，并加入BAP、NAA、2,4- d、Kn和TDZ等不同生长调节剂的不同组合和浓度的组培瓶中诱导愈伤组织。将培养基pH调至5.6 - 5.8，在121℃下高压灭菌20 min。在25+2℃恒温条件下培养，光周期14h(3000勒克斯)，黑暗8h。将原代培养的愈伤组织转移到含不同浓度BAP、NAA和IAA的MS培养基上进行诱导。多枝芽产生后，从培养基中切除长2 cm的长枝，转移到添加不同浓度IBA、IAA和NAA的MS培养基上生根。两周后，记录新梢成根率、每梢根数和根长。将生根芽彻底洗净，去除粘胶，装入装有不同硬化介质的塑料袋中，在温室中驯化。这些花盆每隔一天浇水，并提供½强度的MS盐，每周喷洒两次。移栽至塑料袋1个月后记录植株成活率。所有实验均保持3个重复。

结果与讨论

根据生长调节剂(即在MS培养基中添加2,4 - d、NAA和TDZ)的组合和浓度的不同，从黄竹叶片外植体诱导愈伤组织所需的天数从10天到30天不等(表1)．这可以解释为，除了其他因素外，适当浓度的特定生长激素对诱导愈伤组织起主要作用[5,6]，也报道了许多种金合欢的有效愈伤组织形成需要超过35天的较长时间，并指出培养环境、激素和非激素调节因子在决定适当的愈伤组织诱导中起协同作用。愈伤组织增殖与植株再生。叶片外植体对愈伤组织形成的反应量在20 ~ 96%之间(表1)．MS + 2,4 - d和TDZ(分别为0.1 mg/L和0.5mg/L)诱导96%的叶片外植体形成愈伤组织(Fig.1a其次为2,4 - d (0.1 mg/L)和TDZ (0.4 mg/L)， 85%的叶片外植体产生愈伤组织;2,4 - d (0.5 mg/L)和NAA (0.1 mg/L)， 65%的节级外植体产生愈伤组织。生长激素在培养基中的其他组合和浓度仅对外植体的愈伤组织形成有大约20 - 60%的诱导作用[7]，说明相同或不同外植体对愈伤组织形成的不同反应可能是由于组织性质、全能性程度以及培养基中微量营养素和激素的组成。此外，据解释，在愈伤组织形成方面，椎间盘反应的变化可能是由于许多其他研究观察到的内源性生长调节剂水平的分布变化[8,9]。值得注意的是，生长素2,4 - d与TDZ联合使用，在许多物种中通常具有从叶片外植体中高频引发愈伤组织(>50%)的效率[10,11,12,13,14]。Ganesan和Paulsamy报道，高浓度的2,4- d和TDZ等细胞分裂素诱导了更多的愈伤组织半边莲nicotianaefoliae．据报道，愈伤组织的潜能因物种而异，并且在同一物种的变种中往往不同[15,16,17,18]。Karappusamy和Pullaiah (2007)柴胡属distichophyllum[19]代表物种，藿香conyzoides也报道了在含有大量生长素NAA的培养基中，叶片外植体形成有效的愈伤组织。Mariani et al.，[20]报道了观赏植物有效愈伤组织形成需要细胞分裂素样化合物TDZ，Aglaonema sp．与其他两种外植体相比，叶片的愈伤组织数量较多。因此，仅尝试叶片愈伤组织进行了进一步的器官发生研究。

继代外植体叶片愈伤组织继代培养实验结果表明，细胞分裂素、BAP与生长素、IAA和Kinetin联合使用可使愈伤组织对芽形成的反应分别提高95%和83% (表2） (Fig.1b)．在MS培养基上分别添加0.1 mg/l BAP和0.5 mg/l IAA，可获得更多的15个芽/愈伤组织(表2） (Fig.1c)．而在IAA和Kn分别以1.0 mg/l和0.1 mg/l强化的MS培养基中，茎长可达10cm (表2)．所有这些事实都表明，细胞分裂素和生长素是研究物种有效射击最重要的生长调节剂，Rhinacanthus nasutus．细胞分裂素是许多植物芽形成的主要生长激素，这是一个共同的事实[21,22,23,24,25]。

的根属性的性能r . nasutus在添加细胞分裂素和生长素的MS培养基中，次生外植体的叶片愈伤组织衍生芽表现良好(表3)．0.1 mg/L的BAP和0.5mg/L的IBA诱导95%的根形成，0.1 mg/L的BAP和0.4mg/L的IBA诱导90%的根形成，0.1 mg/L的BAP和0.3mg/L的IBA诱导80%的根形成。在含IAA和BAP (0.5 mg/L)的MS培养基中，每梢生根数较高(12根/梢)r . nasutus。同样，在继代培养过程中，根长较大(7.6 cm)在体外根茎在MS + 0.5 mg/l IAA和BAP培养基上培养。这些结果表明，生长素IBA是该研究种抽穗性状最需要的生长调节剂。r . nasutus．它同意生长素是大多数植物品种中内源或外源诱导根形成的植物激素的概念。在许多植物物种中，不同类型的生长素影响有效根形成的类似发现已在其他地方报道过[27,28,29,30,31,32]。

硬化试验表明，在由园土、农家肥和沙土以2:1:1体积比组成的硬化培养基中，植株成活率达到90%，可达到较高的驯化程度。因此，在移栽前，可在规定的培养基中进行硬化处理，以提高植株的成活率。然而，移植后必须进行实地观察，以了解在开放环境条件下的存活率。

本文描述了一种通过叶盘大规模生产犀牛香优良植株的标准化方案，从而实现该物种的大规模生产。这将有助于增加人口，从而满足需求。

参考文献

1. warer PK, Nambiar VPK, Raman Kutty C.印度药用植物500种纲目。4.东方朗曼斯印度，1995年，第417页。
2. 陈建林，陈建林，陈建林，陈建林，等。两种新的抗流感病毒的木质素来自药用植物犀牛角。1997;60: 635 - 637。
3. 森迪A，陈建林，Jolad SD, Stoddart C, Roshan E, Kernan M.两个新的抗病毒活性的环醌类化合物。1996;59: 808 - 811。
4. Murashige T, Skoog。烟草组织培养快速生长和生物测定的修正培养基。植物科学，1962;15:473-497。
5. 杨晓明，王晓明，王晓明，等。植物离体繁殖研究进展。国际生物技术与分子生物学杂志，2011;2(3):51-55。
6. 朱芳华，王淑云，张圣。台湾合欢愈伤组织的离体再生研究。通过器官发生。植物生物化学生物技术。2009; 18(2): 1 - 5。
7. 王志刚，王志刚，王志刚，等。基质、碳源和生长调节剂在黄莲微繁中的作用。-一种珍贵的草药。科学通报，2005;5(2):469-482。
8. Fraternale D, Giamperi L, Ricci D, Rocchi MBL。柴胡的微繁:三acontanol的作用。植物细胞，组织和器官培养。2002;69:135-140。
9. 陈志伟，陈志伟。一种特有药用植物的保护。采用植物组织培养技术。应用与自然科学学报，2010;2(1):17-21。
10. Fletcher EKA, Amoako TNE, Twumasi P. 2,4- d、外植体类型和品种对加纳木薯胼胝体发生表达的影响。中国生物技术杂志，2011;10(46):9396-9401
11. MahmoodGhorbani-Marghashi, Mansour Gholami, ReazaMaadankan, Hassan Jamshidil。2,4- d和2,4,5- t对鹰嘴豆胚胎发生早期基因表达影响的研究非洲J生物技术，2012;11(12): 2889 - 2903。
12. 李斌A, King PJH, Ong KH, Chubo JK, Sipen P.沙捞越水稻(Oryza sativa L.)品种Biris愈伤组织诱导与植株再生。非洲农业资源2012;7(30): 4260-4265。
13. 金国栋，杨波峰，朴永国，刘俊杰。皂莓叶组织培养中体细胞胚胎发生的研究。植物生物技术。2012; 29日:311 - 314。
14. 组织培养在造林和荒地开发中的应用综述。植物生物学研究，2012;2(4):1-7。
15. 王志强，王志强，王志强，等。不同生长调节剂对黄花蒿间接器官发生的影响。中国生物医学工程学报，2010;
16. Ganesan, C.M.和Paulsmay, S. (2011a)。黄花蒿离体培养的标准化方案——一种生长在西高高山脉Nilgiris高海拔地区的药用植物。生物学报1(3):173-178。
17. Ganesan CM, Paulsamy, S.一种濒危药用植物nilagirica (c.b.c clarice) pampan的大规模繁殖居住在Nilgiris西部高山腰的高山上。印度基础与应用生命科学杂志，2011;1(3): 14-21。
18. 卡鲁普萨米，普莱亚，丁子松离体苗的增殖。印度南部的一种本地药用植物。植物组织培养生物技术。2007年,17(2):115 - 124。
19. 利用组织培养技术培育外来草药Ageratum conyzoides的标准化方案。生态毒理学与环境监测2010;20(4):393-400。
20. Mariani TS, Fitriani A, Teixeira da Silva JA, Wicaksono A, Chia TF。利用腋生芽外植体进行无骨藤的快速繁殖。应用软件学报，2011;11(1):46-53。
21. Vijaykumari P, Kavi Kishore PB和Bhallla JK。鸽豌豆(Cajanuscajan (L.))离体植株再生Millsp)通过器官发生。植物细胞生物技术，2001;2 49-56。
22. 杨晓明，王晓明，王晓明，王晓明。沙蒿大规模繁殖与挥发油分析。J BiosciBioeng。2008, 105(3): 176 - 183。
23. 王晓明，王晓明，王晓明，王晓明，等。不同植物激素对木果愈伤组织诱导的影响。(Asclepidaceae)。非洲生物技术，2008;7(13):2209-2211。
24. 利用组织培养技术培育外来草药Ageratum conyzoides的标准化方案。生态毒理学与环境监测，2010;20(4): 393 - 400。
25. 杨晓明，杨晓明，杨晓明。龙葵叶片和茎的离体植株再生研究。-一种重要的草药。中国植物科学，2011;24(1):1-3。
26. Van Eck JM, Kitto SL.从叶盘中再生薄荷和橙薄荷。植物细胞、组织和器官培养(1992);(1): 30 41-49。
27. 马兜铃离体高效繁殖的研究。生物植物，2006;: 272 - 274。
28. 杨晓东。药用植物Plumbagozeylanica Linn的微繁殖。植物细胞生物技术，2009;10(1&2):69-74。
29. 马志刚，李志刚，李志刚。瓜类植物茎尖外植体的高频再生。-一种重要的草药。中国生物技术杂志，2010;9(31):5037-5041。
30. Loc NH, Kiet HV。龙葵的快速繁殖。《生物研究年鉴》2011;2(2): 394 - 398。
31. 王志强，王志强，王志强，等。小酸浆木离体愈伤组织诱导及芽层再生的研究进展。中国生物医学工程学报，2011;
32. Rajput HJ, Jadhav SB, Katwate SM。生长调节剂对非洲菊叶片外植体愈伤组织形成和植株再生的影响。中国植物科学，2011;24(1):21-24。