甲醇胡椒提取物的促智抑菌活性

摘要

本研究旨在评价三叶胡椒甲醇的促智抑菌作用。以Wistar白化大鼠为实验动物，研究了胡椒提取物对革兰氏阳性菌和阴性菌的抑菌作用，并测定了提取物的促智活性。与阴性对照组相比，东莨菪碱组和胡椒提取物(200和400 mg/kg)组小鼠的转移潜伏期显著降低(P<0.05和P<0.01)。胡椒醇提物对大肠杆菌的抑菌效果较好，但对奇异变形杆菌无抑制作用。

关键字

抗菌活性，益智活性，胡椒，甲醇提取物。

简介

分布于南亚国家的胡椒(Piper trioicum Roxb, PT)是一种草本、灌木或攀缘植物，罕见乔木，通常芳香，属于胡椒科[1，2］．全株在民间医学中用于糖尿病、肌痛、头痛、牙痛及霍乱内药，同时具有润红、利尿、保肝的作用;而根则用作利尿剂[2］．Sathiskumar等人揭示PT提取物显示出生物碱、类固醇、类黄酮、酚类化合物、碳水化合物、单宁和糖苷的存在[3.］．其他报告表明，胡椒乙醇提取物富含生物活性植物化学物质，对淀粉酶和脂肪酶具有抑制活性，从而表明提取物可能有助于限制膳食脂肪、葡萄糖吸收和脂肪组织中脂肪的积累[4］．PT乙醇提取物具有强大的-葡萄糖苷酶抑制活性[5］．另一项研究报道了乙酸乙酯和甲醇提取物的抗氧化活性，这与各自提取物中的酚含量有关[6］．益智药是增强认知能力的药物，而“失忆症”是破坏学习和记忆过程的药物。学习和记忆可以被认为是一种心理过程，也是突触神经连通性的变化[7］．然而，目前尚未有关于PT的促智和抑菌性能的报道。本研究采用PT的甲醇提取物对其促智和抑菌能力进行了评价。

材料与方法

采集与鉴权

PT的植物材料采集自Andhra Pradesh的Talakona当地地区，并由Andhra Pradesh Tirupati s.v.大学植物学家Madhavachetty先生鉴定。收集到的材料在阴凉下干燥，用铣床研磨成均匀的粉末。

化学物质

甲醇购自SD精细化学品有限公司(印度)。金黄色葡萄球菌(ATCCBAA 1026)、枯草芽孢杆菌(ATCC 11774)、曼氏杆菌不动菌(ATCC 17978)、大肠杆菌(ATCC 10536)、奇异变形杆菌(ATCC14153)、伤寒沙门氏菌(ATCC13311)和铜绿假单胞菌(ATCC 10662)购自印度微生物专业实验室。参考标准氨苄西林采购自Pradeep Organics and chemicals Pvt. Ltd, Hyderabad。从Mahaveer Enterprises(印度)购买的Wistar白化大鼠被安置在不锈钢丝底笼子中，在温度和湿度控制的房间中进行12小时光照/12小时黑暗循环。他们可以随意获得食物和水。动物研究是按照机构动物伦理委员会批准的规程和政策进行的。用于制备培养基的化学品分别从SD精细化学品和Qualigens精细化学品中获得。

提取物的制备

将50 g遮阳干燥的全植物粉悬空，用10体积甲醇在室温下摇晃15小时提取。提取液用滤纸过滤，上清液池化。在相同的条件下重新提取残渣。用旋转蒸发器在50°C下浓缩池提取物(并去除甲醇)。报道了甲醇提取物的物理特性和收率。在分析之前，将所有溶剂的干燥提取物保存在干燥器中。

益智活动[8,9]

所有的动物被分成8组，分别放在不同的笼子里，每组6只。实验开始前，动物适应实验室环境一周。根据文献综述选择剂量为200mg/kg和400mg/kg的PT分别溶解于1% CMC溶液中，口服给药。阳性对照组和阴性对照组口服1% CMC，剂量为10mL/kg。标准组患者口服吡拉西坦200 mg/kg。阴性对照组给予东莨菪碱(0.4mg/kg)诱导遗忘。I组用1% CMC液(10 ml/kg)处理;ⅱ组用提取物200mg/kg处理;III组用提取物400 mg/kg处理;IV组给予吡拉西坦(200 mg/kg); Group V Amnesic Control (0.4mg/kg) groups received only vehicle against scopolamine-induced amnesia; Group VI methonlic extract (200mg/kg) treated rats against scopolamine induced amnesia; Group VII methonlic extract (400mg/kg) treated rats against scopolamineinduced amnesia; and Group VIII Standard drug Piracetam (200mg/kg)treated rats against Scopolamine-induced amnesia.

通过每天进行一次训练试验来训练动物的迷宫任务表现。它花了15天时间才完全训练好。在此期间他们没有服用任何药物。研究选择了经过完全训练的动物。这些动物每天服用一次相应的药物，为期十天，同时进行每日训练试验。I组取车15天。II、III、IV组分别给予提取物200mg/kg、提取物400mg/kg、吡拉西坦200mg/kg，疗程15 d。V组患者给予本品+东莨菪碱治疗15 d。VI、VII、VIII组分别给予提取物200mg/kg、提取物400mg/kg、吡拉西坦200mg/kg 10 d，同时给予东莨菪碱。1小时后，测试所有动物在莫里斯水迷宫任务中的表现。

莫里斯水迷宫由黑色不透明PVC或硬板制成，表面涂有玻璃纤维和树脂，然后表面涂成白色(直径1.8-2.0米，高0.4-0.6米)。池中充满水(20-220C)，深度为0.3-0.4m，并通过添加少量牛奶或无毒的白色而变得不透明。水池固定有灌水和排水设施，并安装在一个框架上，这样水就在腰部的高度。圆形水箱的底部被标记为四个相等的象限，任意设计北、南、东或西。逃生平台由有机玻璃制成，一个13厘米见方的平台连接到一个34厘米长的透明有机玻璃圆柱底座(3厘米直径)，安装在一个1平方米(5毫米厚)的有机玻璃底座上。平台的顶部覆盖着一层粗糙的材料，当老鼠爬上平台时，它可以很好地抓住。对于隐藏平台任务，将水加到圆形水箱中至平台顶部上方2cm的高度。水迷宫是一种多功能工具，可以测量许多不同的任务。最简单的性能度量是从水中逃到隐藏平台的延迟。下面描述了本研究中用于测试学习和记忆的程序和终点。 The animals for the experiments were preselected by conducting at least one daily training trail. At the beginning of trail animals are place in the Morris water maze and allowed to swim freely and to seat on hidden platform. The trial was considered to be successful when rat set on the hidden platform within three minutes. Time spent more than three minutes to find hidden platform recorded as error. On the initial day, 7th day and 15th day 60 minutes after the dose, transfer latency was determined for all groups. After 30 minutes each rats was subjects to Morris water maze task performance.

抗菌活性

用杯板法对PT的甲醇提取物进行抑菌活性筛选。并与标准(氨苄西林)和对照无菌水进行活性比较。研究中使用的各种生物是革兰氏菌(金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、曼氏不动杆菌)和革兰氏菌(大肠杆菌、奇异变形杆菌、伤寒沙门氏菌、铜绿假单胞菌)。用无菌水制备不同浓度的提取物，分别为100,200和400mcg/ml。配制浓度为10 McG /ml的氨苄青霉素作为标准品，并对其抑菌区进行测试。采用营养琼脂对提取物进行抑菌性研究[10，11］．杯子周围的抑菌区表明其抗菌活性。同时进行对照，以评价作为萃取载体的无菌水的活性。这项研究一式两份。测量并记录了抑制区直径。

统计分析

数据采用学生t检验进行静态分析，所有数值均以均数±标准差表示。数据还采用单因素方差分析和Dunnet t检验，p < 0.05为显著性。

结果

益智药活动

在获得试验第7、15天后，采用转移潜伏期(TL)法评估动物在行为范式中的记忆检索，了解提取物对长期记忆的影响。第0天的TL反映了动物的学习行为;第7天和第15天的TL反映了信息或记忆的保留。正常对照动物在这一行为范式中表现出不显著的记忆检索。在阳性对照组中，吡拉西坦组大鼠的TL显著(P<0.01)下降，PT(200和400 mg/kg)组大鼠的TL显著(P<0.05)下降。阴性对照组中，东莨菪碱组大鼠的行为模式记忆显著(P<0.01)丧失，导致第7和第15天TL较第1天增加。在治疗组中，暴露于东莨菪碱和吡拉西坦的大鼠在水莫里斯迷宫中执行任务的时间缩短，行为范式的记忆检索显著(P<0.01)。与阴性对照相比，东莨菪碱和PT(200和400 mg/kg)处理的大鼠TL显著降低(P<0.01)。接受不同剂量PT甲醇提取物的大鼠认知功能显著增强，而接受1% CMC钠(载体)的正常大鼠即使在15天后也未发现认知功能显著增强。200mg/kg和400mg/kg剂量大鼠的认知功能有显著改善。阳性对照大鼠接受400mg/kg提取物时，降低程度更大。表1而且图1用Morris水迷宫模型解释了三叶草甲醇提取物对东莨菪碱诱导遗忘转移潜伏期的影响。

抗菌活性

本文对氨苄西林和不同浓度的PT甲醇提取物的抑菌活性进行了比较。100、200和400mcg/ml不同浓度的甲醇提取物对革兰氏菌(金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、曼氏不动杆菌)和革兰氏菌(大肠杆菌、奇异变形杆菌、伤寒沙门氏菌、铜绿假单胞菌)的抑制带。该植物的甲醇提取物的抑菌潜力表2．结果表明，与作为对照的无菌水相比，甲醇提取物以剂量依赖的方式对所有测试生物都有显著的抑制作用。并与标准氨苄青霉素进行比较。PT醇提物对大肠杆菌的抑菌活性高于其他革兰氏阳性和革兰氏阴性菌，但对奇异变形杆菌无抑制作用。结果表明，该提取物对奇异变形杆菌无抑制作用。

讨论

以往的研究表明，酚类成分、黄酮类化合物和缩合单宁可能在PT提取物的抗氧化活性中起重要作用。通过本研究可知，该提取物的抑菌活性和益智活性也高于甲醇提取物。结果表明，PT植物通常被视为一次性副产品，具有促进人类和动物健康的开发潜力。

确认

我们感谢安得拉邦Aditya医药科学研究所的宝贵支持。

参考文献

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2. MadhavaChetty K, Sivaji K, Tulasi RK。吉图尔区开花植物，安得拉邦，印度，蒂鲁帕蒂:学生胶印机，第301页;2008.
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