收到日期:30/05/2015;接受日期:22/06/2015;发表日期:28/06/2015
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新、敏感、准确、廉价的动力学分光光度法测定的开发和验证地氯雷他定(DES)在纯形式和制剂。该方法是基于颜色的形成产品DES和钠1之间,2-naphthoquinone-4-sulphonate (nq)。DES的方法涉及到反应与硼砂的pH值9 nq形成有色产品与λmax 485海里。固定时间法(15分钟)是采用构建校准曲线。线性范围是2.50 - -37.50μg /毫升。检测极限是0.039μg /毫升。摩尔吸光系数的方法被发现0.59×104 L /摩尔厘米。DES的决心固定浓度和速率常数的方法是可行的校准方程获得,但固定的时间的方法被证明更适用。统计处理的实验结果表明,该方法是精密,准确。发达的方法被发现有选择性,准确和精确。该方法成功地应用常规质量控制分析DES的原材料和商业可用剂型。
地氯雷他定、动力学分光光度法、钠1,2-naphthoquinone 4-sulfonate (nq),制药剂型。
地氯雷他定是一个非镇静,表演抗组胺剂与选择性外围H1受体拮抗活性。(化学地氯雷他定是8-chloro-6 11-dihydro-11) - 4-piperdinylidene 5 h-benzocyclohepta [1, 2 b]吡啶。地氯雷他定是微溶于水,但溶于甲醇和丙二醇(1]。描述了几种方法的高效液相色谱定量测定的地氯雷他定在不同的制剂,要么独自一人(2- - - - - -6与其他活性成分[]或6,7]。效果(8,9)和毛细管电泳(10)方法已经发展为分析制剂的地氯雷他定。光谱光度测量的技术已被用于确定的地氯雷他定片包括紫外光谱光度测量的方法(11- - - - - -13),可见光谱光度测量的方法曙红(147),7日,8日8-tetracyanoquinodimethane (TCNQα-acceptor) [15,4-chloro-7-nitrobenzo-2-oxa-1 3-diazole (NBD-Cl)和2,4-dinitrofluorobenzene (DNFB) [16和萃取分光光度法17]。也spectrofluorimetric方法报道测定地氯雷他定(16,18]。
在药物分析动力学方法有一定的优势关于选择性和消除加性干扰,影响直接spectrophotometeric方法。文献仍然贫穷基于动力学的分析测定方法测定剂型的地氯雷他定。动力学方法具有一些特定的优势如下:简单和快速的方法因为一些实验步骤如过滤、提取、等避免吸光度测量之前,高选择性,因为它们涉及的测量吸光度反应时间的函数,而不是测量混凝土的吸光度值,其他活性化合物存在于商业剂型不得干预如果他们抵制化学反应条件建立了该动力学方法和颜色和/或浑浊的样本背景可能不干扰测定过程19,20.]。
1,钠2-naphthoquinone-4-sulphonate (nq)已经被用来作为显色许多制药的光度法测定胺试剂。这是个很受欢迎的光度试剂由于其高效的反应主要和次要的胺和高反应速率(21- - - - - -28]。nq被证明是一个有用的和敏感的分析derivatizing代理药品的光度分析轴承主要或次要氨基酸组,然而nq的使用地氯雷他定的光度测定尚未报道。因此,需要另一个动力学方法来估计散装地氯雷他定制药配方。本研究的目的是开发一个精确的、准确的和验证基于nq的反应动力学分光光度法测定氨基的地氯雷他定分子形成橙色的化合物。
从Jasco模型v - 530紫外可见分光光度计(日本)与1厘米石英电池使用在以下操作条件:扫描速度中等(400 nm /分钟),扫描范围400 - 700 nm和狭缝宽度2海里。光谱被Jasco系统软件自动获得。酸度计的配偶C830(比利时)配备玻璃pH电极和桑顿结合超声发生器(模型T-14)也被使用。
材料使用的所有化学分析试剂级。钠1,2-naphthoquinone-4-sulphonate (nq)从奥尔德里奇化工有限公司从BDH圣路易斯(美国),硼砂(英国)和甲醇从默克公司(德国)购买。双重蒸馏水是用于实验。地氯雷他定的工作参考标准(DES), C19H19ClN2= 310.82克/摩尔,是由CADILA医疗保健有限公司(印度)。它的纯度是99.74%。Claramix平板电脑(医生有限公司、叙利亚),Newloratadine (BPI、叙利亚)和Newlora (Shepha、叙利亚)在当地市场购买商业来源,标签包含5毫克每片地氯雷他定。
解决方案nq (0.2%, w / v):0.2%的水溶液w / v nq是由溶解nq适当重量的水。解决方案是刚做好的,受光照时使用。
缓冲溶液的pH值9.0:硼砂溶液(5×103米)是由溶解0.192 g硼砂100毫升水和调整pH值9.0。其他缓冲解决方案也准备按照文献方法(29日]。
DES股票的解决方案:DES的股票的解决方案是由甲醇中溶解的适当重量DES获得0.5毫克/毫升。这只股票的解决方案是进一步稀释用水来获取工作的解决方案的范围2.50 - -37.50μg /毫升。
示例解决方案:20片含DES的称重和细粉。准确称重部分粉相当于12.5毫克的DES是溶解在15毫升的甲醇和混合15分钟。然后解决方案是过滤,滤液稀释25毫升容量瓶中甲醇的体积达到浓度为0.5毫克/毫升,一般程序是随后浓度范围的方法。
手术方法:固定时间整除的2.50 - -37.50μg /毫升标准DES的解决方案(0.05 - -0.75毫升,0.5毫克/毫升)转换成一系列10毫升校准容量的玻璃瓶。然后1.25毫升的0.2% nq溶液和0.2毫升的硼砂溶液(pH值9.0)补充道。成交量由马克与水和吸光度测量在485 nm 15分钟后对试剂空白。校准曲线制备和用于计算的极限检测(LOD)和定量限度(定量限)。DES在平板电脑样品的浓度测定从校准曲线或从各自的回归方程。
化学计量比的过程:之间的反应化学计量学研究药物和nq spectrophotometrically取决于应用摩尔比和连续变异方法。在以前的方法,克分子数相等的DES和nq(1×10的解决方案4米)。添加了不同的整除nq固定整除的药物溶液总卷10毫升和485 nm的吸光度测定试剂空白同样对待。而在后者的方法,一系列DES-NQS解决方案保持在2.0毫升(0.4 0:2 0.2:1.8:1.6……2:0),CDES+ Cnq= 5×104m .试剂在不同的比例混合,然后稀释在10毫升校准瓶体积氯仿。最终解决方案的吸光度测量在485 nm试剂空白同样对待。
DES被发现与nq反应在碱性介质25°C生产桔子彩色产品吸收最大在485 nm,试剂空白(nq),在碱性介质中,几乎可以忽略不计的吸光度在485 nm和DES展览没有最大吸收峰在400 - 700海里(图1)。
图1:吸收光谱(a) DES的解决方案对甲醇(25μg /毫升),(b)试剂空白对水和(c) DES-NQS系统对试剂空白(cDES= 25μg /毫升+ 1.25毫升的0.2% nq + 0.2毫升的硼砂5×103米在10毫升决赛体积);反应时间:15分钟。
发现颜色的形成产品随着时间的增加,因此它被认为是有用的精心设计的基于活动的方法测定的吸光度DES。色原体保持稳定至少15个小时。这使得处理大批量的样品和他们的舒适与方便测量。这增加了便利的方法以及适用于大量样品。下面的段落描述的条件反应的DES nq完成必要的光度分析的需求。
反应变量的优化为了建立最佳实验条件,形成必要的快速和定量彩色产品最大的稳定性和灵敏度,各种参数的影响,如卷nq、添加碱性介质、反应时间和稳定的彩色产品在室温下进行了研究。
nq浓度的影响:nq浓度对反应的影响,研究了在室温(25±5°C)。DES的反应与nq依赖nq试剂的浓度。试剂的浓度在溶液中研究了不同nq体积的0.2% (w / v) nq、DES浓度保持恒定时25μg /毫升。这项研究表明,反应依赖于nq试剂。反应溶液的吸光度增加nq浓度增加,和最高的吸收强度达到当nq的体积是1.25毫升的0.2% (w / v) nq。增加的体积nq导致吸光度下降;这可能是由于高背景的吸光度试剂(图2)。
图2:nq 0.2%的体积效应的存在0.2毫升的硼砂5×103M和硼砂5×103米的1.25毫升nq 0.2%形成有色产品的DES(25μg /毫升)-NQS,温度:25±0.5°C;反应时间:15分钟。
缓冲效果:从DES和激活生成亲核试剂的亲核取代反应,碱性介质是必要的,因为结果显示,DES nq不反应酸性介质。不同的缓冲区进行测试:磷酸,布里顿,KCl-NaOH、硼酸、硼砂、碳酸氢钠、氢氧化钠溶液,所有准备水溶液的浓度范围3-40×103m .最好的结果在更高浓度的硼砂溶液5×103米(图2)。与其他基地,沉淀的白色胶体发生在与有机溶剂稀释反应方案,高空白读数,非可再生的结果,和/或弱敏感性观察。研究优化硼砂集中显示,硼砂的最佳体积是0.20毫升的5×103硼砂(图2)。在这个价值,DES的氨基促进亲核取代反应。硼砂在更高浓度,溶液的吸光度明显减少。这可能是由于氢氧根离子的数量的增加,抑制DES和nq之间的缩合反应
温度的影响:温度对反应的影响的DES nq在碱性介质研究了不同的值(20 - 75°C)连续监测的吸光度在485海里。发现nq没有受到增加的反应温度,反应在实验室环境温度(25±5°C)在15分钟去完成。结果显示,增加温度有负面影响反应的吸收值的解决方案。这可能是归因于DES-NQS导数的不稳定。在上述最佳条件下,增加吸光度值观察实验从一开始15分钟。这一次和60分钟后,吸光度略有增加,达到0.5%值高于15分钟后观察到的反应。针对这些结果,所有测量后进行了15分钟的混合试剂为了更快的方法
定量方法在上面描述的最佳条件下,absorbance-time曲线与nq DES的反应在碱性介质中生成(图3)。
图3:Absorbance-time曲线与nq DES的反应在碱性介质;CDES= 2.5 - -37.5μg /毫升。
这是作为一个有用的基础动力学方法测定DES,初始速率速率常数、变量时间(固定或固定浓度的吸光度)和固定的时间的方法30.,31日)测试,最合适的分析方法选择的适用性,敏感性,拦截和的值相关系数(r)。
初始速率法:初始反应速率会遵循一个伪速率常数和遵守以下速率方程:
ν=ΔA /Δt = k ' Cn
ν是反应速率,一个是吸光度,t是测量时间,k”是伪速率常数,C是药物的浓度mol / L, n是反应的顺序。由绘制校准曲线对数最初的反应速率(日志ν)与药物浓度的对数(日志C)显示一个线性关系的浓度范围15.0 - -37.5μg /毫升(图4)。
图4:校准块对数率对DES的摩尔浓度对数的反应初始速率的方法。
上面的方程是书面的对数形式如下:
日志ν=日志ΔA /Δt =对数k ' + n C
日志ν=日志ΔA /Δt日志C = 0.7124 + 1.0759DES(r = 0.8639)
因此,k = 5.16 1 / S,和反应是一阶(n = 1.0759)对DES的浓度。
速率常数的方法:图表的日志吸光度DES浓度与时间的范围30.0 - -37.5μg /毫升(9.65×105-12.06×105米),都似乎是直线。伪指令速率常数(k)对应于不同的DES浓度计算斜坡乘以-2.303和介绍(表1)和(图5)。回归C和k '给下列方程:k = 0.7551 C - 0.00024 (r = 0.9548)。
图5:校准的DES对速率常数的方法。
| CDES(M) | k ' (1 / S) | 1 /t(年代1) |
|---|---|---|
| 9.65×105 | -1.73×104 | 16×104 |
| 11.26×105 | -1.58×104 | 100×104 |
| 12.06×105 | -1.56×104 | 200×104 |
表1:速率常数k值和互惠时间以固定吸光度(0.60)为不同的变量DES的浓度。
变量时间(固定吸光度)方法:反应速率的数据记录不同的DES浓度范围30.0 - -37.5μg /毫升。秒以固定的时间测定的吸光度值0.60 (表1)。时间的倒数(1 / t)与DES的初始浓度绘制(图6)和下列方程校正图了:
图6:固定吸光度校准块DES方法
1 / t = 728.79 c - 0.06958 (r = 0.9436)
DES浓度的范围提供最令人满意的结果是有限的30.0 -37.5μg /毫升(9.65×105-12.06×105米)。
固定时间的方法:在预选的固定时间,橙色溶液的吸光度含有不同数量的DES测量25°C和485海里。校准图表是由策划初始浓度的吸光度对DES在固定时间0 30分钟。回归方程,相关系数和线性范围(表2)。
| 时间(分钟) | 校准方程 | 相关系数 |
|---|---|---|
| 0 | c = 0.0153 - 0.0141 | 0.9917 |
| 5 | c = 0.0194 - 0.0180 | 0.9964 |
| 10 | c = 0.0204 - 0.0185 | 0.9992 |
| 15 | c = 0.0210 - 0.0187 | 0.9996 |
| 20. | c = 0.0213 - 0.0203 | 0.9994 |
| 25 | c = 0.0215 - 0.0210 | 0.9992 |
| 30. | c = 0.0217 - 0.0231 | 0.9991 |
| 一、吸光度;C浓度 | ||
表2:校准方程在不同的固定的时间在2.50 - -37.50的范围μg /毫升(0.80×105-12.06×105DES M)。
相关系数,截距和斜率值校准数据计算使用最小二乘方法(32]。很明显,斜坡和拦截随时间增加。最可接受的值的相关系数和反应产物(更高的吸光度读数)获得一个固定的时间15分钟,这是,因此被选为最合适的时间间隔测量(表3)。优化反应条件后,固定的时间方法应用于测定DES在纯形式和制药配方的浓度范围2.50 - -37.50μg /毫升。的最低水平研究化合物可以可靠地检测(检测极限,LOD)和量化(限制的定量,定量限)是决定实验固定时间(15分钟)方法。LOD表示为药物的浓度,反应生成三倍的信号噪声比(S / N),定量限是信噪比的10倍。DES的LOD IUPAC达到所定义的(33),LOD(k = 3)= k×S一个b / b(校准曲线的斜率和S一个的标准偏差是拦截),被发现0.039μg /毫升。定量限也达到根据IUPAC定义,定量限(k = 10)= k×S一个/ b,被发现0.16μg毫升1。
| 参数 | DES |
|---|---|
| λ马克斯(nm) | 485年 |
| 比尔定律范围(µg /毫升) | 2.50 - -37.50 |
| Ringbom最佳浓度范围(µg /毫升) | 7.50 - -30.00 |
| LOD(µg /毫升) | 0.039 |
| 定量限(µg /毫升) | 0.16 |
| 摩尔吸光系数(L /摩尔厘米) | 0.59×104 |
| 稳定性(小时) | 15 |
| 对数形成常数 | 6.10 |
| Sandell的敏感度(µg /厘米2每0.001吸光度单位) | 0.10 |
| 回归方程一个 | 一个= 0.021C-0.0187 |
| 相关系数,r | 0.9996 |
一个= mC + b, C是吸光度和浓度在μg /毫升。
表3:分析特点的固定时间(15分钟)方法
Sandell指数代表了行列式的微克或毫微克每毫升溶液吸光度为0.002的细胞路径长度为1厘米,是一个合适的参数表达的敏感性和比较发达的分光光度法。更精确的分析,Ringbom最佳浓度范围计算(34]。(表3)显示了分析参数的确定使用该方法。
化学计量学的反应在最优条件下,反应的化学计量学在DES和nq被连续变异和摩尔比方法(调查35]。nq之间的化学计量比和DES被发现1:1 (图7)。
图7:(一)摩尔比DES-NQS复杂(C的方法DES= 1×104米)和(b) DES-NQS系统的连续变异方法,CDES+ Cnq= 5×104M。
基于观察的化学计量比的存在只有一个中心(h组)在DES分子可用取代反应,反应通路被假定进行所示(方案1)。
方案1:与nq DES的结构及其反应产物。
该方法的准确度和精密度进行了六个在五个不同的浓度决定。比例相对标准偏差(RSD %)精度和相对误差百分比(Er %)建议方法计算的准确性。标准偏差、相对标准偏差、标准误差和恢复应用中列出的固定时间法(表4)。这些结果的准确度和精密度表明,该方法具有良好的重复性和再现性。
| CDESμg /毫升 | |||||
|---|---|---|---|---|---|
| 采取 | 发现一个 | SD | Er (%) | 相对标准偏差(%) | 恢复(%) |
| 5.00 | 5.03 | 0.09 | 0.59 | 1.79 | 100.60 |
| 10.00 | 10.10 | 0.13 | 0.99 | 1.29 | 101.00 |
| 20.00 | 19.96 | 0.16 | -0.20 | 0.80 | 99.80 |
| 30.00 | 30.14 | 0.15 | 0.46 | 0.50 | 100.47 |
| 35.00 | 35.09 | 0.18 | 0.26 | 0.51 | 100.26 |
一个平均6个决定
表4:DES的准确度和精密度的测定方法。
应用于制药剂型应用该方法测定的DES制药配方。的结果分析商业剂型所示(表5)。
| %发现±SDa | ||
| 配方 | 该方法 | 官方的方法 |
| Claramixb(5毫克/片) | 100.30±0.66 | 100.20±0.96 |
| t= 0.95 | t= 1.90 | |
| F= 0.47 | ||
| Newloratadinec(5毫克/片) | 101.35±1.65 | 101.02±1.60 |
| t= 1.82 | t= 2.09 | |
| F= 1.06 | ||
| Newlorad(5毫克/片) | 100.30±1.25 | 100.08±0.74 |
| t= 0.56 | t= 2.16 | |
| F= 2.85 |
一个五个独立的分析。理论t值和F值五自由度和95%置信上限t = 2.776和F = 6.26。b医生提供的有限公司c由BPI和d由Shepha,叙利亚。
表5:DES在平板电脑市场的决心和官方提出的方法。
获得的平均百分比复苏,表示好方法的准确性。的结果的分析,研究药物在药物制剂工作相比,那些获得官方的方法(表5)[29日]。95%置信水平的学生学习任务和野生值五自由度(32)不超过理论值指示的准确性和精度之间没有显著差异的两个方法。该方法的优点是不受干扰的辅料如葡萄糖、乳糖、淀粉或常见的降解产物。
发达动力学分光光度法测定DES的敏感、准确和精确,因此可用于常规分析DES散装和制药配方的检测极限0.039μg /毫升。该方法是基于与nq DES的耦合反应。固定时间方法提出了动力学分光光度法可以很容易地应用于DES的纯形式的确定和平板电脑。与之前报道的方法相比该方法的准确度和精密度。该方法选择性和较高的灵敏度比复杂的光谱光度测量的技术,类似的报道方法和更广泛的线性。样本的复苏从所有配方是在良好的协议与各自的标签要求,建议不干涉的配方辅料的估计。因此,该方法可以进一步申请常规质量控制实验室,作为替代现有的方法。
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