新型紫外光谱法测定膳食补充剂中去甲双氢愈创木酸。

摘要

一种简单、快速、准确、精确的光谱光度测量的建立了去甲二氢愈创木酸的测定方法。该方法在不同溶剂中不同波长的吸光度最大，因此测定了吸光度，并采用相同波长对不同溶剂中的吸光度进行了测定。北二氢愈创木酸符合啤酒兰伯特定律。根据ICH指南对方法进行了验证，并用于去甲双氢愈创木酸的分析。

关键字

北二氢愈创木酸，紫外测定，方法验证。

介绍

北二氢愈创木酸(NDGA)是一种酚类化合物抗氧化剂在常绿沙漠灌木的叶子和树枝中发现，Larrea tridentata木馏油科木馏油科。美洲原住民和墨西哥人将其作为传统医药有着悠久的历史。木馏油灌木在美国西南部和墨西哥北部的沙漠地区以及阿根廷的一些地区占主导地位。它在美国也被称为chaparral和greasewood，在墨西哥被称为gobernadora(女教师)和hediondilla(小臭鬼)。1-8］．

Larrea tridentata已被作为膳食补充剂引入，主要是由于其抗氧化活性。北二氢愈创木酸(NDGA)具有抗氧化和抑制活性炎症介质。此外，NDGA还被用作脂肪和黄油的抗氧化食品防腐剂。NDGA是一种公认的脂氧合酶(LOX)，并具有抗氧化剂和自由基清除属性(9-12］．

材料与方法

采用双光束紫外分光光度计(ELICO SL 210)，配一对1cm宽的石英池测量吸光度。用Elder数字天平称重，用超声仪对药物和样品溶液进行超声检测。NDGA购自班加罗尔Sigma Aldrich公司，用于分析。所有用于方法开发的其他化学品都是分析级的。

NDGA的TLC分析

取20mg药物溶于10ml甲醇，制得NDGA标准溶液。以甲醇与乙酸乙酯(7:3)的混合物为流动相。10×15cm预涂硅胶TLC板作为固定相。1μl of standard solution was applied along a line 1.5 cm above the bottom edge .The solvent was allowed to run a distance of 12 cm in 30 mins and aqueous 5% silver nitrate solution was used as visualizing agent. As above by using methonolic Chaparral tablets was also analysed [13-14］．

[λmax]的测定

分析波长的选择[15-17］

NDGA溶解在不同的溶剂中，扫描吸收最大值，观察到的波长用于分析。甲醇在283.6 nm处吸收乙腈在282纳米处。

标准原液的制备

大约10毫克。取适量北二氢愈创木酸纯药，准确称量后移入10ml的容量瓶中。体积调至10ml。用甲醇得到浓度为1000μg/ml的溶液。取该原液，稀释至10ml，浓度为100μg/ml。

分析浓度范围的选择

从上述原液中取10 ml，用紫外-可见分光光度计在200 ~ 400 nm范围内扫描，以相应溶剂为空白，得到最大吸光度(λmax)对应的波长。

LH (2 -10 μg/ml)校准曲线

将等分0.5-2.5 ml的原液转移到一系列10 ml的容量瓶中，随后用相应的溶剂调节体积至10 ml。溶液在紫外-可见分光光度计中扫描。分析了样品在各自λmax处的吸光度校准曲线绘制并显示在图2、图3。确定了回归方程和相关系数表1。

紫外光谱法的验证

确认是一个建立文件证据的过程，它提供了一个高度的保证，即特定的活动将持续产生期望的结果，或者产品符合其预定的规格和质量特征。对方法的线性度、准确度、精密度、特异性、稳健性、耐用性、检出限和定量限等参数进行了验证。

线性

每种溶剂在5 ~ 25 μg/ml的原液中配制不同的等比，用紫外-可见分光光度计对样品进行分析，各溶剂为空白。上述样品的线性可以在表1号。

精度

通过制备浓度为80%、100%和120%的溶液，其中药量恒定(5 μg)，纯药量变化(10 μg、15 μg、20 μg，分别为80%、100%和120%)来测定方法的准确性。溶液一式三份，准确度以回收率%表示。精度研究所得数据见表4。

精度

通过日间和日间变化研究证明了方法的准确性，连续3天制备相同浓度的溶液，分析3次，并记录吸光度。在日间变化研究中，制备了9种相同浓度的不同溶液，每天分析3次，即上午、下午和晚上，结果用% RSD表示。所获得的数据载于表3。

检测极限

检测限是通过对已知分析物浓度的样品进行分析，并通过建立可可靠检测分析物的最低水平来确定的。

负载= 3.3 (sd / s)

在那里,

SD =响应的标准差
S =校准曲线的斜率

定量极限

定量限度通常是通过对已知分析物浓度的样品进行分析来确定的，并通过建立分析物可以以可接受的准确度和精确度进行定量的最低水平来确定。

Loq = 10 (sd / s)

其中，SD =响应的标准差
S =校准曲线的斜率

刺槐片中NDGA的测定

称量2 ~ 5片，计算平均重量。从这1g粉末中称重到100ml的量瓶中，用相应的溶剂配制成相应的体积。然后超声处理15分钟，过滤萃取物。分别以282nm(乙腈)和283.6nm(甲醇)的吸光度为空白，计算提取液的浓度。提取液中存在的药物量可以通过测定来确定。所得结果见表5号。

鲁棒性研究

通过使用两种不同的分析设备进行分析，确定了该方法的稳健性，并记录了各自的吸光度。通过使用不同设备与同一分析人员进行分析，评估了方法的稳健性。所得数据见表7号。

结果与讨论

建立了从剂型中测定NDGA的紫外分光光度法。第一种方法是基于标定曲线法。在所提出的校准曲线方法中，在溶剂乙腈中测量282nm，在溶剂甲醇中测量283.6nm。通过标定曲线得到各药物的浓度。

结论

对于常规分析目的，总是需要建立能够在短时间内分析大量样品并具有适当准确性和精密度的方法。目前尚无测定NDGA的分析方法膳食补充剂(Chparral平板电脑)。针对上述情况，规划了一些简便、灵敏、准确、精密度和经济的分析方法。本研究建立了紫外分光光度法定量测定原料药和膳食补充剂(ChaparralTM)中去甲双氢愈创木酸的方法。该方法简便易行，不使用污染试剂，所需仪器相对便宜。通过满足所有验证标准，验证了紫外法的可靠性。

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