土壤pH值的优化生产淀粉酶的霉菌的贾巴尔普尔地区的植物

文摘

淀粉酶有潜在的应用在食品发酵、纺织、造纸和制药行业。有几个过程在医学和临床领域涉及淀粉酶的应用。所需的营养和文化条件最优增长和生产淀粉酶的霉菌的菌群。酶是非常敏感的酸度和发展的最优控制策略有助于获得更高的蛋白质的生产力。目前的工作处理的研究pH值对真菌淀粉酶的影响生产。这包括淀粉酶产生菌的分离和表征不同土壤来源。这些真菌隔离使用扩散板技术。鉴定真菌分离株的形态和生化试验的基础上完成的。可能属确认曲霉菌属,根霉物种和物种镰刀菌素,酶活性的隔离观察pH值6.5,5和9推断,选择最佳pH值为最大酶生产至关重要。观察到黄曲霉,黑曲霉和根霉物种是最好的淀粉酶生产商在不同pH值范围内。

关键字

优化、淀粉酶、霉菌的植物,pH值

介绍

全球需求的小说淀粉酶一天天增加,这些酶的应用光谱在各种工业领域蔓延。的经典方法是隔离微生物物种,产生新的酶从异国情调的环境和现有产品将提供一个竞争优势。随后描述这些微生物在发酵条件下优化酶生产属性在评估经济意义中扮演着至关重要的作用。淀粉降解淀粉分解的酶生物技术的应用程序中是很重要的,从食品、发酵、纺织造纸行业等淀粉酶广泛分布,研究最多的一个酶[1]。阿尔法是宽敞的代谢的关键酶的多样性生物利用淀粉为碳和能源。它能水解淀粉、糖原和相关多糖通过随机裂开内部alpha - 4糖苷联系产生不同大小的低聚糖。淀粉酶是一种非常重要的酶,在生物、临床、生化和工业的重要性[2]。它可以获得不同类型的细菌和真菌。从土壤分离淀粉分解的生物,尤其是真菌,非常简单,产生精确的结果[3]。

模具能够生产大量的淀粉酶;黑曲霉是α-amylase用于商业生产。研究真菌淀粉酶特别是在发展中国家主要集中在黑曲霉,可能是因为他们的无处不在的这些生物的性质和non-fastidious营养需求[4]。有可能争取的使用淀粉酶在极端条件下的pH值和温度使用thermo-acidophilic和碱性淀粉酶。以来最有效的制备一些应用程序包含其他酶,特别是淀粉转葡糖苷酶和水下方法给出一个窄谱额外的酶和值得隔离合适菌株黑曲霉的高效机制[5]。生产α淀粉酶通过模具大大受到文化和营养需求。

固态发酵酶的生产潜力巨大。它可以在这些过程的特殊利益原油发酵产品可以直接使用酶源[6]。

在物理参数中,生长介质的pH值由诱导形态变化中扮演一个重要的角色在微生物和酶分泌。有机体的pH值变化期间观察到的增长也影响产品稳定的介质。在真菌的过程中,一些媒体组成的缓冲能力有时不需要pH值控制[7]。

pH值也作为酶合成的起始和结束的有价值的指标。据报道,米曲霉积累α淀粉酶在菌丝生长在磷酸硫酸或缺乏媒体和被释放时,菌丝在碱性介质(3 8)所取代。

材料和方法

真菌隔离的隔离

贾巴尔普尔地区收集土壤样本。样品被收集在一个无菌容器和实验室作进一步处理。这土壤样本连续稀释10⁶稀释的连续稀释法和媒体传播在马铃薯葡萄糖琼脂板含有抗生素氯霉素避免细菌污染。

对淀粉分解的真菌的分离鉴定

4 - 5天之后,佩特里板块被观察到的各种真菌的生长。这些真菌被识别的基础形态(微观和宏观)特点和淀粉水解试验。所有的盘子都观察到宏观的真菌字符颜色,菌丝和质地。真菌观察显微镜下的乳酚棉蓝染色法。

所有的真菌菌落进行淀粉酶生产淀粉水解试验。执行的测试是检查机体利用淀粉的能力产生淀粉酶。

研究分离株的生长参数

真菌分离株的生长参数显示最大水解进行了研究的增长动力学[9]。真菌分离株的生长曲线进行了研究,以了解关于增长的阶段。PDB媒体接种环的真菌分离株(显示最大水解)和孵化28°C。隔离被跟踪了7天的生长通过阅读对空白的600海里。后,曲线绘制天X轴和OD at600nm之间。

保护文化

真菌分离株被保存在淀粉琼脂偏低温保鲜膜覆盖用于未来的研究。

淀粉酶的发酵生产

剂制备

10毫升无菌蒸馏水被正式列入偏含有真菌孢子,然后刮放松孢子。标准的培养液(10毫升)转移到一个瓶含有生长介质。

深层发酵

深层发酵在锥形烧瓶进行以100毫升的淀粉酶生产中,包含KH₂阿宝₄(1.4 g L¹),NH₄没有₃(10 g L¹0.5)、氯化钾(gl¹),MgSO₄.7H₂O (0.1 g L¹),FeSO₄.7H₂O (0.01 g L¹),可溶性淀粉(20 g L¹6.5),pH值调整。

瓶热压处理过的,在室温和冷却剂(筛选期间显示最大水解)孕育了72小时。在28ºC±2ºC瓶在150 rpm。

提取粗酶

粗酶提取发酵媒体通过添加三羟甲基氨基甲烷缓冲液pH值6.5,搅拌1小时的瓶瓶在180 rpm,混合物是通过纱布过滤离心机在8000 rpm在4°C 5分钟。上层清液收集,作为粗酶。

蛋白质估计

原油酶蛋白的浓度(从瓶中提取)是由洛瑞的蛋白质的方法估计酶与洛瑞的试剂和反应获得的吸光度与一个标准的图形绘制反应标准蛋白质与已知浓度与洛瑞的试剂[11]。然后图表绘制标准蛋白质浓度在X轴和吸光度之间在Y轴650海里。

在粗酶酶试验

0.5毫升的粗酶提取物被带进一个试管,0.5毫升的1%可溶性淀粉是补充道。试管当时在100ºC水浴孵化为空白,15分钟0.5毫升的酶提取(已经煮15分钟,以灭活酶)被添加到淀粉溶液和试剂一样对待实验管。反应停止通过添加1毫升的DNS试剂。试管是煮15分钟,并立即冷却。10毫升蒸馏水添加和颜色强度在540 nm决定公布的麦芽糖.Amount决心通过比较测试酶540海里的吸光度读数与标准曲线绘制反应已知的麦芽糖浓度从0.05到0.5毫克/毫升(10、12、13)。

文化修正最优生产胞外淀粉酶在不同pH值

研究的目的包括pH值优化生产额外的细胞α淀粉酶从不同的真菌隔离。本研究不同pH值的影响最大淀粉酶生产调查,从微生物培养条件影响酶的生产。

酶活性在不同pH值

研究了酶活性研究pH值对胞外淀粉酶的影响生产。为此,生长介质的pH值调整到6.5,在灭菌前5和9。

结果

工作的主要对象是专注于研究pH值对淀粉酶的影响生产和隔离淀粉酶产生菌的土壤,其特征和原油酶试验。在目前的研究发现土壤港口人口占主导地位的淀粉分解的真菌。曲霉菌属,根霉物种和物种镰刀菌素是最常见的和丰富的淀粉分解的土壤中霉菌的菌群。这一发现与研究报道一致[14]。因此,土壤是一个存储库的淀粉酶生产商。淀粉酶的不同分离株在不同pH值最佳,最佳温度和其他物理化学性质取决于物种起源。酶是非常敏感的pH值和pH值的选择是非常重要的对淀粉酶的生产。一个酸碱监管体系和培养将起到至关重要的作用也会影响真菌形态。

隔离的真菌溶胶化

一些真菌物种从土壤中分离样本。这些都是确定的基础上菌落形态。真菌分离株的土样被确认的基础上形态(微观和宏观)特征。这些隔离的帮助下确定了www.docterfungus.com。

可能真菌分离株土壤样本中黄曲霉,黑曲霉、镰刀菌素物种和根霉的物种。除了这些隔离不明物种,Absidia物种,主产腐霉属物种和Curvularia lunata也报道样本。

淀粉酶的研究生产

真菌进行了分离的主要筛选淀粉酶生产淀粉水解试验。四个真菌隔离例如黄曲霉,黑曲霉、镰刀菌素物种和根霉物种被发现给积极的结果。在这些真菌隔离、黄曲霉、黑曲霉和根霉物种能够产生过度的淀粉酶。虽然淀粉酶产生的数量是不同的。但身份不明的物种被发现少淀粉酶生产国。这些真菌分离物被用于粗酶使用发酵方法生产。

隔离生长动力学的研究

研究的增长参数给出了适当的固定相,这样可以提供在发酵过程的合适环境。真菌分离株生长在28ºC温度和pH值6.5。增长动力学数据的分离进行了研究,观察到固定相之间达到4到5。

酶测定

观察变量的酶活性的酶淀粉分解的土壤霉菌病的植物。不同的土样真菌分离株显示不同的酶活性在不同pH值条件。淀粉酶生产的隔离观察的pH值(5,6.5 & 9)。

淀粉分解的活动在pH值6.5中,酸碱5和9各种真菌隔离从表中可以看到。从这个数据推断,黄曲霉,黑曲霉和根霉物种是最好的淀粉酶生产商。

结论

酶是非常敏感的酸度和发展的最优控制策略有助于获得更高的蛋白质的生产力。酶活性被隔离观察和推断,选择最佳pH值的最大酶生产至关重要。可以使用这些隔离进一步研究其他文化的影响参数,如温度、底物浓度、氮源、碳源、表面活性剂等最大的淀粉酶生产发酵肉汤。可以使用粗酶提取物进一步纯化后对不同的工业应用。

也基于诱变菌株酶生产改进方法可以应用。应用DNA重组技术可以揭示重要真菌酶的分子基础的生产信息。

引用

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