+ 44 74807256891在营养和实验室调查慢性退化性疾病,在神经学和医学研究生课程,里约热内卢州联邦大学,UNIRIO,巴西
2LAMCEF / UFPI,生物科学和生物技术UFPI-CMRV,大脑映射和感觉运动集成- IPUB / UFRJ,巴西
收到的日期:02/05/2017;接受日期:14/06/2017;发布日期:26/06/2017
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这个研究是为了确定:氧化应激和可能的肾损伤中有严重高血压和糖尿病的老鼠。24、20周的年龄,在基线十天,在四个组,每组六个动物:细分SHRSP, SHRSPDb, WKY WKYDb。收缩压是体积描记法测量的。血糖Accu -检查glucometer(罗氏)、血尿素氮、血清肌酐和24小时尿白蛋白后常规实验室方法。高效液相色谱法测定血同型半胱氨酸。数据统计分析,方差分析,P < 0.05被认为是显著的。之后,老鼠在深度昏迷被牺牲和肾脏移除histophatological分析。那些高血压大鼠血尿素氮水平的最高水平:提出SHRSP (40±3 mg / dl)和SHRSPDb (57±5 mg / dl)与WKY (17±2 mg / dl)和WKYDb (22±3.5 mg / dl)。在相同的方式,在高血压大鼠血清肌酐水平显著增加:SHRSP (1.20±0.02 mg / dl) SHRSP (1.27±0.04 mg / dl)与WKY (0.53±0.02 mg / dl)和WKYDb (0.49±0.01 mg / dl)。24小时尿白蛋白也显著增加SHRSP应变:SHRSP(128±1.2毫克/ 24小时)和SHRSPDb(125±0.6毫克/ 24 h)与WKY(15±0.02毫克/ 24 h)和WKYDb(14.8±0.01毫克/ 24小时),血同型半胱氨酸水平显著增加SHRSP应变:SHRSP(6.51±0.40μmol / l)和SHRSPDb(7.32±0.61μmol / l)比那些血压正常的人:WKY(3.80±0.39μmol / l)和WKYDb(5.20±0.21μmol / l)。 The histophatological assay confirmed a significant association between hypertension and renal damage, since the number of hyalinized glomeruli and vessel were higher in those hypertensive rats. However, the presence of an increased blood homocysteine levels in both strains suggests that an oxidative stress was common feature to the hypertension and diabetes.
高血压、糖尿病、氧化应激、血液
高血压是出现在超过80%的慢性患者肾脏疾病和导致肾脏疾病的进展向晚期肾脏疾病(ESDR)以及心血管疾病和中风(1]。有一个特殊的肾脏和动脉之间的关系血压力虽然肾功能不全引起动脉血压的增加和这加速肾脏功能的丧失2]。事实上,高血压和肾损伤的存在的发展在面前变得更糟糖尿病。事实上,先进的糖化终端产品在糖尿病可能负责神经损伤(3]。这些疾病的共存显然参与了发病率和死亡率。
因此,目前的研究主要目标识别,而肾功能损害在自发性高血压病患者鼠(SHRSP),一个已知的研究严重高血压和中风动物模型,并探讨可能的常见机制参与高血压和糖尿病的发病机制。
动物和组
后两周的适应期,24成年人(20周年龄)雄性老鼠被分成四个组,每个地区有6个动物:组I -自发性高血压病患者鼠(SHRSP),第二组——SRHSP Diabetes-induced (SHRSPDb),第三组- Wistar-Kyoto血压正常的大鼠(WKY)和组IV - Wistar-Kyoto血压正常的Diabetes-induced (WKYDb)。代谢的笼子里的动物是维持bioterium控制温度(21±2°C),湿度(60±10%),和12黑暗/光周期(人工照明,7。m-7点),空气疲惫周期(15分钟/小时)接收水和颗粒食品(Nuvilab、Nuvital、巴西)随意。所有程序依法进行了实验动物保健原则(NIH出版85 - 23,1996年修订),并经伦理委员会批准用于动物(CEUA)里约热内卢联邦大学的N 2016.2°。
糖尿病模型
链脲霉素诱导的糖尿病(s - 0130σ,圣路易斯,密苏里州),溶解在柠檬酸缓冲0.1米,pH值4.4,单剂量的40毫克/公斤的体重,腹腔内。动物的血糖测定空腹使用glucosimeter Accu-Check优势(罗氏)STZ后72小时,一周一次。糖尿病模型被认为是完成当老鼠达到最低300 mg / dl的血糖水平,这发生在STZ后28天。
收缩压
的收缩压验证了早上,每周两次,使用的非侵入性方法tail-cuff体积描记法在有意识的老鼠(Panlab Letica勒5100年)。
生化试验
所有组提交给采血为了确定:血尿素氮(BUN)和血清肌酸酐和24尿量来确定尿白蛋白,使用常规的实验室方法。高效液相色谱法测定血同型半胱氨酸。
组织病理学分析
在实验期间,所有组的大鼠引起的深度昏迷管理巴比妥酸盐(硫喷妥钠)在剂量腹腔内60毫克/公斤体重。肾脏被删除并保存在甲醛溶液10%,此后切片显微分析的准备,携带削减5μm厚,呱RM 2025切片机(徕卡、胡桃胡同、德国)。沾染了hematoxylin-eosin标本。的形态学分析使用一个可见光显微镜(蔡司Axioplan、蔡司、德国)10 x, x 40 x, 60。的透明样变化肾小球血管横截面样本中观察50字段每张幻灯片高倍镜/ 400 x。
统计分析
平均值±标准误差,给出的数据和应用方差分析测试的比较四组。P < 0.05被认为是具有统计学意义。
收缩压证实了较高水平的决心在SHRSP应变作为225年平均值±2.5毫米汞柱和140±3.7毫米汞柱的WKY压力。有显著增加面包和血清肌酐水平SHRSP老鼠,两次与WKY大鼠中找到(图1和图2)。
图1:数据代表意味着±SE的血尿素氮水平从六个动物每组。P < 0.05被认为是显著的SHRSP和WKY大鼠之间SHRSPDb和WKYDb老鼠之间。
图2:数据代表意味着±SE的每组六个动物血清肌酐水平。P < 0.05被认为是显著的SHRSP和WKY大鼠之间SHRSPDb和WKYDb老鼠之间。
在相同的方式,尿白蛋白明显升高在SHRSP应变相比,血压正常的Wistar-Kyoto老鼠(图3)。
图3:数据代表意味着±SE的尿白蛋白水平从六个动物每组。P < 0.05被认为是显著的SHRSP和WKY大鼠之间SHRSPDb和WKYDb老鼠之间。
也有显著增加的血液同型半胱氨酸水平SHRSP老鼠在那些更强调糖尿病SHRSP老鼠。在相同的方式,一个血同型半胱氨酸水平升高的被发现在那些WKYDb老鼠(图4)。
图4:数据代表意味着±SE的每组六个动物的血液同型半胱氨酸水平。被认为是意义P < 0.05
对于肾脏histophatological化验,有透明样变化的明显降低肾小球和肾血管的血压正常的压力相比,高血压组独立于糖尿病(图5和6)。
图5:数据代表意味着±SE的变透明肾小球六个动物每组。P < 0.05被认为是显著的,它被发现之间SHRSP和WKY以及SHRSPDb之间和WKYDb老鼠。
图6:变透明的数据代表的意思是±SE肾血管的六个动物每组。P < 0.05的显著性水平是发现SHRSP SHRSPDb之间和WKY大鼠与WKYDb老鼠。
虽然小说生物标志物在实际运用中,血清肌酐肾小球滤过率的指标仍然最常用的生物标志物的肾功能,尽管其已知的限制。这里,一起包测量,histophatological发现,可以证实的肾损伤后果严重的高血压。
半胱氨酸也观察到在所有高血压大鼠与先前的研究从我们这是一个协议组,展示了高水平的同型半胱氨酸和其他氧化应激的标记,如SHRSP老鼠的丙二醛(4]。
虽然糖尿病大鼠血压正常的人提供了一个比控制老鼠血液同型半胱氨酸水平,增加肾脏损伤,没有观察到在那些血压正常的糖尿病大鼠相比,高血压的。
另一方面,在时间面前实验这种差异可能更明显。根据香港JH等人一个持久和慢性高血糖,可能消耗的活动促进自由基的生成和抗氧化防御系统更加明显器官损伤可以观察到(5]。
肾组织病理学显示样品的一个重要组织损伤的老鼠SHRSP包括糖尿病。事实上,系膜细胞增殖肾小球硬化高血压已经证明在不同的实验模型(6]。此外,半胱氨酸诱发DNA甲基化,导致肾脏的异常代谢和损伤glomerulo组织(7]。
总之,这项研究证实了SHRSP老鼠模型研究的重要性的:严重的高血压和肾损伤,除了这些特性与神经障碍。同时,血液同型半胱氨酸,一个重要的生化标记氧化应激是两个密切相关高血压和糖尿病在目前的研究中,提出一个独特的病理生理机制。
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