Pallidifloside D从菝葜锐利地增强小鼠高尿酸血中别嘌呤醇的影响

文摘

Pallidifloside D,从总皂苷糖苷组成皂苷菝葜锐利,已经被证明是有效的hyperuricemic控制。别嘌呤醇是一种常用的药物来治疗高尿酸血及其并发症。在这项研究中,我们评估Pallidifloside D是否能提高别嘌呤醇的影响通过降低血清尿酸水平hyperuricemic oxonate钾引起的小鼠模型。单独使用别嘌呤醇相比,我们发现别嘌呤醇的组合和Pallidifloside D显著降低血清尿酸水平和增加了尿尿酸水平(P < 0.05),导致规范化血清和尿液中尿酸浓度。数据在血清、尿肌酐和包支持这些观察。我们的研究结果表明协同别嘌呤醇的影响结合Pallidifloside D与抑制血清和肝脏黄嘌呤氧化酶(XOD),肾mURAT1的下调和mGLUT9 mOAT1的老年病。我们的数据可能有潜在价值在临床实践中治疗痛风和其他hyperuricemic条件。

关键字

Pallidifloside D、别嘌呤醇、菝葜锐利,高尿酸血,痛风,URAT1, GLUT9, OAT1 XOD

介绍

高尿酸血,代谢性疾病,特点是血液中尿酸水平高,沉淀尿酸盐晶体在肾脏和关节。痛风、高尿酸血是一个众所周知的危险因素高血压和糖尿病(1]。

它已经证明了under-excretion的尿酸盐会导致高尿酸血1,2]。如果肾脏尿酸盐转运蛋白,如尿酸盐转运体1 (URAT1),葡萄糖转运体9 (GLUT9)和有机阴离子转运蛋白1 (OAT1)失效的情况下,他们可以影响尿酸盐的排泄,导致高尿酸血(2- - - - - -5]。这些蛋白质转运蛋白因此治疗高尿酸血构成基本目标。别嘌呤醇是一个常用的代理治疗高尿酸血及其并发症,如慢性痛风(6]然而,别嘌呤醇据报道引起不良反应,包括超敏反应(7,8]。最严重的副作用是一种超敏反应综合征,其特征是发热、皮疹、嗜酸性粒细胞、肝炎、肾功能恶化[9- - - - - -11]。

别嘌呤醇是一个黄嘌呤氧化酶(XOD)抑制剂,防止尿酸的形成,降低血清尿酸的水平减少嘌呤合成(9]。小心别嘌呤醇剂量在病人治疗至关重要,与药物不良事件都归因于剂量升级(12- - - - - -14]。因此,临床上需要结合一种化合物与别嘌呤醇治疗,加强别嘌呤醇的影响并减少所需的高剂量的药物更好的治疗安全(6,15]。

一些天然产物有效hyperuricemic控制和痛风治疗(16- - - - - -18]。菝葜锐利地直流,属于家庭中菝葜属百合科,是一种植物广泛生长在中国的南部和中部地区。根和根状茎的s锐利地用于中药(TCM)或者中国民间药物,“Niu-Wei-Cai”,治疗痛风的症状和hyperuricemia-related条件,包括炎症和一些恶性肿瘤(19,20.]。这草是一种可以食用的植物在中国的一些地区,表明其安全性(21]。我们以前报道,Pallidifloside D,皂苷糖苷(图1)从菝葜锐利的总皂苷成分,有效hyperuricemic控制(22]。

在目前的研究中,我们调查了Pallidifloside D能否加强别嘌呤醇对血清尿酸水平的影响hyperuricemic oxonate钾引起的小鼠模型。我们想知道是否结合Pallidifloside D与别嘌呤醇会增加药物的促进尿酸排泄的活动。我们比较这两个组件单独和联合治疗尿酸排泄和hyperuricemia-induced肾脏功能障碍。我们的研究结果表明,协同效应与鼠标的下调肾URAT1 GLUT9, OAT1的老年病,XOD抑制。我们的数据表明,使用Pallidifloside D提高别嘌呤醇促进尿酸排泄的活动在患有高尿酸血有临床价值及其并发症。

材料和方法

试剂和药品

所有的化学试剂均为分析纯。石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇是购自天津恒星化学试剂公司(天津、中国)。黄嘌呤和XOD从西格玛化学品购买(圣路易斯,密苏里州,美国)。别嘌呤醇、钾oxonate从议员生物医学购买中国(上海,中国)。化验用品XOD、UA、Cr和包子Boaosheng获得生物技术(中国北京)。

制备Pallidifloside D

隔离的方法复合Pallidifloside D从菝葜锐利地根据前面的研究我们只要稍作修改报告22]。短暂、干根和根状茎的s .锐利粉EtOH地面并提取90%。EtOH提取90%悬浮在水和石油醚提取,氯仿层与BuOH分别。BuOH层集中在减少压力下给布朗提取。BuOH分数是通过D101大孔隙树脂(0.25 - -0.84毫米)和筛选了先后EtOH 30%, 50% EtOH EtOH EtOH 70%和90%,分别和美国的总皂甙锐利地从70% EtOH获得分数。然后总皂苷分数经过交联葡聚糖LH-20列与甲醇,甲醇的筛选了一部分是CHCl通过硅胶柱层析法₃/甲醇/小时₂O(10:1:0.5-5:1:0.5)溶剂系统。最后,分数由CHCl筛选了₃/甲醇/小时₂O(9:1:0.5)受到semi-preparative高效液相色谱(10 - 100毫米)负担pallidifloside d .高效液相色谱法显示,这种化合物的纯度是98.5%。

制备高尿酸血小鼠模型和实验协议

雄性昆明小鼠(20±2.0 g),每组8,从中国获得BK实验动物中心(中国,北京)。我们进行我们的实验符合法规和指南的实验动物,和动物实验伦理委员会批准的协议是天津医科大学。水合氯醛麻醉用于所有手术减少动物的痛苦到最低限度。

小鼠高尿酸血被oxonate钾诱导,a尿酸酶抑制剂(23,24]。诱导高尿酸血,每只动物腹腔内注射250毫克/公斤oxonate钾溶解在0.9%氯化钠溶液连续7天每天一次。老鼠别嘌呤醇pallidifloside D剂量测定基于转换从人类临床实践和我们的初步研究25,26]。测试代理(别嘌呤醇pallidifloside D),单独或组合,分散在0.3%羧甲基纤维素钠(CMC)钠水溶液,并口头管理每天一次从第一天到第七天;正常的控制老鼠溶剂处理车辆。经过7天的治疗,食物从笼子中删除前12 h老鼠牺牲。没有不良事件观察实验动物在7天观察期。

血液一直凝结在25°C和1 h在3000转离心10分钟收集血清。血清和尿液在测试之前保持在-20°C (27]。尿酸(UA)水平,肌酐(Cr)、血尿素氮(BUN),和黄嘌呤氧化酶(XOD)活动在肝脏和肾脏的比色法测定使用商业套装(北京Aoboseng生物工程研究所,中国),根据制造商的指示。

的索引部分的排泄尿酸盐(FEUA)是由以下公式(28]:

此外,肾脏的皮质是快速、准确地分离一个ice-plate并将其保持在-80°C的蛋白质分析小鼠肾URAT1 GLUT9 OAT1。

免疫印迹分析鼠标URAT1 GLUT9和OAT1肾脏组织

一个增强小鼠肾皮质小肠膜泡被用来分析mURAT1 mGLUT9, mOAT1 mNa⁺- k⁺atp酶(29日,30.]。的免疫印迹使用anti-URAT1化验(1:200)mGLUT9 (1:200) mOAT1(1:200)以及mGAPDH(1:400)抗体(美国圣克鲁斯生物技术、达拉斯、TX)。分子分析软件(Bio-Rad实验室、大力神、钙、美国)是用于检测目标蛋白的组成、基于标准化的内容/标准化mNa的印迹⁺- k⁺腺苷三磷酸酶或mGAPDH。

统计分析

数据被当作平均值±标准错误(S.E.)。单向方差分析(方差分析)应用于估计显著性水平。P < 0.05的值被认为是具有统计学意义。垫棱镜统计分析系统(图4,图垫软件,和圣地亚哥,CA,美国)是用于本研究的数据分析。

结果

别嘌呤醇的影响,pallidifloside D及其组合对血清尿酸和尿尿酸

所示图2腹腔内钾oxonate管理后,7天,模型组有更高水平的血清尿酸(S_UA)与正常对照组(P < 0.01),表明hyperuricemic鼠标模型有效地建立。与模型组相比,S_UA水平与5毫克/公斤别嘌呤醇治疗后显著降低(P < 0.05;图2一个)。同时,尿液中尿酸水平(U_UA)显著增加,表明肾尿酸排泄增加(P < 0.05;图2 b)。图2 a和2 b还表明,5毫克/公斤pallidifloside D触发意义重大anti-hyperuricemic活动,尽管低于别嘌呤醇。有趣的是,当别嘌呤醇(5毫克/公斤)和pallidifloside D(5毫克/公斤)给出了实验动物一起,S_UA水平显著降低,U_UA水平显著增加比模型组(P < 0.01)。pallidifloside D政府与别嘌呤醇显著增强的影响别嘌呤醇SUA和U_UA(别嘌呤醇的影响相比P < 0.05)。联合治疗的影响几乎规范化SUA和U_UA对照组中观察到的水平。

别嘌呤醇的影响,pallidifloside D和血清肌酐和尿肌酐的组合

所示图3我们评估血清肌酐的水平(S_Cr)和尿肌酐(U_Cr)在我们的实验动物,因为有密切相关性痛风患者的肌酐和尿酸合成(31日- - - - - -33]。正如预期的那样,明显高于模型组_Cr水平比对照组(P < 0.01)。别嘌呤醇单独和pallidifloside D +别嘌呤醇后,S_Cr水平显著降低(P < 0.05和P < 0.01)。Pallidifloside D本身并没有影响_Cr或者你_Cr,但结合别嘌呤醇有显著影响(P < 0.01;图3 a和b)。

别嘌呤醇的影响,在面包和FEUA pallidifloside D及其组合

所示图4一,模型组显著高于包水平较对照组水平(P < 0.01),表明减少尿素清除率和肾脏功能障碍(31日]。与别嘌呤醇治疗后单独或别嘌呤醇结合pallidifloside D,包子水平显著降低(P < 0.05和P < 0.01)。因此,所示图4 b,数据部分排泄尿酸盐(FEUA)支持包的变化水平不同的治疗(图4 b)。

别嘌呤醇的影响,pallidifloside D XOD活动及其组合

别嘌呤醇,XOD抑制剂,用于治疗hyperuricemic和痛风的症状。所示图5一个,别嘌呤醇显著影响血清XOD hyperuricemic小鼠(P < 0.01)。别嘌呤醇结合pallidifloside D显著抑制血清XOD水平,甚至水平低于对照组(P < 0.01;图5一个)。我们观察到类似的协同作用的别嘌呤醇结合pallidifloside D肝XOD水平(P < 0.01);pallidifloside D仅仅只有一个小影响血清和肝XOD级别(图5一个和图5 b)。这些数据表明,增强pallidifloside D对别嘌呤醇的影响都与XOD活性的变化。

别嘌呤醇的影响,pallidifloside D及其结合蛋白表达的小鼠肾URAT1 GLUT9 OAT1

别嘌呤醇的影响,pallidifloside D, mURAT1肾脏蛋白质含量的组合,mGLUT9和mOAT1 hyperuricemic老鼠中演示了图6。肾含量严重超标mURAT1 mGLUT9和抑郁水平的mOAT1观察hyperuricemic动物(P < 0.01),对照组(而不是动物图6 - 6 c)。别嘌呤醇显著抑制肾mURAT1 mGLUT9和的表达上调肾mOAT1的表达(P < 0.01, P < 0.01, P < 0.05,分别;图6 a-6c与模型组相比。此外,pallidifloside D进一步加强观察到的变化仅与别嘌呤醇相比,尤其是在mOAT1 (P < 0.01)。

讨论

别嘌呤醇是一种常用的药物治疗痛风患者和其他hyperuricemic条件。在病人别嘌呤醇,与毒品有关的不良反应通常是报道,包括严重和致命的生活事件,如别嘌呤醇超敏反应综合征(29日]。更严重的是,别嘌呤醇可能导致毒性的发作表皮坏死松解症史蒂文斯—约翰逊综合征,这两者都是危及生命的皮肤条件(10]。药物,可以使用其它化合物或天然产品提高别嘌呤醇治疗效果的同时减少药物剂量。因此,可以随后减少别嘌呤醇的剂量相关的不良事件。美国锐利地一直作为一个组件在中药治疗痛风和其他hyperuricemic症状几百年来(19,20.]。作为一种可以食用的植物21]美国锐利地将安全用于人类,即使在高剂量。我们之前报道,Pallidifloside D,皂苷糖苷成分总皂甙的菝葜锐利,在hyperuricemic有效控制(22]。

在这项研究中,我们评估是否pallidifloside D s锐利地将增强的影响别嘌呤醇对血清尿酸水平使用hyperuricemic小鼠模型。一个钾oxonate-induced高尿酸血是一个建立动物模型。我们的数据表明,别嘌呤醇可以显著增强的影响与pallidifloside D .别嘌呤醇的组合和合并施打后pallidifloside D尿尿酸水平明显增加,伴随着显著降低血清尿酸水平。

血清肌酐水平的增加和包子信号肾脏功能障碍,导致肾脏功能受损(31日,33,34]。别嘌呤醇的组合和pallidifloside D降低血清肌酐水平相比,当别嘌呤醇单独管理水平。此外,该指数的分级的尿酸盐排泄(FEUA)支持这种协同效应。

探索行动的潜在机制,我们评估了化合物对XOD活性的影响。别嘌呤醇和pallidifloside D组合降低血清XOD水平达到甚至低于对照组。因此,联合治疗也引起类似肝XOD活性的变化,表明导致观察到的变化与联合治疗效果。

鼠标的水平URAT1, GLUT9 OAT1蛋白质与肾尿酸排泄(2- - - - - -5]。我们的免疫印迹数据显示,别嘌呤醇显著抑制肾mURAT1的表达和mGLUT9而调控肾mOAT1 hyperuricemic老鼠的表达,与模型组相比。联合政府的两种化合物抑制和上调表达的实验动物相关的蛋白质,提供增强的机理信息的别嘌呤醇pallidifloside D。

作为可食植物,美国锐利地有良好的安全记录。合理的考虑,从美国锐利地复合,pallidifloside D结合别嘌呤醇降低临床所需的高剂量的别嘌呤醇。结果,一般剂量相关的副作用报道别嘌呤醇可能会减弱。

结论

我们调查了可能的协同效应pallidifloside D和别嘌呤醇在降低血清尿酸水平hyperuricemic小鼠模型。与单独pallidifloside D或别嘌呤醇相比,两个组件的组合管理拥有更好的促进尿酸排泄的活动。观察到的结果与XOD抑制、下调的肾mURAT1 GLUT9, OAT1的老年病。我们的数据可能有潜在价值在临床实践中治疗痛风和其他hyperuricemic条件。

确认

工作的部分支持由唐基金会、中国国家自然科学基金(81202895),并从人事部博士后项目基金会中国(2013 530882)和人事部博士后特别程序基础的中国(2014号t70223)。

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