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国际创新研究期刊》的研究在科学、工程和技术

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植物化学的筛查和体外抗菌、抗氧化和抗癌活性Amphiroa Fragilissima jv Lamoroux (Linneaus)

Shyamala Viswanathan1,Ebciba。C2,Santhiya。R2Thangaraju Nallamuthu3
  1. 研究学者、高级研究中心植物学、马德拉斯大学校园圭因迪,钦奈,印度
  2. P G学生,先进的研究中心在植物学、马德拉斯大学圭因迪校园,钦奈,印度
  3. 高级研究中心的助理教授,植物学、马德拉斯大学圭因迪校园,钦奈,印度
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文摘

海洋天然产品吸引了世界各地的生物学家和化学家的注意了过去五年。活性代谢物,也被称为生物化合物,由几个种类的海洋宏微,有抗菌、antialgal, antimacro污染和抗真菌特性,有效地预防癌症,和许多其他疾病可能有其他用途,如在治疗。常见的主要成分蛋白质、碳水化合物、类固醇、苷可以提取使用极性溶剂如甲醇、乙酸乙酯和正己烷在植物化学的过程中。这些结果与最近报道定性植物化学的测试用于检测生物碱的存在,丹宁酸、皂甙、黄酮类化合物,从海藻苷和酚类。测试的三种溶剂,甲醇是决心是最好的溶剂隔离的抗菌化合物海藻其次是乙酸乙酯和正己烷进行测试。在海洋藻类提取测试,一些似乎是具体的活动对几个测试细菌。这一点可能是重要的特定抗生素的发展,和进一步的工作是要确定化合物导致活动,评估特定的抗菌活性对病原菌尤其是导致人类疾病。

关键字
Amphiroa fragilissima,甲醇提取物乙酸乙酯提取物、氯仿提取物、人类致病性细菌和MTT试验

介绍
藻类是地球上随处可见:在海洋、河流和湖泊、土壤和墙上,在动物和植物(如symbionts-partners一起合作);事实上到处都有一盏灯进行光合作用。海藻是海洋植物,分为三个类别,按照它们的颜色,如红色(4500种),绿色(900种)和布朗(1000种)。这些生物体构成共25 - 30000种,形式的多样性和大小,可以从单细胞微生物存在(微藻)多细胞的大小(宏观藻类)。
海藻是一种具有生物活性的化合物,因为他们能够产生大量的次生代谢产物具有广泛的生物活性。海藻生长的环境是严酷的,因为它们暴露在光和氧气浓度高的组合。这些因素会导致自由基的形成和其他强氧化剂但海藻在代谢很少受到任何严重的光能损失。这一事实意味着海藻细胞有保护机制和化合物(Matasukawa et al ., 1997)。世界的全球海藻总产量2004年> 1500万吨,近15 - 20%是由印度洋地区(粮农组织,2006年)。广泛的海洋微藻筛选导致超过15的隔离和化学测定,000种化合物,包括脂肪酸、甾醇类、酚类化合物、萜烯、酶、多糖、生物碱和黄酮类化合物。最近的报道显示,海洋藻类具有丰富的抗氧化化合物来源与潜在的自由基清除活性。
活性氧(ROS)如羟基、过氧化物和过氧化氢自由基形成于人类细胞内源性因素和导致广泛的氧化损伤从而导致年龄相关的退行性条件,其中包括癌症、心血管疾病、artherosclerosis,高血压,缺血/ re-perfusion,糖尿病,hyperoxaluria,神经退行性疾病如阿尔茨海默氏症和帕金森氏症和老龄化(Borek Cerutti 1985年,1993年,Hercberg et al ., 1998年和2009年哈利维尔)。
酚类化合物可以作为抗氧化剂通过螯合金属离子,防止激进的内生系统形成和提高抗氧化。“酚类化合物”一词描述了几百个分子食用植物中发现具有结构benzenic环取代,至少,一个羟基(Manach et al ., 2004)。抗菌近年有所增加,为了减少使用合成形式如叔丁基羟基茴香醚(BHA)和丁羟甲苯(二叔丁基对甲酚)。从植物源天然抗氧化剂与自由基反应迅速和延缓或减轻氧化程度的恶化(Akoh和最小,1997)。此外,抗氧化剂从自然资源还可以增加食品的货架寿命。因此,食用抗氧化剂和/或添加抗氧化食品材料可以保护身体以及食物对这些事件(趋势et al ., 2008)。单宁被定义为天然植物多酚类化合物和陆地和海洋植物中普遍存在(1989年海斯蓝,沃特曼和摩尔,1994)。黄酮类化合物,酚类化合物是已知最大的集团包含广泛的化学和生物活性,包括抗氧化和自由基清除属性(Kahkonen et al ., 1999)。
癌症是世界上对人类健康最严重的威胁和化疗仍然是标准的治疗方法。大多数抗癌药物目前用于化疗对正常细胞,导致细胞毒性免疫毒性不仅影响肿瘤的发展,但也加剧病人的恢复。发现和鉴定新的抗肿瘤药物副作用较低的免疫系统已经成为一个重要的目标在许多免疫药理学的研究(徐et al ., 2009)。更多的注意力都集中在天然化合物在植物和微生物。关于植物和其他天然化合物的副作用越少,科学家们感兴趣的研究寻找新的药物。

材料和方法
海藻的集合
Amphiroa fragilissima(林奈)J.V. Lamouroux(1816)收集从Kilakarai海岸Rameswaram, Tamilnadu 11月11日,2012年。与海水彻底清洗后,人工分拣完成删除附生植物,是详尽冲第一,然后用蒸馏水。海藻是shade-dried和地面细粉。
提取海藻
20克的干海带粉材料分别提取100毫升氯仿,乙酸乙酯和甲醇为3天。然后整个提取被倾析并使用Whatmann第一滤纸过滤。这个过程重复三次为每个溶剂。得到的滤液集中在真空旋转蒸发器在40ºC获得原油提取。提取随后冷冻乾,用于进一步的研究。
定性的植物化学成分分析
不同的定性化学测试进行建立的提取物的化学成分。
抗菌试验
中使用
营养琼脂培养基和液体培养基用于海藻提取物的抗菌活性的筛选。
剂的制备
股票文化是维持在4ºC的倾斜的斜坡上营养琼脂培养基。活跃的文化为实验准备将铂环量的细胞从股票文化转移到试管的穆勒辛顿汤(MHB)孵化24小时不搅动37ºc . 5毫升MHB 0.2毫升的文化是接种和孵化直到达到标准的浊度等于0.5 Mc Farland解决方案在600 nm相当于106 - 108 CFU /毫升。
测试生物
收集测试生物体的医学微生物学,马德拉斯大学Taramani校园,钦奈113年- 600年,印度泰米尔纳德邦,。两个革兰氏阳性:即,金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌,三个革兰氏阴性:即,大肠杆菌、绿脓杆菌和克雷伯氏菌肺炎被用于本研究。
琼脂扩散法
海藻提取物的抗菌活性a fragilissima获得与氯仿、乙酸乙酯和甲醇进行评估通过琼脂扩散法(蒂娜和Thoppil, 2000)。孵化了24小时的菌株细菌用于试验。无菌棉拭子浸入细菌悬液,然后均匀地夹杂在整个无菌穆勒辛顿琼脂板表面获得均匀剂。井打在使用无菌播种板钻(7毫米),和盘子被允许干5分钟。溶剂萃取的正己烷、乙酸乙酯和甲醇提取物(100年75μLμL和150μL)被分发到每个使用无菌的微量吸液管。二甲亚砜(DMSO)被用作负控制和链霉素(10μL)作为积极的控制。一夜之间,盘子被孵化的细菌在37°C。抗菌活性是由测量直径的抑制区(mm)。
估计总酚含量(Taga et al ., 1984)。
总酚浓度测量使用Folin-Ciocalteau方法(Taga et al ., 1984)。在这个过程中,100μl整除的股票样本(1000μg /毫升的水提取物浓度)和2.0毫升的2% Na2CO3和允许在室温下2分钟。50%的100μl Folin-Ciocalteau酚试剂是补充道。孵化后30分钟在室温下在黑暗里,使用分光光度计吸光度是阅读720海里(1201年弥尔顿罗伊液体)。总酚含量的样本表示为毫克每克没食子酸当量(GAE毫克/克)。抗坏血酸作为一个积极的控制。
估计总单宁含量(Julkunen-Titto 1985)
总缩合单宁含量测定的方法Julkunen-Titto (1985)。简单地说,一个50μl整除的每个提取混合1.5毫升的4%香草醛(用甲醇),然后750μl集中添加盐酸。解决办法大力动摇了,站在室温20分钟的黑暗。吸光度与空白读在500海里。(+)儿茶素被用来准备儿茶素的标准曲线和结果表示为毫克当量(CE) / g提取。
估计总类黄酮含量(Zhishen et al ., 1999)。
总类黄酮含量测定的方法Zhishen et al ., (1999)。简单地说,一个250μl整除每个提取的混合1.25毫升的双重蒸馏(dd)水和75μl 5% NaNO2解决方案。6分钟后,150μl 10%三氯化铝。水解决方案是补充道。5分钟后,0.5毫升的1 M氢氧化钠溶液添加然后总量与dd 2.5毫升水。全面解决方案的混合后,对空白吸光度决心在510海里。槲皮素是用来准备槲皮素标准曲线和结果表达为毫克当量(QE) / g提取。
评价体外抗氧化试验
DPPH自由基清除实验
2-picryl-hydrazyl (DPPH)方法后在香港et al ., 2008。0.1毫米DPPH的甲醇溶液制备和1毫升的这个解决方案添加到3毫升的海藻提取物在不同浓度(50,75年,100年,150年和200年μg /毫升)。10分钟后,吸光度测量在517海里。清除活动百分比值计算如下:
%的清除= ((Ao-A1) / Ao) x 100
Ao吸光度控制和A1是吸光度样品浊度的因素。
估计的还原能力
提取物的还原能力取决于以下方法山口et al ., 1998。0.75毫升的提取在不同浓度(50,75年,100年,150年和200年μg /毫升)和0.75毫升磷酸盐缓冲剂(pH值6.6)和0.75毫升的1%铁氰化钾补充道。混合是在50°C的环境中20分钟。0.75毫升的10%三氯乙酸是添加到混合物和离心10分钟。3000克1.5毫升的上层清液混合1.5毫升蒸馏水和0.1毫升的0.1%氯化铁。吸光度是读10分钟后在700 nm的孵化。
过氧化氢清除试验
自由基清除活性的提取物是由过氧化氢测定Gulcin et al ., 2004。过氧化氢(10毫米)的解决方案是在磷酸缓冲盐(0.1米,pH值7.4)。1毫升的提取(75,100,150和200年μg /毫升))是快速2毫升的过氧化氢溶液混合。吸光度测量在230 nm紫外线分光光度计10分钟后孵化在37摄氏度的空白(没有过氧化氢)。清除过氧化氢的比例计算使用公式
%的清除= ((Ao-A1) / Ao) x 100
Ao吸光度控制和A1是样品的吸光度。
测定总抗氧化能力(TAC)
总抗氧化活性的海藻萃取液决心的方法Mitsuda et al ., 1996。7.45毫升的硫酸(0.6米),0.99 g的硫酸钠(28毫米)和1.23 g(钼酸铵(4毫米)混合在一起在250毫升蒸馏水和贴上总抗氧化能力(TAC)。0.1毫升的海藻萃取液(50,75年,100年,150年和200年μg /毫升))溶解在1毫升的TAC和吸光度是读15分钟后695海里。抗坏血酸作为标准。
abt抑制试验
自由基清除活性也由abt (2, 2 'azino bis (3-ethylbenzothiazoline-6 - sulphonicacid)联胺盐)自由基阳离子脱色试验et al ., 1999。abt是由混合生成5毫升的7毫米abt 88μL 140毫米/硫酸钾在黑暗中在室温16 h。解决方案与50%乙醇稀释和734海里测定的吸光度。abt自由基阳离子清除活动评估混合5毫升abt的解决方案(0.7±0.05)的吸光度为0.1毫升海藻萃取液(50,75年,100年,150年和200年μg /毫升)的清除清除的是由下列公式计算% = ((Ao-A1) / Ao) x 100
Ao吸光度控制和A1是样品的吸光度。
金属ION-CHELATING能力分析
亚铁离子的螯合能力(FIC)红色海藻的原始方法估计Decker韦尔奇(1990)和一些细微的修改。这个试验是基于蓝色彩色ion-ferrozine亚铁的形成复杂的最大吸光度在562海里。简而言之,100毫升的不同浓度的不同提取样品和标准和100毫升的去离子水和25毫升的氯化亚铁微量滴定板(0.5毫米)。反应是由添加25毫升ferrozine(2.5毫米),反应混合物大力动摇了。吸光度是记录在562纳米微量滴定板读者,10分钟后孵化环境温度。Ethylenediaminetetraaceticacid酸(EDTA)被用来作为一个标准的化合物。抑制ferrozine-Fe2 +复杂地层的百分比计算。
抗癌活性的甲醇提取物a fragilissima
细胞系和文化
肺Cancer-A549细胞系来自泰米尔纳德邦兽医学院,钦奈。最小的细胞保持基本媒体补充10%的边后卫,青霉素(100 U /毫升),链霉素(100μg /毫升)50μg /毫升的调湿大气二氧化碳在37°C。
试剂
MEM是购自嗨媒体实验室胎牛血清(的边后卫)购买的顺反子实验室胰蛋白酶,methylthiazolyl二苯溴化-四唑(MTT)和二甲亚砜(DMSO)购买(孟买Sisco研究实验室化学物质)。其他化学药品和试剂都从西格玛奥德里奇获得孟买。
体外试验对细胞毒性活动(MTT试验)
样品的细胞毒性A549 MTT试验确定(Mosmann 1983)。细胞(1×105 /)在1毫升的介质/镀在24-well板块(合演康宁,罗彻斯特,纽约)。48小时后孵化细胞达到融合。然后,细胞被孵化的各种样品的浓度在0.1% DMSO 48 h 37°C。样品溶液,洗涤后的磷酸盐(pH值7.4),200μl /(5毫克/毫升)的3 - 0.5% (4 5-dimethyl-2-thiazolyl) 2, 5-diphenyl -四唑溴化细胞(MTT)解决方案是补充道。4 h孵化后,0.04 m盐酸/异丙醇被添加。可行的细胞吸光度测定的570海里。进行测量和50%的抑制能力所需的浓度(IC50)决心图形。570纳米的吸光度测量紫外-分光光度计使用井没有示例包含细胞作为空白。样品的效果对A549的扩散表示为%细胞生存能力,使用下面的公式:
%对细胞生存能力= A570 / A570控制细胞×100%。

结果
在目前的研究中,海藻Amphiroa fragilissima选择和筛选植物化学的成分的存在。植物化学的成分如醇、黄酮类、单宁、酚类、皂甙和其他一些芳香族化合物海藻的次生代谢物作为防御机制对许多微生物捕食昆虫和其他的食草动物。本研究对海藻进行样本显示的存在有效成分的药用价值。选定的植物化学的成分海藻调查(表1)进行了总结。海藻提取物进行了分析和揭示了类黄酮的存在,苷类,酚类,碳水化合物,皂甙,选定的海藻的单宁,可以负责观察抗菌财产。
图像
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细菌感染是最严重的全球卫生问题在21世纪。不同溶剂提取物的Amphiroa fragilissima测试对人类致病性微生物”即、金黄色葡萄球菌和伤口感染病原体可引起specticemia,心内的和中毒性休克综合症。枯草芽孢杆菌、免疫刺激性剂、大肠杆菌最常见细菌的毒性菌株可引起胃肠炎,尿路感染,新生儿脑膜炎;铜绿假单胞菌感染的肺呼吸道、泌尿道、烧伤和创伤。
表2。抗菌活性Amphiroa fragilissima
琼脂扩散法是用来评估抗菌活动通过测量区针对测试微生物的抑制(表2)。a . fragilissima的甲醇提取物表现出突出的五细菌的抗菌活性,但更容易对枯草芽孢杆菌和最小活动对铜绿假单胞菌。答:fragilissima的乙酸乙酯提取物也像甲醇提取相同的活动,因为它对枯草芽孢杆菌和最小记录更重要活动活动对铜绿假单胞菌。而氯仿提取物a fragilissima显示最少的活动在所有三个提取物表现出最大的活动对金黄色葡萄球菌和最小活动
图像
枯草芽孢杆菌。天然抗氧化剂并不局限于丰富的天然抗氧化化合物。总酚含量测定为没食子酸当量(GAE) g的提取。总酚含量干这一研究获得的不同溶剂提取物的海藻介绍(图)。研究了海藻的总酚含量范围从64毫克GAE 156毫克GAE / g / g。酚含量越高被发现156毫克GAE / g a . fragilissima氯仿提取,而甲醇提取物的a . fragilissima 81毫克GAE / g,和最少的苯酚内容被发现的乙酸乙酯提取物a fragilissima 64毫克GAE / g。
图像
总类黄酮含量测定槲皮素(QE) g相当于提取。提出了干海藻萃取液的总类黄酮在表3。总黄酮类化合物海藻范围从21个毫克QE 59毫克QE / g / g。的甲醇提取物a fragilissima包含更高的总类黄酮含量,发现59毫克QE / g比其他提取相对。a的氯仿提取fragilissima被发现40毫克QE / g的总类黄酮含量和总类黄酮含量最低的是乙酸乙酯提取物中发现的a . fragilissima 21 mg分别QE / g。
总缩合单宁含量是衡量儿茶素(CE)的提取。总缩合单宁含量干甲醇,乙酸乙酯,氯仿提取的fragilissima表3中可以看到。研究海藻的缩合单宁含量范围从17毫克CE 38毫克CE / g / g。的氯仿提取物a fragilissima发现的缩合单宁38毫克CE / g,和甲醇提取物a fragillissima被发现有21个毫克CE / g总缩合单宁含量。最低数量的缩合单宁含量的乙酸乙酯提取物中发现了一个.fragillissima分别是公元17毫克/ g。
答:FRAGILISSIMA的抗氧化活性
DPPH自由基清除活性
DPPH试剂被广泛用于调查的自由基清除活性化合物。在DPPH测试,干提取潜在的能够产生黄色彩色diphenylpicrylhydrazine。分析是基于减少酒精DPPH解决方案在氢的存在——捐赠抗氧化剂由于非激进的形成形式DPPH-H的反应。DPPH结果通常解释为“抑制浓度”或IC50值,定义为底物的浓度,导致DPPH活动的50%的损失。
的IC50值DPPH自由基清除活性干海藻的不同溶剂提取物在图1所示。抗氧化活动的三种不同的提取有显著不同,IC50值范围从50μg 200μg /毫升。a . fragilissima氯仿和甲醇提取,显示最高DPPH自由基的活动实现50%抑制浓度低至50到75μg /毫升。乙酸乙酯的IC50水平50到200μg /毫升。这些结果显著效果低于所有的三个种类的海藻在目前的研究表明,马纳尔湾湾海藻有良好的天然抗氧化剂的潜在来源。
图像
还原能力测定
在这个分析测试解决方案的黄色更改各种色调的绿色和蓝色取决于每个化合物的还原能力。减速器的存在(即抗氧化剂)导致的减少fe3 + /铁氰化物复杂亚铁形式。减少活动的不同溶剂提取物的a . fragilissima评估根据山口的方法et al ., 1998。每个的浓度从50到200中提取制备μg /毫升。最高金额的甲醇提取物的还原能力是观察A.fragilissima 0.186 200年μg /毫升浓度,其次是乙酸乙酯提取物是0.142μg /毫升200μg /毫升的浓度。最小的还原能力也体现在氯仿提取的A.fragilissima 0.043 200μg /毫升图2。
图像
过氧化氢清除试验
过氧化氢清除活动的测量是一种有用的方法,确定抗氧化剂的能力减少助氧化剂如过氧化氢水平。它可以穿过细胞膜并可能缓慢氧化的化合物。过氧化氢本身不是很活泼,但有时可能有毒的细胞,因为细胞中的羟基。海藻萃取液的抑制的效果的fragilissima受到过氧化氢清除试验。每个的浓度从50到100中提取制备μg /毫升。在三种不同提取物氯仿提取物显示了更大的能力减少氧化剂过氧化氢浓度的82.97% 200年μg /毫升其次是乙酸乙酯提取76.62%的浓度。最小的活动确定为69.96%,报200μg /毫升的甲醇提取物的浓度分别为a . fragilissima图3。
图像
金属螯合试验
铁螯合效应的测量表明较高的抗氧化活性。Ferrozine可以形成复杂的定量与亚铁离子。复杂地层的中断,从而减少红色复杂可以测量。三个不同的浓度从50到200中提取制备μg /毫升。最高的螯合效应被发现甲醇提取物的a . fragilissima至少为73.63%,乙酸乙酯61.13%被发现。螯合效应增加随着提取物浓度的增加分别图4所示。
图像
总抗氧化能力(TAC)
减少属性通常与减少的存在有关。减少被报道的自由基链式反应终止剂捐一个氢原子。在大多数情况下,无论舞台的氧化行为评估,大多数non-enzymatic氧化活动是由氧化还原反应。在目前的研究海藻提取物的还原能力的fragilissima浓度增加而增加。每个的浓度从50到200中提取制备μg /毫升。还原能力最强的是集中在甲醇提取物的A.fragilissima显示是0.347 200μg /毫升的浓度紧随其后的是氯仿提取,在同一浓度为0.093。最小的还原能力被发现0.013μg /毫升的乙酸乙酯提取物a fragilissima分别图5所示。
图像
abt抑制试验
abt激进反应涉及电子转移和过程发生速度相比,DPPH和过氧化氢。在这项研究中abt自由基清除活性(55.52%)1000年μg /毫升的浓度(图6)相比分别DPPH和过氧化氢。
图像
抗癌活性的甲醇提取物a FRAGILISSIMA (MTT试验)
抗癌活性的影响进行评估,以阐明提取直接相关的诱导细胞死亡和细胞增殖的抑制。总结了有机提取物的活性的结果在表7中,8和9。a . fragilissima的抗癌活性的甲醇提取物不同浓度范围从7.8到1000μg /毫升的提取进行评估通过MTT检测所述Mossmann 1983。
甲醇提取的抗癌效应fragilissima在肺癌细胞系。细胞生存能力被发现在低浓度增加(7.8μg /毫升)中提取,但发现通过增加浓度的降低在所有三个海藻提取物。LC 50(致死浓度)的甲醇提取125年观察到μg /毫升浓度的提取。然而,只有16.9%的细胞生存能力是观察到1毫克/毫升浓度7,8和9。
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讨论
今天海藻是许多工业产品的原材料如琼脂、褐藻胶和卡拉胶但他们继续被广泛食用的食品在亚洲国家(1993年Mishra)。常见的主要成分蛋白质、碳水化合物、类固醇、苷可以提取使用极性溶剂如甲醇、乙酸乙酯、氯仿植物化学的过程中。这些结果与最近报道定性植物化学的测试用于检测生物碱的存在,丹宁酸、皂甙、黄酮类化合物,从海藻苷和酚类。海洋属综合有效成分用于传统和补充医学。不同种类的海藻被报道含有活性成分,可以治愈疾病。如今,更高比例的人口喜欢用药物治愈疾病的自然起源这些声称产生更少的副作用(Tyagi和Bohra et al ., 2002)。本研究主要集中在三个不同的a . fragilissima提取植物化学的物质的存在,粉元素分析和抗菌活性对革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌。藻类是真核生物居住在咸的海水和公认的合成生物活性(Michael et al ., 2002)化合物显示抗菌财产。此外,其他物质确定为抗菌药物是丙烯酸微生物,萜烯,含硫杂环化合物和酚类抑制剂。
植物化学的筛选a fragilissima揭示了存在的碳水化合物和生物碱皂甙、植物甾醇和苷被发现只有在乙酸乙酯和甲醇提取物。生物碱通常发现有抗菌性(Omulokoli et al ., 1997)对革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌。总之,a . fragilissima表明存在的植物化学的初步筛选抗菌活性的化学成分中扮演着不可或缺的角色。本研究的发现也为进一步的研究来确定特定的活性化合物,负责其抗菌活性。抗菌活性的红色,棕色和绿色藻类对革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌已经建立了几个科学家(Kolanjinathan et al ., 2009)。但抗菌活性的变化可能是由于提取的方法,溶剂用于提取和季节的样本收集(Kandhasamy和杂志,2008)。几种不同的有机溶剂被用来屏幕抗菌活性的海藻。早,Sastry Rao(1994)显示,抗菌活性对革兰氏阳性和革兰氏阴性致病性菌株与苯连续萃取后,氯仿和甲醇。Kolanjinathan和Ganesh(2009)表明,丙酮是最好的解决方案从海藻中提取的有效抗菌材料myricystum, Turbinaria圆锥体,Hypnea musiformis, Gracilaria蕉芋和Halimedia股薄肌;然而,Karthikaidevi et al。(2009)用七种不同的溶剂包括甲醇和乙酸乙酯提取的抗菌物质松藻属adherens,石莼试和Halimeda金枪鱼。
在我们的研究中,三种不同的溶剂提取海藻收集从Kilakarai海岸Rameswaram,泰米尔纳德邦和筛选抗菌活性使用溶剂甲醇、乙酸乙酯、氯仿。结果表明,a . fragilissima红藻,甲醇提取更活跃而氯仿和乙酸乙酯提取物。相似的结果也得到Kandhasamy和杂志(2008年)和Karthikaidevi et al . (2009)。这些强大的活动与褐藻可能是由于酚类化合物,如phlorotannins eckol和eckol-related化合物有很强的杀菌活性。抗菌活性的海藻随物种不同的部门;Caccamese et al。(1985)报道,褐藻提取物显示活动高于红藻的提取是依照我们的结果,而Viachosi et al。(2001)报道,提取褐藻类的表现出抗菌活性的最高水平,其次是红藻门、绿藻门。相比之下,et al。(2001)报道,种红藻门显示最高的抗菌活性。测试的三种溶剂,甲醇是决心是最好的抗菌化合物的溶剂隔离测试海洋藻类其次是乙酸乙酯和氯仿(表2)。在海洋藻类提取测试,似乎是一些具体的活动对几个测试细菌。这一点可能是重要的特定抗生素的发展,和进一步的工作是要确定化合物导致活动,评估特定的抗菌活性对病原菌尤其是导致人类疾病。
酚类化合物是植物中普遍存在,包括海藻,已报告有广泛的生物活性,包括抗氧化性能(Kuda et al ., 2007)。Folin-Ciocalteu方法应用于研究海藻的总酚含量。Folin-Ciocalteu试剂确定总酚类,产生蓝色减少黄色heteropolyphosphomolybate-tungstate阴离子(Athukorala et al ., 2006)。总酚含量不同的三个海藻提取这一研究获得的展示在表3。报告显示,酚类化合物是一种最有效的抗氧化剂在褐藻。的总酚含量结果h . elongata和l . saccharina这一研究获得的高于其他报告褐色海藻。Ganesan et al。(2008)报道原油methanolic提取红色海藻产量结果的范围1.5 - 4.1毫克GAE / g,这是降低酚醛比红物种研究的工作内容。目前研究的结果很有前景,因为海藻多酚化合物是有效的抗氧化剂在延缓油脂酸败,因此海藻提取物可以在食品的应用潜力。在我们目前的研究中,提出了干海藻提取物的总类黄酮在表3。总黄酮类化合物海藻范围从21 to59毫克QE / g。 Methanol extract of, A. fragilissima contained significantly higher total flavonoids content which was found to be 59 mg QE/g. Kahkonen et al. (1999) stated that flavonoids are probably the most important natural phenolic due to their broad spectrum of chemical and biological activities, including antioxidant and free radical scavenging properties. Flavonoids have been reported as antioxidants, scavengers of a wide range of reactive oxygen species and inhibitors of lipid peroxidation, and also as potential therapeutic agents against a wide variety of diseases.
海藻或海洋宏观藻类称为丰富各种天然抗氧化剂来源。化合物如茶多酚、儿茶素、黄酮醇、黄酮醇苷,phlorotannins发现甲醇提取物的红色和褐色海藻。它们的分子骨架的独特性和结构导致了强大的抗氧化活性。茶多酚对即时利用苯酚环作为自由基的电子陷阱。所有的三个不同的海藻的抗氧化活动明显不同,IC50值范围从50μg 200μg /毫升。a . fragilissima的甲醇和氯仿提取显示最高DPPH自由基的活动实现50%抑制浓度低至75μg /毫升。本研究的结果符合王et al .(2009)和燕et al .(1999),他也发现褐藻中含有大量的多酚和DPPH自由基清除活性高于红色和绿色藻类。趋势et al .(2008)报道,然而低水平的DPPH自由基清除活性在褐色海藻,17.79 - 23.16%的范围内提取1000μg /毫升的浓度。
抗氧化活性的海洋藻类可能来自色素如叶绿素和类胡萝卜素,维生素和维生素前体包括α-tocopherolβ-carotene,烟酸,硫胺素和抗坏血酸、多酚等酚和对苯二酚和类黄酮,磷脂尤其是磷脂酰胆碱,萜类化合物、多肽、和其他抗氧化物质,直接或间接导致氧化过程的抑制或抑制(Shahidi, 2008)。干methanolic布朗提取三种海藻有良好的抗氧化和抗菌活性。虽然各种溶剂用于筛选抗氧化和抗菌活性海藻,它仍然是不确定什么样的溶剂是最有效的,适合从海藻中提取(郑et al ., 2001)。为了潜在的增强抗氧化和抗菌的内容从红色和绿色的物种,乙酸乙酯和己烷利用萃取溶剂。酚类化合物溶于极性有机溶剂通常比在水里,因此有效的萃取剂推荐水混合物的甲醇,乙酸乙酯和正己烷(沃特曼和摩尔,1994)。这样的极性溶剂,酚类化合物与糖或蛋白质、皂苷、苷类、有机酸、单宁、盐,和粘液可以提取。
如前所述,甲醇提取物的红色和绿色海藻有更高或相同的总酚含量和DPPH自由基清除活性随着乙醇和丙酮提取物。这意味着藻类的生物活性代谢物可能容易溶于甲醇和更少溶于乙酸乙酯和正己烷。提取红海藻已报告表现出弱DPPH自由基淬活动当获得使用水、乙醇或甲醇作为溶剂,而氯仿、乙酸乙酯和丙酮提取物报导了几个红色的海藻,表现出强烈的DPPH淬火活动(Yan et al ., 1999)。
因此,特定的溶剂用于提取海藻材料化合物的提取有显著的影响恢复。例如,非极性部分从氯仿:甲醇提取Porphyra tenera表现出显著的保护作用等相关的脂质氧化磷脂,磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺。Nakayama et al。(1999)报道,正己烷、氯仿和甲醇提取物的红色海藻,Porphyra yezoensis表现出抗氧化活动归因于存在的β-胡萝卜素,叶绿素类和氨基的化合物。总的来说,甲醇是最有效的溶剂萃取海藻的抗氧化性能,这可能是由于甲醇具有较高的介电常数比乙酸乙酯和正己烷。还原能力属性表明抗氧化化合物电子给体,可以减少氧化脂质过氧化过程的中间体,所以他们可以作为中小学抗氧化剂(日元和陈1995)。我们发现红色海藻,甲醇提取物a fragilissima更比其他提取物活性。积极的控制L -抗坏血酸表现出显著的抗氧化活性高于所有的样本中提取的海藻。
甲醇提取的抗癌效应fragilissima在肺癌细胞系。细胞生存能力被发现在低浓度增加(7.8μg /毫升)中提取,但发现通过增加浓度的降低在所有三个海藻提取物。此外,红藻类和海藻提取物的抗癌效果呈正相关,与总多酚提取的内容。因此,与红藻类和海带提取物表现出剂量依赖性抑制作用对人类宫颈上皮的增殖腺癌希拉细胞系在目前的研究。EC50值计算出p . palmata l . setchellii m . integrifolia和n leutkeana提取物抑制海拉细胞增殖72 h孵化后2.30,4.53,4.11和4.10毫克/毫升,分别(Yvonne人民币2006)。

结论
本研究的结果表明,海藻收集;a fragilissima成功显示的植物化学成分分析、抗氧化和抗菌活动和含有酚类、类黄酮。甲醇提取物a fragilissima有抗菌和抗氧化剂含量最高。抗菌素的提取海藻的种类是溶剂的依赖。a . fragilissima的抗氧化物含量没有显著变化与不同极性溶剂。这是一种很有前途的发现,等可能会有潜在的利用提取的药物作为抗氧化剂能提高产品质量,同时也作为抗菌药物,这可能会增加货架寿命和安全。
目前,大约50%的药物在临床试验用于抗癌活性是孤立的从自然资源如海藻(海藻)药草和香料或相关。大量的活性化合物如类黄酮、二萜、常用药用和生物碱已被证明具有抗癌活性。据报道美国国家癌症研究所(NCI)的标准原油中提取的抗癌活性草本植物是一个IC50 < 30μg /毫升。因此,根据目前的研究结果看来,海洋藻类可能是受雇于ethno-medicine治疗癌症的疾病。这项研究有一些局限性。类黄酮浓度与抗氧化活性之间的关系不确定。此外,只是确定细胞毒性,细胞凋亡和细胞周期分析没有执行。在这项研究中我们的结果表明,a . fragilissima一些化合物抗癌活性和疗效的可能造成这些药用价值。然而,有必要详细科学研究传统医学实践,以确保有价值的治疗知识的海藻是保存并为他们的功效提供科学证据。

确认
作者感谢教授r . Rengasamy主任,高级研究中心植物学、马德拉斯大学Maraimalai校园,圭因迪,钦奈025年- 600年,印度泰米尔纳德邦,提供实验室设施和为他的过程中不断的支持和鼓励研究期间

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