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国际创新研究期刊》的研究在科学、工程和技术

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持久的套管的准备颅内micro-infusion NeuroactiveSubstances的小动物

Santhosh Mayannavar1,Rashmi KS2,Keerthi Deshpande3希拉R派4Ganaraja B5
  1. 1高级研究员,生理,Kasturba医学院,芒格洛尔(单位大学),印度。
  2. Kasturba医学院讲师,生理,芒格洛尔,印度大学(单位)
  3. 研究助理、生理Kasturba医学院,芒格洛尔(单位大学),印度。
  4. 教授,生理,Kasturba医学院,芒格洛尔(单位大学),印度
  5. 额外的教授,Kasturba医学院生理学系芒格洛尔(单位大学),印度
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文摘

颅内注入化学物质刺激神经组织的常规方法在神经生理学研究。我们设计了一个简单、耐用和可重用的内部套管。引导插管,把安全放在头骨使用牙科丙烯酸和固定螺钉,是捏造22测量皮下注射针的针。内部套管从30捏造计牙科针,白颜色的中心。这个内部套管的长度足以达到核当插入时通过引导插管注入过程。我们畅游促食素BLA在通宵禁食大鼠,通过使用这种插管大会食物摄入量明显增加。在组织学检查我们发现注射的位置是根据需要BLA。引导插管和内部套管制造由我们似乎是非常可靠的。牙科针具有较高的脾气,它不会改变形状像胰岛素针有限的可重用性。我们得出结论,该方法制造的内部套管将是一个更好的选择对于那些捏造的皮下注射针头。

关键字
内部套管,引导插管,促食素,基底外侧杏仁核

介绍
为了研究刺激神经组织的物质的影响,有必要管理成特定的网站通过立体定位方法使用颅内管子技术在动物模型。超过半个世纪,颅内药物灌注研究已经流行。[1,2]他们用皮下注射针插入通过引导插管20计针吗啡的镇痛作用研究注入心室。有机玻璃盒被嵌入式安全引导插管。罗伯特毫克(1980)等[3]使用引导插管18测量皮下注射针,其为了锁被移除和切割成1.5毫米的长度。他们引导套管的长度最小化减少引起的大脑皮层损伤在植入引导插管。据报道,他们使用微注射器针头注入药物通过拟合深度衣领。这种方法可以为心室内注射足够好。三十计不锈钢皮下注射针也已经被其他工人。(4、5、6)的学习效果为目的的特定神经递质焦需要更精密的大脑区域。 In our study we implanted cannula into the BasolateralAmygdlaoid Nucleus (BLA). It required injection of Orexin-A [7] into BLA in the basal brain. For this precision injection, longer guide cannula was devised from a 20 gauge needle. We used a 30 gauge dental needle with a hub for internal cannula. The methodology of preparation of guide cannula, internal cannula and the results obtained using the device is discussed here.
准备引导插管:引导插管准备使用22计不锈钢注射针头(0.60×25毫米,印度斯坦注射器和医疗设备有限公司,印度印度)(图1 - 1)。把漏斗,皮下注射针的中心融化(图1 - 2)由酒精和干净的针。然后把不锈钢桶需要长度通过使用抛光机,明确其孔27计针或线,平的引导插管的抛光机。(图1 - 3)。所需的长度取决于表面的垂直坐标的头骨,老鼠大脑的描述。[8]措施引导套管的长度用游标尺。本指南套管连接到24纱布不锈钢焊条(Fig.1-4)胶环氧树脂(亨斯迈先进材料,印度分公司)和允许干燥过夜。这是必要的,处理引导插管。引导插管准备植入。不锈钢丝stillet 28个指标,这是弯曲的上端为防止滑入引导插管,被屏蔽腔的引导插管注射,只能删除。
准备注入套管:注入套管从Septoject捏造无菌牙科30针规不锈钢针(Septodont。Saint-Maur-des-Fosses Cedex Fracia)。这个针是硅化,确保顺利插入套管(图a)。它有一个白色的中心,方便处理插入大脑核。把针和剪刀的帮助下,保持约3毫米的长度超过所需长度(垂直coordinatein立体定位Atlas) [8]。波兰的提示,使内部套管的标准长度(图2 b),它提示1毫米不止于各自的引导插管。明确内部套管的孔,检查封锁注射生理盐水或双蒸馏水使用注射器。相反的内部套管与聚乙烯微内径管(Tycon灵活的塑料管材S-54-HL)获得的环氧树脂的粘合剂。风干后,内部套管(Fig.2.C)准备使用。
机构伦理委员会批准了毕业典礼前的实验。
外科手术:男性纯种白化病老鼠重约250±10 g选择和aneasthtised注射盐酸氯胺酮的混合物(60毫克/公斤)和xylazineHCl(6毫克/公斤)。2厘米长的切口在头皮上,彻底消毒用酒精消毒。该地区与棉花和过氧化氢清除。点是在头骨在相应的领域达到基底外侧杏仁核。毛刺使用牙钻洞了。引导插管是降低立体定位技术,并确保螺钉表面的帮助支持和牙科丙烯酸水泥(DPI-RR感冒药,丙烯酸粉末,牙科产品的印度,孟买)。基底外侧杏仁核(BLA),协调来自前囱:前后的-2.6毫米,侧±4.9和垂直8.5毫米)(图3)。8.5毫米的引导插管准备BLA植入的目的。外部套管被植入头骨表面通过精心制作的毛刺洞点对应BLA,在左边或右边,在选择(单边注入)。引导插管插入到磨孔,7.4毫米,通过处理钢丝连接(使用的环氧树脂胶粘剂胶)。 Once the cannula is in place, then it is secured with the help of screw and dental acrylic. This is left for setting for a day. Then the steel wire attached to guide cannula was carefully removed and the guide cannula with the stillet inside it was ready for use. The rats were left for recuperation for 2-3 days.
使用内部套管:内部套管制造使用30计牙科针与聚丙烯塑料中心连接油管。套管与中心举行,移除stillet后插入引导插管。因为内部套管的长度从塑料中心仔细测量,这样插入的时候,它将达到准确的点在大脑中,在这种情况下,BLA。套管将适合引导插管,可以用于化学药剂的注入。
在目前的实验中,两国注射促食素进行了测试。两组的成年雄性老鼠被选,分为对照组(n = 6)和实验组(n = 6)。在实验组3 nmol /大鼠的促食素(σ化工、美国)注入一段2分钟使用哈佛Pico +(美国)输液泵连接管与套管放在左、右BLA一个接一个视情况而定(图3)。空心聚乙烯管的输液是汉密尔顿的帮助下10毫升注射器。这个注射器安装到泵。然后stillet放在引导插管被移除。内部套管插入引导插管和担保。然后泵开始向BLA核交付解决方案。生理盐水对照组注入,但对这两组的所有实验程序相同。输液结束时,套管和stillet回到位置删除。时间是指出。 The food intake, water intake were measured, by providing pre weighed quantities to each animal, at intervals of 1, 2, 4 and 24 hours in both the groups. The procedure was repeated two times

结果
组织学证实:这个实验结束时,老鼠被牺牲了致命剂量的乙醚麻醉和灌注transcardially缓冲正式的盐水。套管是小心地删除。大脑组织和石蜡块处理。部分7微米的切片和染色crysyl紫罗兰和光学显微镜下观察(图4),以确认该网站的注入。
单剂量促食素注入老鼠的食物摄入量和水的摄入量增加,控制相比(表1)。第一个小时的增加非常显著(表1;p < 0.01)。食物摄入量显示第四小时也显著增加(p < 0.05)。尽管摄入增加在所有时期即1,2、四小时,但总消费24小时没有显示显著增加摄入量。

讨论
我们这里描述一个简单的方法制造的插管颅内管理组装化学药剂。这里使用两个特征的牙科针内部套管使它非常有用。一个是塑料中心。塑料中心提供了一个良好的控制来处理内部套管。通常所需的套管很短(或多或少一个厘米)。塑料中心可以拿在手里牢牢插入引导插管没有任何困难或刺激动物移动。这种针的第二个优势是它的脾气。牙科针坚硬,不容易弯曲,像针胰岛素注射器或其他不锈钢针。由于这个属性,这个套管可以反复使用,没有弯曲或损坏。之前报道的文章使用了不同种类的不锈钢针。 When we use very thin needles, it is necessary to take great care so that the needle is not bent, without which there will be error in the delivery of the drug.
在目前的研究中,我们植入BLA双边插管,制造在我们的实验室和老鼠注射了促食素a . 3 nmol /鼠2分钟双边注入产生的促食素表中所示的数据。(表1)进行了两个试验和两个试验的意思表示在表中。数据分析表明,单一剂量的促食素注入2分钟导致增加水和食物摄入量的研究小组老鼠摄入1小时后以及在24小时。威尔士人都显著高于安慰剂相比,注入控制。食物摄入量在第二和第四小时在治疗大鼠(p < 0.05)均告下跌。的促食素半衰期大约27 - 40分钟的血液。[9]小剂量注射BLA造成短期内增加食物和水的摄入量。这种效果是减少在第二和第四个小时。这些结果证明新编造内部插管注入的功效研究药物,促食素,根据需要对目标。这也是的组织学检查证实了老鼠大脑的实验过程(图4)。
因此,我们这里现在经济的方法来准备一个可靠的插管大会,大脑区域的神经生理学操纵的目的动物。
图像
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承认
确认:1。作者感谢Kasturba医学院,芒格洛尔(印度麦利普大学)、印度的研究机构提供开展这个项目。2。我们感谢美国生物技术,印度政府forfunding这个研究项目。

引用
  1. 海登,参考书籍,Johnson, L.R. &Maickel, R.P. “Construction and implantation of a permanent cannula for making injections into the lateral ventricle of the rat brain”. Life Sci., 5;1509-1515: 1966.
  2. 火花C。G & Spencer P.S.J.“Antinociceptive活动吗啡注射后的生物胺的脑室有意识的老鼠”,Br。j . Pharinac。,42;, 230-241: 1971.
  3. 格里森R。米,Dragunow M。克,科顿N。威利格F, J。W,槽D.L.“颅内中空的小动物行为研究方法仪表”,12卷(3),346 - 348:1980。
  4. Dadasaheb m . Kokare Gajanan p . Shelkar Chandrashekhar d·博卡8月t . Nakhate担任该行Nishikant Subhedar。“一个简单而廉价的方法来制造一个颅内注射在大鼠和小鼠插管系统”。药理学和毒理学方法杂志》,64;246 - 250:2011。
  5. 帕卡德K, Pohorecky L。砖J。”一个简单的插管,脑室啮齿动物药品管理局”。J > Methods.10 (2), 139 - 43:1984。
  6. 威廉姆斯L。R, Vahlsing H。L, Lindamood T,瓦伦而言,计F。H, Manthorpe M”小计插管装置连续输注外源性药物进入大脑”。Exp。95 (3), 743 - 54: 1987。
  7. 樱井T, Amemiya Ishii M,松崎,Chemelli R。田中M H, et al .,“促食素和促食素受体:一个家庭的下丘脑神经肽和G protein-coupled受体调节摄食行为”。细胞,92 (4);573 - 85:1998。
  8. Paxinos, g·沃森,C。:“老鼠脑立体定位坐标”,第二版。新南威尔士,澳大利亚,学术出版社,1986;54-56页。
  9. Kaur Ehrstrom M, Naslund E, F莱文,R, Kirchgessner。L, Theodorsson E, Hellstrom点。“促食素的药动学特征和影响血浆胰岛素和胰高血糖素的老鼠”。RegulPept.119 (3), 209 - 12: 2004。