印度中央邦Shahdol地区Gond部落Alpha型地中海贫血患病率

摘要

血红蛋白病是血红蛋白的疾病，是世界上最常见的基因疾病。世界卫生组织2001年的报告估计，大约有2.5亿人患有这些疾病，每年有2000名受影响的纯合子出生，平均分布在镰状细胞病和地中海贫血之间。在印度，血红蛋白病的主要形式是镰状细胞病贫血在地中海贫血中，地中海贫血在印度几乎所有人群中都很常见。α型地贫在印度的研究较少，主要由点突变引起，但少数研究表明α型地贫在印度次大陆部落人群中普遍存在。来自印度中部中央邦Shahdol区的Gond部落的约75人接受了CBC异常、血红蛋白病、α型地中海贫血和ß型地中海贫血的调查。本研究采用的方法是聚合酶链式反应。镰状细胞贫血是部落中唯一一种异常血红蛋白病，患病率为17%。地中海贫血的患病率也较低，为4%。α地中海贫血II型非常常见，占43%，主要为右侧缺失，即α3.7 kb缺失。α型地中海贫血II型的杂合度略微降低了血液学参数。在62%的人口中，大多数人患有贫血，这在成年女性和儿童中更为明显，大多数人患有轻度贫血，但相当大比例的成年女性和儿童患有中度至重度贫血。

关键字

血红蛋白病，镰状细胞病，α和地中海贫血，血液学参数，全血细胞计数，贫血。

介绍

血液中的任何疾病都可能导致某种疾病，有时可能对我们的身体有害，这通常被称为“血液病”[1]这些血液病之一是血红蛋白病。血红蛋白病是在血红蛋白分子中发现的一种单基因遗传性疾病，是由于其中一个血红蛋白基因突变或缺失，导致血红蛋白异常/合成速率降低/合成缺失导致链失衡[2,3]。它可以是定性的(镰状细胞贫血)或定量的(地中海贫血)。地中海贫血是一种常染色体隐性遗传性血液病。地中海贫血通常导致组成正常血红蛋白分子的正常珠蛋白生产不足，通常是通过调节基因的突变引起的。α，β，γ，δ链可能存在遗传缺陷，可能影响患者α，β，γ，δ链的某些组合，但不影响共同作用。这可能会导致红细胞数量不足。这种疾病在地中海地区的人群中尤其普遍。地中海贫血根据受影响的血红蛋白分子链进行分类:alpha地中海贫血和Beta地中海贫血。在α地中海贫血中，α珠蛋白卡蛋白的生产受到影响，而在β地中海贫血中，β珠蛋白链的生产受到影响。 β globin chain are encoded by a single gene on chromosome 11; α globin chain chain are encoded by two closely linked gene on chromosome 16. Deletion of one of α locus has a high prevalence in people of African, American or Asian descent [5], making them more likely to develop α Thalassemia. The severity of α Thalassemia is correlated with the number of affected α globin loci; the greater the number of affected loci, the more severe will be the manifestation of the disease. There are several different types of α Thalassemia, ranging from mild to severe;

•沉默携带者状态——四个α位点中的一个受到影响，只是少量缺乏α蛋白，所以一般没有健康问题。

•α型地中海贫血特征或轻度α型地中海贫血-如果四个α位点中的两个受到影响，缺乏足够的α蛋白有时会引起类似缺铁性贫血的轻度症状。

•血红蛋白H病——如果三个位点受到影响，缺乏足够的α蛋白会导致严重贫血和严重的健康问题，如骨骼畸形、脾脏肿大和疲劳。

•严重阿尔法地中海贫血——如果所有四个位点都受到影响，身体就不会产生阿尔法蛋白质，因此患有这种地中海贫血的新生儿通常无法存活(他们会患上一种称为胎儿积液的疾病)。

α地中海贫血的症状出现在出生前或出生前。临床症状可表现为贫血、黄疸、脾肿大、骨髓扩张、胆结石、头痛、疲劳、烦躁、生长失败、呼吸短促、发育缓慢和颅骨畸形[6]。该病在地中海地区、马尔代夫、欧洲、泰国、孟加拉国、中国、印度、马来西亚和巴基斯坦流行[7,8]。这在像印度这样的发展中国家尤其重要，因为它增加了卫生保健系统的负担。印度每年有1万名儿童出生时患有地中海贫血，占世界总数的10%。随着频率的增加，内生交配假设部落群落面临更多的问题[9]。作为一种疾病的携带者可以提供一定程度的预防疟疾的保护，在意大利和希腊血统的人中很常见，在一些非洲和印度地区也很常见[10,11]。

材料与方法

Gond部落的75名研究人口来自Tehsil Rajendragram村Baindi和Shahdol区的Beldongri。全血细胞计数用全自动血细胞计数仪测定。在做全血细胞计数后，取少量样本进行其他测试，如镰状试验，以确定镰状细胞病[12]的存在。电泳分离检测血红蛋白变异，碱变性测定血红蛋白F百分比，溶血制备柱层析法测定血红蛋白A和血红蛋白A2百分比。柱材为二乙胺纤维素预滚化微颗粒负离子交换器纤维素(pH 8.5)。其余血液样本用于DNA分离。

所用试剂为裂解缓冲液(NaCl, EDTA)、SDS、蛋白酶K、TE缓冲液(pH -7.5) (Tris,EDTA)、氯仿异戊醇混合物(24:1)、乙酸铵、PCR缓冲液、MgCl₂， dNTPs引物，Taq DNA聚合酶，Tris HCL，(NH₄）₂所以₄、蒸馏水、牛血清白蛋白、DMSO。

方法

血液样本在EDTA中采集。在样品中加入2X裂解缓冲液，反转混合，4℃，3000rpm离心10 min。取细胞球，再次加入1X裂解缓冲液，旋流后加入150 μl 10% SDS和10 μl蛋白酶K, 370C孵育过夜。再将Tris平衡苯酚等量加入上述混合溶液中，3000rpm离心10 min。已经观察到两个独立的层。上层已转移到另一管，并在该管中加入等量的氯仿和异戊醇混合物。将其倒置混合，然后以3000转/分的速度离心10分钟。取上层于新鲜管中，加入乙酸铵750 μl、4.5%甲醇(冰)，轻轻摇匀，DNA沉淀，3000 rpm离心10 min。取上清液，用70%冷冻乙醇洗涤，离心。取上清液，风干后溶于200 ~ 500μl TE Buffer中。 The OD was taken at 260 and 280 nm and ratio was calculated.

然后采集样本进行PCR。

聚合酶链式反应

反应混合物为1管α^3.7反应

反应混合物为1管α^4.2反应

引物序列

PCR程序在热循环器-perkin elmer中运行35个循环。

PCR程序

在35个完整的循环后，PCR管进行电泳以显示PCR扩增产物。采用1%琼脂糖凝胶进行电泳。凝胶运行后，在样品中检测到α II型α3.7和α4.2缺失。

结果

对沙赫多尔地区冈德部落75人的血液样本进行了不同类型的检测和处理，并将结果制成表格和图表。给出了Shahdol区研究人群中血红蛋白异常的发生率表1。镰状细胞是研究人群中唯一异常的血红蛋白。只有一人被发现患有镰状细胞病。β地贫性状的患病率为4%，α地贫性状的患病率为79%。给出了CBC剖面表2。男性、女性、儿童血红蛋白、MCH、HbF、HbA2均在正常范围内，MCV、MCHC偏低提示异常。贫血的等级已计算在内表3。有64%的人患有贫血症。患病率最高的是成年女性，其次是儿童，然后是男性。大多数贫血的人属于轻度贫血。给出了贫血人群的平均血液学参数表4。结果显示，三组患者MCH、MCV均较低，女性HbF较低。所有人的正常血红蛋白的血液学参数都已给出表5。儿童MCV和MCH均值较低。给出了镰状细胞性状和镰状细胞病患者的血液学参数表6。镰状细胞病的平均血红蛋白水平很低(7.5g/dl)。镰状细胞性状的CBC指标与正常人差异不大。缺失型α型地中海贫血的患病率在表7。超过一半(79%)的被研究人群有任何一种形式的alpha缺失。中给出了正常和甲型地中海贫血II型的平均血液学参数表8。3.7缺失纯合个体和复合个体的平均血红蛋白水平较低。MCV和MCH的平均值均较低。但杂合子的CBC指标与正常个体差异不大。

结论

血红蛋白病主要发生在这个部落。异常血红蛋白的主要形式是镰状血红蛋白和地中海贫血，即α型地中海贫血II型。镰状血红蛋白的患病率为17%，与其他血红蛋白相比较高。中央邦以及印度其他地区的许多部落人口都报道了如此高的患病率。在印度，它主要存在于中央邦中部的部落人口中[13,14]。贫血约占(64%)，多见于女性。大多数贫血人群MCV和MCH值较低，提示低色小细胞贫血[15]的流行。甲型地中海贫血II型比例小也是贫血特别是轻度贫血患病率高的原因。在本研究中，缺失型α的患病率^4.2比α更普遍^3.7删除。复合杂合度3.7和4.2的低流行率可能是由于样本量小。

参考文献

1. Weatherall DJ, Cleggs JB。一些常见的遗传性贫血的分子生物学的理解:地中海贫血的故事，血液，纯粹和Eloquent由MMN Windrobe p373
2. Schmidt RM, Huisman THJ, Lehman H.血红蛋白病的检测，CRC出版社克利夫兰，1974。
3. 佩鲁茨氏MF。《生物学》杂志1960;13:165-83。
4. 印度血红蛋白病的负担和未来的挑战。动物科学，2000;49:1536-1546。
5. http://web2.airmail.net/uthman/hemoglobinopathy/hemoglobinopathy.html
6. Giardina p, hilgartner M.地中海贫血最新进展。儿科Rev. 1992: 13:55-62
7. Eleftherious Androulla。第二章阿尔法地中海贫血地中海贫血国际联合会。2008年,ISBN: 9963-623-40-9
8. Flatz G, Pik C, Sringam S.血红蛋白E和地中海贫血。他们在泰国的分布。Ana hum Genet版权所有希腊血液学学会HAEMA ESSN:1108-2682。
9. Balgir RS.《印度遗传性疾病的预防:镰状细胞病、地中海贫血和G6PD缺乏症》，布巴内什瓦尔:区域医学研究中心，2001年，第1-12页。
10. 王志强，王志强，王志强，等。阿尔法地中海贫血对肯尼亚沿海儿童疟疾和其他疾病发病率的影响。公共科学图书馆。2006:3(5)。
11. E Goljan，病理学，第二版。Mosby Elsevier，快速评论系列。
12. 施密特RM和威尔逊SM。异常血红蛋白检测的标准化。血红蛋白溶解度试验。1973; 225:1225。
13. Sen R, Chakarvarti S, Sengupta B, De M, Halder A, Poddar S, Gajra B, Talukder G, Sengupta S.印度东部部落人口中的阿尔法地中海贫血。血红蛋白。2005;29:277 - 280。
14. RMRCT (ICMR)年度报告，贾巴尔普尔，2004年。
15. Liebhaber SA。a地中海贫血，血红蛋白，1989;13:685。