儿茶素的保护作用Fluoride-Induced Haematotoxicity在大鼠氧化应激相关

文摘

氟化物(Fl)是一种自然产生的电-化合物分为强有力的毒物和人类致癌物。红细胞是非常有利的模型来理解对膜诱导氧化应激的敏感性不同的外源性物质。Fl管理局(25毫克/公斤/ BW)显著增加的百分比溶血、脂质过氧化指标如硫代巴比土酸活性物质(TBARS)、共轭二烯烃(CD),蛋白质羰基含量(PC),和改变血液学的参数,与降低抗氧化酶如超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX) glutathione-s-transferase(销售税)、谷胱甘肽还原酶(GR)和glucose-6-phosphate脱氢酶(G6PD)。non-enzymic抗氧化剂的水平(减少谷胱甘肽、维生素a€—C和维生素a€—E”)和膜结合atp酶(Na + / K + atp酶,Mg2 + atp酶和Ca2 + atp酶)也减少了F治疗大鼠。前口服EGCG(40毫克/ k / BW)连同Fl 28天显著降低的水平TBARS, CD和PC显著增加膜atp酶、膜完整性、可行性、酶和non-enzymatic抗氧化剂在红细胞的老鼠脂肪肝的治疗。总之,结果清楚地表明,EGCG显著减毒Fl诱导haematotoxicity老鼠。

关键字

氟化钠、EGCG、红细胞,氧化应激,ROS,老鼠

介绍

氟化物(Fl)是无处不在的天然化合物,广泛的工业污染物释放到环境通过结合自然和人为过程。在低浓度Fl已经被证明是有利于牙齿和骨骼发育,因此,饮用水源的预防性补充Fl被广泛使用在许多国家几十年来(1]。此外,Fl化合物广泛应用于工业、农业和国内清洁产品等化学物质,杀虫剂,灭鼠剂。因此,每年有成千上万的相关报道急性或致命中毒由于过度摄入Fl-containing牙科产品和意外或者自杀在家接触Fl-containing化学品,工业工作场所和实验室。长期食用高Fl剂量结果在牙科和氟骨症等不良的健康影响,关节炎,骨质疏松症,不孕和精神发育迟滞2]。地方性氟中毒是一种严重的国家问题在许多县影响数以百万计的人使用地下水高Fl内容日常需求(3]。氟化通常被描述为双刃剑的因为在小剂量,这是一个必要的微量元素有显著的保护作用在预防龋齿和骨质疏松症。另一方面,过度暴露于Fl对生物体产生有害影响。它可能直接或间接地调节形成复合物的酶活性与酶分子的金属部分(4]。这样Fl干扰代谢过程包括碳水化合物、脂质和蛋白质(5]。氟化物抑制酶参与的主要代谢途径例如糖酵解和三羧酸循环。此外,Fl抑制脂肪酸氧化,降低丙酮酸脱氢酶的活性,从而降低细胞乙酰辅酶a的量。氟化消极调节atp酶的活性聚合的一种重要的酶氨基酸,从而抑制焊接过程中氨基酸肽和阻止DNA合成6]。长期暴露在Fl化合物诱导活性氧许多细胞特别是红细胞的变化所导致的伤害细胞功能(7]。

活性氧(ROS)生成的红细胞细胞新陈代谢和其他外生环境代理。他们是由一个过程称为氧化还原循环和由过渡金属催化,如铁²⁺和铜²⁺(8]。当人类和动物暴露在氟化物,他们经验增加活性氧的形成/ RNS,包括过氧化氢自由基(ROO),超氧化物自由基、单线态氧,羟基自由基通过芬顿(哦)。氟化物可以抑制脂质过氧化作用的抗氧化剂,提高红细胞通过活性氧的生产(9]。

血液是一个主要的组织参与氟的分布(10]。然而,Fl能力诱导红细胞(红血球)死亡,以及这一过程的分子机制,并没有得到充分的研究。两项研究描述了牛患有贫血的发展氟中毒(11)和小鼠暴露于亚致死的Fl剂量(12可能表明红细胞过早死亡。Susheela [13)报道,人体中毒与脂肪肝严重贫血由于膜变性引起的红细胞寿命短,把他们变成echinocytes。最近,接触氟化钠诱导的大鼠红细胞明显抑制影响的运输单价阳离子跨质膜与Na⁺- k⁺泵抑制和Ca²⁺端依赖K⁺损失(14]。

现有知识的有益作用保健品代表营养疗法产生了极大的影响和刺激研究有利的生物活性的性质compounds-enriched保健品。饮食的修改是一个关键的元素在血液学的异常的管理。多年来,多酚植物化学物质被认为通过清除自由基保护细胞免受氧化损伤。在所有多酚,EGCG受到最多的关注由于其广泛的生物属性。流行病学证据表明食用EGCG-rich绿茶可以预防某些慢性疾病在人类15,16,17]

儿茶素(EGCG)的一个主要儿茶素,从绿茶中提取,并与广泛的生理作用包括抗氧化活动,自由基清除、离子螯合和消炎作用18- - - - - -21]。从我们实验室最近的一项研究表明,EGCG展品王亚南活动对Fl诱导毒性。基于其亲脂性的性质和多种药理行动,我们假设的有利影响EGCG可以扩展到细胞内分数的红细胞,防止生产过剩的活性氧引起的病理改变Fl [22,23]。

因此,本研究旨在评估的治疗潜力EGCG对Fl诱导小鼠haematotoxicity补充。我们也试图证明其疗效的分子机制研究脂质过氧化、抗氧化酶和其他生化标记在血液的红细胞分数。

材料和方法

化学物质

EGCG (图1),氟化钠和calcein-AM从西格玛化工有限公司购买(圣路易斯,密苏里州,美国)。所有其他化学品和溶剂(冰醋酸、肝素、硝基蓝四唑氯、磷酸二氢钾,减少谷胱甘肽,磷酸二氢钠,氟化钠,trichloro乙酸,硫代巴比土酸、过氧化氢被购买)的认证分析品位和购买的精细化学品,时任孟买或嗨媒体实验室pvt Ltd .,孟买,印度。从跨度获得诊断试剂盒,孟买,印度。

动物

健康男性白化Wistar鼠(160 - 180 g)从中央得到动物的房子,实验医学,王侯Muthiah医学院和医院,Annamalai大学和维护在一个装有空调的房间(25±2°C) 12 h(光)- 12 h(黑暗)循环。食物和水是为所有的动物提供了随意。研究协议制度动物伦理委员会批准王侯Muthiah医学院和医院,Annamalainagar (Reg。160/1999号/ CPCSEA;建议952/2012号),实验设计进行按照当前伦理规范批准的社会法官和赋权,印度政府和机构动物伦理委员会,Annamalai大学Annamalai nagar,奇丹巴拉姆。

药物的选择和制备

剂量的氟化钠(25毫克/公斤/ BW)被选中的先前的报道Chinoy [24]。氟化钠溶解在胃内的生理盐水和管理日常的插管4周。EGCG粉末溶解在10%渐变80和口服,氟化钠的政府,前90分钟的剂量20、40、80(毫克/公斤/ BW)每天4周。一个试点研究有三个不同剂量(Thangapandiyan和Miltonprabu[25])的EGCG(20、40和80毫克/公斤/ BW)来确定剂量依赖对氟化物治疗大鼠的影响。经过4周的实验,观察到EGCG预处理剂20,40和80毫克/公斤显著(p < 0.05)降低氧化标记的水平,提高水平的酶和非酶的抗氧化剂在氟中毒大鼠。40毫克/公斤的EGCG显示显著的影响相比,20和80毫克/公斤。因此,我们选择的有效剂量40毫克/公斤EGCG对我们的研究。

实验设计

动物们被分成四组,每组6个动物和被给予口服治疗如下所述:

•我:标记为控制,只接收车辆

•第二组:标记为积极控制接收一剂40毫克/公斤/ BW EGCG

•第三组:标记为氟化钠控制接收25毫克/公斤/ BW的剂量

•第四组:标记为与EGCG预处理(40毫克/公斤/ BW)和氟化钠(25毫克/公斤/ BW)

所有的治疗都是口服胃内的插管。这项研究是28天的总时间。食物和水摄入定期记录。48小时后,政府最后的剂量,老鼠麻醉的肌内注射盐酸氯胺酮(25毫克/公斤)和牺牲宫颈斩首。收集血液样本为生化估计heparinised管和加工。获得的血液离心分离血浆和红细胞。拥挤的红细胞在冰冷的洗了三次磷酸盐(PBS-phosphate缓冲区0.01,pH值7.4,包含0.15 M氯化钠)和使用的。氧化压力参数确定,收集血液离心10分钟5000 rpm血浆分离。而红细胞与0.9%生理盐水洗了三次。褪色的红血球细胞溶解了dH2O (1:3, v / v)在0摄氏度30分钟。从溶解产物中提取的样本。 After extraction, samples were stored at -80oC before performing the appropriate analytical method.

生物化学分析

血液学的参数

红细胞计数(RBC),白细胞计数(WBC)估计利用Sysmex自动化血液学分析仪KX-21N, Kobe-Japan Sysmex公司。微分进行白细胞计数血液涂片染色与赖特的污渍。血红蛋白浓度,意味着微粒体积(MCV),意思是微粒血红蛋白(妇幼保健),意思是微粒血红蛋白浓度(MCHC),血小板计数和出血时间是由公爵的方法(26),凝血时间Sabrazes毛细管的方法(27]。

隔离红细胞和红细胞鬼膜

红细胞和他们的鬼魂膜由道奇et al。28和费尔班克斯等。29日用细微的修改。细胞用盐水洗净。包装细胞与三羟甲基氨基甲烷缓冲液洗,0.31 M, pH值7.4和用于生化估计。另一个包装单元是用于溶血增加低渗的5毫米磷酸盐缓冲剂(pH值8.0)的1毫米EDTA。4 - 6 h后,红细胞鬼魂的离心沉淀为45分钟12000转4 - 6◦C。hemolysate用于抗氧化试验。红血球膜颗粒悬浮在0.02 M三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH值7.2)和用于各种生化指标。蛋白质含量在红细胞膜是由洛瑞等。[30]。

估计红血球膜脂质过氧化作用

脂质过氧化反应的硫代巴比土酸活性物质测定的方法Esterbauer和Cheeseman31日)和蛋白质羰基含量测量方法所描述的雷茨尼克先生和封隔器32]。据Konings测量红细胞的共轭二亚乙基三胺(33]。

非酶的测定抗氧化剂

减少谷胱甘肽(GSH)含量估计根据布鲁斯的方法等。34),表示为μmoles / g Hb。总巯基组(TSH)测量与dithionitrobis苯甲酸反应后,使用方法Ellman [35]。维生素C和E浓度测定方法后Omaye et al。36]和德赛[37),分别。

测定酶的抗氧化剂

红细胞从第二管细胞溶解了4倍水稀释,紧随其后的是反复冻融循环。SOD (U / g Hb)活动估计根据Misra Fridovich,描述的方法(38]。猫(U / g Hb),活动是决定使用Aebi[描述的方法39),通过测量在240 nm过氧化氢分解。GPx (U / g Hb)活动是化验使用Flohe和Gunzler[描述的方法40),后续氧化的NADPH在240 nm t-butyl-hydroperoxide作为衬底。的值是血红蛋白的表达单位每克。GR活性在红细胞化验的方法Goldberg和斯普纳41]。红细胞的GR活性被表示为纳米NADPH氧化辅酶ii / g (Hb /分钟。Glutathione-S-transferase(销售税)衡量Buetler [42]。Glucose-6-phosphate脱氢酶(G6PD)活动是衡量使用工具包((R&D)跨诊断有限公司、印度)用于G6PD活性的快速定量测定血红蛋白含量的耦合同时评估相同的样本,表达导致单位/克血红蛋白(U / g Hb)。

膜结合酶的测定

Na⁺/ K⁺腺苷三磷酸酶测定评估在红血球膜制备方法奎格利和Gotterer [43]。Na⁺/ K⁺两个条件下的atp酶活性测定;在毫克²⁺,Na⁺/ K⁺(总腺苷三磷酸酶)其次Mg的存在²⁺,Na⁺/ K⁺和乌本苷。Na⁺/ K⁺腺苷三磷酸酶活性测定总腺苷三磷酸酶活动之间的区别和ouabain-insensitive atp酶的活动。公布的无机磷酸腺苷三磷酸酶的作用的估计方法,Fiske Subbarrow, (44]。Ca²⁺atp酶活性测定的方法Desaiah et al。45]。Mg²⁺腺苷三磷酸酶活性决定在1毫米EGTA(特别是螯合物²⁺离子)这是减去从总活动为了获得净Ca²⁺atp酶活性。

测定红细胞生存能力

使用calcein-AM鼠红细胞的可行性评估(钙黄绿素acetoxymethyl酯)根据Bratosin过程描述等。46钙黄绿素,荧光membrane-permeable染料,迅速进入可行的细胞,它由胞质酯酶转化成绿色荧光细胞的钙黄绿素保留完整的膜,但挤压死亡或受损的细胞。Calcein-AM准备10毫米原液在DMSO,整除和存储在-20ºC。股票的解决方案被孵化培养基稀释100μM每个实验之前工作的解决方案。控制和NaF-treated红血球的整除(100μl 1%比容)与5μM孵化calcein-AM 45分钟在黑暗中在37ºC。然后样本稀释1毫升的孵化中立即流式细胞术。流仪结果进行史诗XL血细胞计数器(贝克曼库尔特公司,沥青、钙、美国)使用系统II(3.0版)软件进行采集和分析。荧光通道FL-1是对数刻度。3 x 104个细胞的可行性分析在每一个实验。

测定红细胞膜的完整性

红细胞质膜的完整性是溶血试验确定。与氟化钠孵化后样本沉淀(3000转4ºC 5分钟)和上层的收集。细胞溶血测定在405 nm基于光度学的上层清液中血红蛋白(Hb)内容。红细胞的上层清液的吸收溶解在蒸馏水作为100%溶血。

统计分析

所有数据用SPSS / 10学生软件进行了分析。假设检验方法包括单向方差分析(方差分析)LSD紧随其后。平均数±标准差的数据表示为三个不同的实验和结果视为显著P < 0.05。统计上显著的差异比较如下:控制红细胞和红细胞⁺EGCG;红细胞⁺EGCG和红细胞⁺氟化钠;红细胞⁺氟化钠与红细胞⁺40毫克/公斤/ BW EGCG。

结果

EGCG对食物摄入、体重变化,和器官:体重比例控制和实验老鼠

Fl的影响以及EGCG对食物和水的摄入量,体重变化,和器官:体重比率(%)在正常实验动物了表1。在Fl-treated老鼠、水和颗粒消费显著(P < 0.05)降低,观察体重明显降低。EGCG的口服显示前显著增加(P < 0.05)体重比Fl-treated老鼠被发现。之间没有显著变化观察对照组和大鼠治疗EGCG的孤独。

EGCG对血液学的参数

EGCG对血液的影响参数研究控制和实验大鼠的血了表2。血液参数如出血时间(分钟),凝血时间(s),红细胞(每年),Hb (g / dL), MCV (fl)妇幼保健(pg)、MCHC (g / dL),(%),白细胞(千),淋巴细胞(%),中性粒细胞(%),检查。Fl接种小鼠表现出显著(p < 0.05)降低血液参数如红细胞、Hb,循环血小板、白细胞、淋巴细胞、中性粒细胞和相比,控制。EGCG的前口服显著(p < 0.05)提高这些改变参数,如更高的红细胞计数、白细胞、淋巴细胞、中性粒细胞和Fl相比单独治疗组。EGCG单独治疗大鼠还显示显著增加(p < 0.05)相比血液学的参数控制。

EGCG对红细胞膜脂质过氧化作用的影响

EGCG对红细胞膜的氧化应激标志物指标的控制和实验组动物被显示图。2。氧化应激标记的活动,如TBARS蛋白质羰基(PC)内容和共轭二亚乙基三胺(CD)被发现显著增加(P < 0.5)在Fl对待动物。前口服的EGCG被发现显著(P < 0.5)恢复脂质过氧化指标相比,控制动物。之间没有显著差异观察EGCG控制和车辆控制动物。

EGCG对氟的影响诱导红细胞非酶的抗氧化的变化

表3显示non-enzymatic抗氧化剂的水平即gh维生素C和E控制和实验老鼠。non-enzymatic抗氧化剂的水平即谷胱甘肽、维生素C、E显著(p < 0.05)降低大鼠红细胞对待Fl,相比对照组。枯竭的谷胱甘肽、维生素C和E显著(p < 0.05)恢复与EGCG pre-administration Fl醉老鼠。没有发现显著改善EGCG单独治疗大鼠相比,控制。

EGCG对氟的影响诱导红细胞酶抗氧化活性的变化

EGCG对红细胞酶活性的影响即SOD, CAT, GPx, GR、销售税和G6PD实验性大鼠控制和显示表4。有显著(p < 0.05)降低SOD的活动,猫,GPX, GR、销售税和G6PD Fl中毒大鼠相比,控制。前管理EGCG连同F显示显著(p < 0.05)有关的活动复苏SOD, CAT, GPX, GR、销售税和G6PD观察相比,Fl单独治疗老鼠。EGCG单独治疗大鼠显示显著(p < 0.05)增加这些酶抗氧化剂相比,控制的活动。

EGCG对红细胞的影响膜atp酶

图3显示的效果pre-administration EGCG对Fl中毒大鼠红细胞膜结合Na⁺/ K⁺atp酶、镁²⁺腺苷三磷酸酶和钙²⁺atp酶水平控制和实验老鼠。红血球膜结合atp酶的水平在治疗老鼠被发现显著性(p < 0.05)降低与对照组相比。Pre-administration EGCG和Fl明显增加(p < 0.05),红细胞的水平膜结合atp酶相比,Fl单独治疗组。EGCG单独治疗大鼠显示没有变化的膜结合atp酶相比,控制老鼠。

EGCG对氟的影响改变大鼠红细胞生存能力

图4显示的作用EGCG Fl-treated鼠红细胞的可行性控制和实验动物。与calcein-AM使用流式细胞仪分析,表明细胞酯酶活性显著(p < 0.05)降低红细胞Fl陶醉的老鼠相比,控制。水平显著增加(p < 0.05),红细胞酯酶活动后观察到EGCG管理相比,Fl单独治疗老鼠。没有改善红细胞酯酶的活动中发现EGCG单独治疗大鼠相比,控制。

EGCG对氟的影响改变了红细胞膜的完整性

EGCG对Fl的影响改变了膜的完整性控制和实验大鼠红细胞上显示图5。溶血显著增加(p < 0.05)降低膜完整性水平观察Fl陶醉的老鼠相比,控制。管理EGCG显著(p < 0.05)降低红细胞的溶血,增加膜完整性Fl相比单独治疗老鼠。没有明显溶血观察EGCG单独治疗大鼠红细胞。

讨论

氧化应激所描述的状态不受控制的生产过剩的自由基超过一个阈值适当的抗氧化中和正常细胞造成损害。氟化消费与生产相关的自由基可与多不饱和脂肪酸反应产生脂质氢过氧化物从而发起一个lipid-radical连锁反应导致氧化损伤细胞膜(47]。红细胞、角色和他们的倾向产生激进的物种,可能被认为是敏感和中间细胞氧化反应(48]。铁的存在一个强大的过渡金属催化剂使红细胞过氧化损伤[极为敏感48]。红细胞的膜是富含多不饱和脂肪酸,涉及自由基反应的一个主要目标,可能允许红细胞易受氧化损伤(49]。在不同指标用于识别一般健康状况,体重是老鼠的可见的指标之一。除了体重我们评估了食物和水的变化相对控制和实验大鼠4周期间,实验周期。减少体重增加和减少水和食物摄入量在Fl治疗大鼠在我们的研究中被发现。也被报道,Fl暴露大鼠显示减少水和食物的摄入与缺陷生长速度和改变organ-body重量(50]。观察形态学变化Fl醉老鼠显著减毒治疗EGCG(40毫克/公斤体重)显示的重要有效的恢复相比Fl治疗大鼠形态学变化。EGCG已经报道表现出强大的氢捐赠,抗氧化剂,和自由基清除属性,在体外系统和体内模型(51]。

血液参数可能是更快速和可检测压力变化和燃料在评估不同的健康状况52]。因此,在临床和实验血液学的参数在生命科学的研究在怎么强调都不为过。尤其是文献报道证明改变血液学的参数,从正常状态,可能作为疾病的有价值的指标,在不同的动物物种(或压力53]。在目前的研究中我们观察到F醉老鼠显示显著改变血液参数由于在生产的ROS按照报告Markovićet al。54]。其他数据从Sharma et al。55)也报道,Fl改变了女性白化大鼠血液学的参数。有趣的是,EGCG-treated Fl-intoxicated老鼠显示重大更新这些血液参数的恢复至接近正常水平。这恢复主要是由于EGCG的强抗氧化性质和其附近的三羟基结构的存在,氧原子作为电子给体的形成与亲电离子,从而帮助债券扣除的抗氧化防御系统56]。ROS介导的氧化应激的作用通过脂质过氧化Fl诱导细胞死亡,从而引起红细胞膜功能障碍[已经逐渐完善57]。MDA,终止自由基引起的脂质过氧化的产物,和它的内容可以反映红细胞的脂质过氧化水平促进降解膜的完整性和细胞生存能力58]。除了细胞脂质,研究表明,细胞蛋白也可能受到自由基积累的影响。蛋白质羰基衍生品是建议的形成是一个有用的氧化损伤蛋白(59]。蛋白质羰基衍生品可能导致氨基酸侧链的氧化改性和ROS-mediated肽乳沟。在我们的研究中,我们观察到的脂质过氧化水平,增加蛋白质羰基含量和红细胞共轭二亚乙基三胺膜治疗脂肪肝的老鼠。这些结果与以前的报告类似shivarajashankara和shivashankara [60]。管理EGCG显著降低脂质过氧化水平,共轭二亚乙基三胺和蛋白质羰基化反应在NaF-intoxicated老鼠,揭示EGCG的自由基清除能力。这可能是由于8羟基在4环的存在结构,很容易溶解在水中和修改成多因子的组件如硬脂、二十碳五烯,EGCG期间和二十二碳六烯酸的新陈代谢,已报告表现出增强的ROS清除活动,从而减少Fl-induced氧化应激(61年]。

本研究揭示了非酶的抗氧化剂的水平变化在红细胞膜对Fl中毒的反应。水平的减少谷胱甘肽(GSH)、维生素C和维生素E和Fl治疗显著降低。这些结果证实的发现Shanthakumari et al。57]发现非酶抗氧化剂的水平下降在Fl对红细胞。政府的EGCG Fl中毒大鼠显著增加的非酶的抗氧化水平比控制到正常水平。这是可能是由于羟基的存在在EGCG提高二期抗氧化酶水平和提供保护Fl诱导氧化应激。

等抗氧化酶SOD, CAT, GPx, GR、销售税和G6PD,被认为是第一行的细胞防御氧化应激介导的损伤。评估这些抗氧化酶是一个适当的间接方式评估prooxidant-antioxidant地位Fl-induced毒性。其中,SOD和CAT相互函数作为重要的酶消除活性氧和活性氮物种。SOD酶负责超氧化物自由基转化为更少的有害产品,如过氧化氢,而猫带来减少过氧化氢和保护组织的高活性羟基自由基(62年]。氟化钠中毒显著降低SOD和CAT的活动在我们的研究中,这是符合这一发现的蒙塔沃et al。63年在Fl-treated老鼠。Glutathione-related等酶GPx、GR和销售税函数直接或间接作为抗氧化剂。GPx使用谷胱甘肽的含硒酶在分解氢过氧化物无毒产品。在目前的研究中,Fl政府降低GPx的活动,GR,销售税红细胞的膜。布鲁斯et al。64年)报道,减少GPx水平和销售税的活动和枯竭的谷胱甘肽水平NaF-treated老鼠主要是由于活性氧的生产过剩,也就是按照这项研究的结果。SH-dependent酶GPX、销售税和GR,和他们的SH组由Fl-induced ROS生成灭活,导致酶失活。EGCG管理显著调节GPx的水平,销售税,GR通过还原谷胱甘肽水平和抵消产生的自由基Fl中毒。G6PD活性的降低Fl-intoxicated老鼠显示代NADPH受损,这是需要减少对谷胱甘肽(GSSG60]。EGCG政府Fl-intoxicated老鼠显示这些抗氧化系统的重要振兴回到正常水平附近由于抗氧化剂增加EGCG的性质(65年,66年,67年,68年]。

膜相关酶和atp酶活性下降已经被报道在许多病理条件(69年]。在目前的研究中,显著降低红细胞的膜结合atp酶的活动中观察到Fl-treated老鼠。减少钠的活动⁺/ K⁺腺苷三磷酸酶可能是由于自由基对F诱导脂质过氧化,增强自Na⁺/ K⁺腺苷三磷酸酶是sh为每组包含酶和脂质相关的。减少钠的活动⁺/ K⁺atp酶会导致减少钠排出,从而改变膜透性(70年]。膜的膜透性的破坏或碎片导致的泄漏²⁺离子进入细胞,从而更容易不可逆的细胞破坏。Ca²⁺过载药用Fl也减少了Ca²⁺在细胞膜atp酶活动。人们普遍认为由于对SH组、高亲和力Fl热切地绑定到各种酶蛋白,使其失去活性。毫克²⁺腺苷三磷酸酶活动参与其他能源要求过程在细胞和它的活动对脂质过氧化反应很敏感。管理EGCG在Fl中毒大鼠显著降低红细胞脂质过氧化水平和持续的膜结合酶的活动。这可能是由于EGCG的能力保护SH组通过抑制氧化损伤的膜脂质过氧化作用和稳定的膜。抑制红细胞生存能力可能与细胞的质膜破坏导致释放包括血红蛋白的蛋白质。这是间接地抑制红细胞细胞膜完整性(71年]。Fl-induced凋亡被许多报道证明显示与激活膜PKA - g和随后的刺激,PKC -酪氨酸激酶,PI-3-kinase-dependent信号通路可能会聚在MAP激酶(72年]。此外,Fl诱发明显的氧化应激,导致生成活性氧(ROS),过多的脂质过氧化作用和改变细胞内抗氧化酶的活动如过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶(73年]。在目前的勘探,红细胞明显减少的可行性和膜完整性在Fl醉老鼠由于生产ROS的协议与以前的报道称,阿et al。74年和蔡等。75年]。其他报告也认为,Fl破坏线粒体外膜触发细胞色素C的释放到胞质和激活一个内在(caspases-9和3-dependent)凋亡通路和破坏的红细胞76年]。管理EGCG显著恢复红细胞的膜完整性和提高生存能力Fl中毒大鼠由于其很强的氢捐赠抗氧化性质稳定细胞膜和维护红细胞膜的完整性和可行性。

结论

总之,Fl暴露诱发氧化应激在增加大鼠红细胞溶血、脂质过氧化反应,蛋白质氧化和减少膜结合atp酶的活动,酶和non-enzymatic抗氧化剂。口服的EGCG中和Fl诱导氧化应激大鼠红细胞膜可能通过降低脂质过氧化水平,蛋白质氧化,提高酶和非酶抗氧化剂的活动在红细胞膜。

引用

1. (世界卫生组织):贝利K, Chilton J,达E,列侬M,杰克逊P, Fawell, J . (Eds)。饮用水中氟化物。出版社,2006;瑞士。
2. 达V,博m .生理学和氟的毒性。印度J影响研究》2009;20:350 - 355。
3. Reddy地方性氟骨症的神经学博士。印度。2009;577 - 12所示。
4. Pawowska-Goral K, warda W, warda M,库萨z氟化合物对人体的影响。安专科医疗大雨如注。1998;35:105 - 115。
5. Blaszczyk,设计E, Kasperczyk s蛋氨酸的影响在老鼠的肝脏毒性的氟化物。跟踪Elem研究》杂志2011;139:325 - 331。
6. Hordyjewska,帕斯捷尔纳克k .氟对机体的影响的人。J Elementol。2004;9 (4),883 - 987。
7. 纳塔莉亚我Agalakova Gennadii卡。Fluoride-induced鼠红细胞体外的死亡。毒理学体外。2011;25日:1609 - 1618。
8. Dhan P,梵天NS, Garima抗氧化和自由基清除活性的酚类洋葱(洋葱)。食品化学,2007;102:1389 - 1393。
9. 巴比尔O, Arreola-Mendoza L,德尔Razo LM。氟化物毒性的分子机制。ChemBiol交互。2010;188:319 - 333。
10. 美国华福通用氟摄入和代谢。之影响研究》1994年;8:为5 - 14。
11. 希尔曼D, Bolenbaugh DL,传达EM。甲状腺功能减退和贫血相关在奶牛氟化物。J乳品科学。1979;62:416 - 423。
12. BhaskaraRao AV Vidyunmala s .累积老鼠MusNorvegicusalbinus氟化物对血液指标的影响。Am-Eur J ToxicolSci 2010;2:93 - 95。
13. Susheela正义与发展党。论文在氟中毒。氟中毒的研究和农村发展基金会印度。4 th Int。氟中毒防治研讨会Defluoridation水2001;三3。
14. Agalakova倪,古瑟夫几何级数不同效果的氟化钠⁺和K⁺在大鼠红细胞膜运输。氟化物。2008;41:28-39。
15. 赫科幻、赫SM Abolhasani F,穆贾达姆啊,伊斯拉米s Cytoprotective姜黄素对氟化钠的影响——在大鼠红细胞引起中毒。牛围住ContamToxicol .2012;88:486 - 490。
16. 梅塔,弗洛拉sj。可能的金属再分配的作用,肝毒性和氧化应激在螯合剂诱发肝和肾老鼠体内金属硫蛋白。食物ChemToxicol 2001;39:1029 - 1038。
17. 孵卵器H, Planalp R,曹J,托提调频,托提SV。姜黄素:从古代医学目前的临床试验。细胞摩尔生命科学。2008;65:1631 - 1652。
18. 朱N,唱的年代,黄TC,白N,杨CS, CT。绿茶儿茶素的抗氧化化学:氧化的产物(-)-epigallocatechingallate与过氧化物酶和(-)-儿茶素。J食品油脂。2000;7:275 - 282。
19. 近藤K、M,栗原君Miyata N,铃木T,丰田章男M(-)的清除机制-epigallocatechingallate和(-)-epicatechingallate过氧化氢自由基和过氧化物的形成抑制作用。地中海自由RadicBiol .1999;27:855 - 863。
20. 纳瓦罗再保险,Santacruz H,井上m .络合epigallocatechingallate(绿茶提取物egcg)锰²⁺:顺磁离子核自旋弛豫。J InorgBiochem 2005;99:584 - 588。
21. 惠勒DS,惠勒WJ。茶的药用化学。药物开发研究》2004年;61:45 - 65。
22. 斯文w .绿茶和EGCG对心血管和代谢的影响健康。J CollNutr。2007;26(4):373 - 388年代。
23. Thangapandiyan年代,Miltonprabu S体内和体外的抗氧化特性研究epigallocatechingallate在氟化钠诱导大鼠毒性。Int J Phytopharmacol。2013;4 (4):245 - 254。
24. Chinoy,新泽西。氟化钠对生理的影响的动物和人类。印度J围住Toxicol。1991;1:17-32。
25. Thangapandiyan年代,Miltonprabu S Epigallocatechingallate有效改善氟化诱导氧化应激,DNA损伤大鼠的肝脏。J PhysiolPharmacol。2013;91:528 - 537。
26. (公爵w .血小板出血性疾病的关系。描述的方法确定出血时间和凝固时间和报告3例出血性疾病缓解的输血。《美国医学协会杂志》上。1910;55岁:1185。
27. 科氏是的,不过f .批准实验室技术。4。N。Y:阿普尔顿- Century-Crofts, Inc .) 1945年;p。99。
28. 道奇JT,米切尔C, Hanahan DJ。的制备和化学特征hemoglobin-free鬼魂的人类红细胞。学生物化学拱Biophys.1963;100:119 - 30。
29. 费尔班克斯G, Steck TL,瓦拉赫DF。电泳分析主要的多肽人类红细胞的膜。物化学,1971;10:2606-17。
30. 洛瑞哦,Rosebrough新泽西,Farr,兰德尔RJ。蛋白质测量folin-phenol试剂。J生物化学杂志。1951;193:265 - 76。
31. Esterbauer H, Cheeseman KH。测定aldehydic脂质过氧化反应产品:malonaldehyde 4-hydroxynonenal。方法Enzymol 1990;186:407 - 421。
32. Reznick AZ,封隔器l .蛋白质氧化损伤:羰基光谱光度测量的方法测定。方法Enzymol。1994;233:357 - 363。
33. Konings AWT。脂质过氧化脂质体。编辑:Gregoriadis G。脂质体技术。波卡拉顿,FL: CRC出版社1984;139 - 61。
34. 布鲁斯E Dixon O,凯利BM。改进的方法测定血谷胱甘肽。J实验室医学。1963;61:882 - 890。
35. Ellman GL。组织含巯基的组。拱BiochemBiophys。1959;82:70 - 77。
36. Omaye圣、Turbull TD Sauberlich HC。选择方法测定抗坏血酸在动物细胞,组织和体液。在酶学方法。编辑D.B. cooper McCormic D.L.赖特。纽约大学出版社。1979;3-11页。
37. 德赛ID。维生素E对动物组织分析方法。方法Enzymol。1984;105:138 - 143。
38. Misra惠普,Fridovich即超氧化物阴离子的作用在肾上腺素的自动氧化作用和超氧化物歧化酶的简单分析。J生物化学杂志。1972;247:3170-5。
39. Aebi h .过氧化氢酶体外。方法Enzymol (Bergneyer胡).1984;105:121-6。
40. Flohe L, Gunzler佤邦。谷胱甘肽过氧化物酶的化验。方法Enzymol。1984;105:114 - 121。
41. 斯普纳RJ Goldberg DM。谷胱甘肽还原酶。胡锦涛:Bergmayer编辑器。酶分析的方法。VerlagChemieDearfield海滩1983:258 - 65。
42. Buetler k .红细胞新陈代谢生化方法的手册。第三版。奥兰多:Stratton 1984;
43. 奎格利JP, Gotterer GS。Na的分布⁺K⁺在大鼠肠道粘膜刺激腺苷三磷酸酶活动。BiochemBiophysActa。1969;173:456 - 468。
44. Fiske CH, Subbarrow y磷的比色测定。生物。化学.1925;66:375 - 381。
45. Desaiah D,柴提CS,饶KS。十氯酮抑制钙调蛋白激活钙atp酶在大鼠大脑突触体。J Toxicol环境健康。1985;16:189 - 195。
46. Bratosin D, L Mitrofan Palii C, Estaquier J, Montreui, J .小说荧光测定使用calcein-AM测定人类红细胞生存能力和衰老。血细胞计数.2005;66:78 - 84。
47. Chinoy新泽西。氟化压力抗氧化防御系统。氟化物。2003;36:138 - 141。
48. 佐藤Y,金泽年代,佐藤K,铃木Y自由基诱导人类红细胞的溶血机制:II。脂溶性溶血的激进的引发剂。生物制药小羊。1998;21:250 - 256。
49. 克莱门斯先生,沃勒高清。在红细胞脂质过氧化作用。化学。理论物理。脂质。1987;45岁,251 - 268。
50. 程毛雷尔M, M,两B, et al。两年致癌性研究氟化钠的老鼠。J Nat癌症杂志。1990;82:1118 - 1126。
51. Devika PT,王子SM。(−)儿茶素(EGCG)防止isoproterenol-induced线粒体损伤的心脏毒性白化Wistar鼠:透射电子显微镜和体外研究。杂志Res 2008;57:351 - 357。
52. Hymavathi V,饶LM。亚致死浓度的铅对channapunctatus的血液学的生化成分。牛纯应用科学。2000;19日:1 - 5。
53. Uhoh铁、Etengμ,Ebong PE、Umoh IB。维生素A和E反向汽油蒸汽诱导雌性老鼠hematotoxicity和减肥。ToxicolInd健康。2010;26:559 - 556。
54. MarkovićSD, DjačićDS、CvetkovićDM Obradović广告,ŽižićJB, OgnjanovićBI,Štajn。影响急性体内顺铂和硒治疗血液红细胞和氧化压力参数的老鼠。医学杂志。跟踪Elem杂志2011;142 (3):660 - 70
55. Sharma JD, Solanki M,女性的生殖器官上Solanki d .氟化钠毒性白化病老鼠。亚洲J科学实验2007;21 (2):359 - 364。
56. (西格顿合资,弗雷b茶儿茶素和茶多酚:健康影响,metaboloism,和抗氧化功能。暴击。启SciNutr食物。2003;43 (1):89 - 143。
57. Shanthakumari D, Srinivasalu年代,萨勃拉曼尼亚美国氟中毒对脂质过氧化和抗氧化状态的影响在实验老鼠。Toxicol。2004;204:219 - 228。
58. 裴,军人,Zi-gui张。硒和氟化物对血液的影响大鼠的抗氧化能力。ExpToxicolPathol。2012;64:565 - 568。
59. Muthumani M,弥尔顿Prabu s Silibinin潜在保护砷诱导氧化在大鼠肝脏功能障碍。ToxicolMech方法。2012;22:277 - 288。
60. Shivarajashankara YM, Shivashankara AR。Lipidperoxidation和血液中的抗氧化剂systemns年轻的老鼠受到chroninc氟化物毒性。印度J实验医学杂志。2003;41:857 - 860。
61. 钟Y, Shahidi f . Lipophilizedepigallocatechingallate (EGCG)衍生品作为新型抗氧化剂。J阿格利司食品化学。2011;59:6526 - 6533。
62. Brioukhanov, Netrusov。过氧化氢酶和超氧化物歧化酶;细胞的分布、属性和生理作用严格厌氧菌。物化学,2004;69:949 - 962。
63. 蒙塔沃GH、Reyes-Perez LM Razo d接触氟化物通过降低胰岛素表达和氧化应激损害葡萄糖耐量。Toxicol。2009;263:75 - 83。
64. 布鲁斯,弗里曼D, James c .生物学疾病;自由基和组织损伤。实验室投资。1082;47:412 - 426。
65. 朱N,唱的年代,黄TC,白N,杨C年代,CT。绿茶儿茶素的抗氧化化学:氧化的产物(-)-epigallocatechingallate与过氧化物酶和(-)-儿茶素。J食品油脂。2000;7:275 - 282。
66. 近藤K、M,栗原君Miyata N,铃木T,丰田章男M(-)的清除机制-epigallocatechingallate和(-)-epicatechingallate过氧化氢自由基和过氧化物的形成抑制作用。免费RadicBiol医学。1999;27日:855 - 863。
67. 井上MB,井上M。,费尔南多Q。Valcic S。,Timmermann BN. Potentiometric and (1)H NMR studies of complexation of Al(3⁺)和(-)-epigallocatechingallate,绿茶的主要活性组分。J InorgBiochem。2002;88:7 - 13。
68. 惠勒DS。,Wheeler WJ.The medicinal chemistry of tea. Drug Dev Res. 2004; 61: 45–65.
69. Kempaiah RK, Srinivasan k .姜黄素的保护作用,辣椒和大蒜在高脂肪喂养大鼠红细胞的完整性。J NutrBiochem。2006;17:471 - 478。
70. Devi CS Ithayarasi美联社。(1997)α-生育酚对脂质过氧化的影响在异丙肾上腺素诱导大鼠心肌梗死。印度J PhysiolPharmacol。1997;41:369 - 376。
71. Nandhakumar R。,Nirmal Kumar K., Niranjali DS. Protective role of morin on the attenuation of chemotherapeutic agent, 5-fluorouracil, induced biochemical alterations in erythrocyte membrane – an in vivo animal study. Biomed PrevNutr. 2012; 3:19–25.
72. Karube H。,Nishitai G., Inageda K., Kurosu H., Matsuoka M. NaF activates APKs and induces apoptosis in odontoblast-like cells. J Dent Res. 2009; 88: 461– 465.
73. 王古银。,李XL。,Yang ZQ., Xu M. Fluoride-induced apoptosis and lipid peroxidation in human hair follicles in vitro. Biol. Trace Elem Res. 2010; 137: 280– 288.
74. 阿CD,菅野。,Hirano S. Oxidative damage to mitochondria is a preliminary step to caspase-3 activation in fluoride-induced apoptosis in HL-60 cells. Free RadicBiol Med. 2010; 1: 367–373.
75. 蔡CL,林JW,郭港元,吴大MH、吴YC, Shyr CR、电脑。带酸味的诱导兔口腔黏膜细胞凋亡的1.23%磷酸凝胶。拱Toxicol。2008;82:81 - 87。
76. 李JH,荣格司法院、宋YJ公园JH,杨KH,崔NK,金正日SH WJ。参与线粒体和死亡receptor-dependent凋亡通路由bcl - 2家族在钠fluoride-induced人牙龈成纤维细胞的细胞凋亡。Toxicol。2008;243:340 - 347。