研究和评论:植物科学杂雷竞技苹果下载志》上
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+ 1-845-458-6882卡洛斯Tamayo-Urbina1维克多Guerrero-Prieto2*,塞萨尔Guigon-Lopez3弗朗西斯科Vargas-Albores4大卫·Berlanga-Reyes5,卡洛斯Acosta-Muniz5和大马哩Ojeda-Barrios2
1前研究生Centro de Investigacion en Alimentacion y Desarrollo,交流,失去Cuauhtemoc, Av。力拓Conchos的那类矿难s / n,当时)工业、Apdo。781年邮政,Cuauhtemoc池玉兰C.P. 31570年,墨西哥
2学院科学、自治大学的吉娃娃,校园Cuauhtemoc池玉兰。摘要Cuauhtemoc Av。友谊2015年,直。C.P. 31510年,墨西哥
3自然资源研究中心、9月DGETA Salaices池玉兰。墨西哥
4食品研究与开发中心,交流,单位埃莫西约。0.6公里道路胜利。,Apdo。邮政1735埃莫西约,墨西哥的索诺拉
5食品研究与开发中心,交流,Unit Cuauhtemoc, Av. Rio Conchos s / n, Industrial Park, Apdo. Postal 781, Cuauhtemoc, Chih, C.P. 31570, Mexico
收到日期:24/12/2015接受日期:15/03/2016发表日期:17/03/2016
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念珠菌oleophila原本孤立的地区从苹果果皮Cuauhtemoc,吉娃娃,墨西哥,和利用exo-β-1 3-glucanase生产的模式对青霉菌expansum在采后苹果。β-1,3 -葡聚糖酶活动生成的c . oleophila minimal-salt媒介使用葡萄糖,海带多糖或细胞壁碎片p . expansum作为唯一碳源。最高β-1 3-glucanase活动(249 U / L)获得了48小时后孵化只使用葡萄糖。β-1,3-Glucanase是从生长培养基纯化用DEAE阴离子交换色谱法琼脂糖,增加β-1的具体活动,3-Glucanase 74倍,而超滤后的粗提物。sds - page显示纯化β-1,估计3 -葡聚糖酶的分子量48.3 kDa。纯化酶水解海带多糖对葡萄糖作为最终产品,确定本地聚丙烯酰胺凝胶作为单体的蛋白质。最佳活动发生在5和pH值在40°C,和酶稳定在30°C 1小时。纯化exo-β-1 3-glucanase,当挑战与p expansum分生孢子,分生孢子的萌发和菌丝的生长减少到51.8%到31%。结果表明,c模式的行动之一oleophila控制p expansum生产β-1,3-glucanase,纯化
细胞壁降解酶,用于采收后的真菌疾病,疾病控制。
采后果实的发展生物防治剂用于近年来被认为是一种合成化工产品的使用(1,2]。经济损失的程度因水果采后病原体损伤取决于国家和发展中国家可以达到50% (3]。控制这些采后病原菌最常见的方法是用化学合成杀菌剂,也代表了人类和生态系统的风险。有报道称来自世界各地的微生物,如酵母、细菌和真菌,有能力控制采后真菌的水果(4- - - - - -7]。此外,基于商业生物产品c . oleophila已经开发出来,比如BioNext(比利时)和Lesaffre国际(法国)和其他产品8,9]。这些微生物被报道为能够控制采后的真菌,如青霉菌expansum,他们使用,单独或组合,通过几个模式的行动,如营养和空间竞争,电阻感应,抗菌和裂解酶生产,能够降低致病真菌的细胞壁(1]。酶,如β-1 3-glucanases现在被认为是一个重要组成部分在采后致病真菌的生物防除[1,7,10- - - - - -12]。
c . oleophila是一种附生植物的酵母,是孤立的“金色美味”从Cuauhtemoc果皮,池玉兰。、墨西哥(13]。这种酵母显示行动在控制的几种主要模式p . expansum和b .灰质采后苹果水果(5,14]。
在这部作品中,隔离,表征和净化exo-β-1,3-glucanase所产生的c . oleophilaL-06应变进行以评估酶作为生物防治剂对青霉菌expansum采后苹果果实。
微生物和文化条件
c . oleophila分离得到的“温带微生物”从CIAD集合,a·c·失去Cuauhtemoc,池玉兰。墨西哥。隔离储存在-80°C。的c . oleophilaL-06被选为这个工作因为它的更高层次的β-1,3-glucanase生产。72 h NYDA L-06生长(15 g / L琼脂,8 g / L营养肉汤,和5 g / L酵母提取物和10 g / L葡萄糖)。的p . expansum实验中使用的应变从俄勒冈州立大学获得哥伦比亚农业研究站,中期罩河,俄勒冈州,美国。在使用之前,p . expansum生长在苹果果实,然后保存在PDA(土豆、葡萄糖、琼脂)在4°C和增长25°C一周在同一介质琼脂(PD)。
提取p . expansum细胞壁
对于这个过程,Bar-Shimon的方法论等人之后(15]。一毫升的p . expansum分生孢子的悬浮细胞(2×106 /毫升)接种到一个L PD肉汤和增长了六天25°C 155 rpm的速度不断颤抖。产生的菌丝p . expansum收集过滤用绘画纸1号纸,然后用无菌水冲洗三次,其中包括同质化两分钟(25 T基本ULTRA-TURRAX®, IKA®,里奥哈葡萄酒,西班牙)。细胞壁样本被冻结在-20°C 8 h,然后再解冻和均质如前所述,直到沉淀完全溶解。大约20毫升的均质菌丝被储存在4°C 10 - 15分钟。这些样本离心机(美国贝克曼GS-15R、拉姆齐、MI) 1625×g两分钟,上层清液被丢弃,沉淀悬浮在水和离心机六个额外的时间,直到一个透明的上层清液。上层清液冻干48 h,直到使用存储在-20°C。
的增长c . oleophilaL-06
的L-06起动文化c . oleophila准备在50毫升NYB(营养肉汤、酵母提取物、肉汤)介质,当时接种成200毫升相同的介质,然后孵化(美国精密科学模型31534)100 h在30°C用颤抖的在165 rpm。L-06浓度调整到4×103生/毫升(悬浊液准备使用血细胞计数器)和一个初始光密度(OD) 0.001 (A500)(分光光度计瓦里安紫外可见卡里1 e,美国)。每小时一毫升整除无菌画在100小时的潜伏期确定OD。集落形成单位(CFU)确定每三个小时在L-06隔离增长阶段使用培养皿指望NYDA稀释的解决方案。的cfu Log10转换辨认指数增长阶段。
β-1 3-Glucanase活动在不同的基质
获得更多的L-06细胞和酶活性更高,酵母生长NYB指数期的结束。酵母细胞在4000×g离心,然后转移到一个最低盐介质(MSM), 2.5 g / L硫胺素,0.8 g / L尿素,2.06 g / L NH4没有3,0.5 g / L MgSO4,1 g / L KH2阿宝4,0.01 mg / L FeSO4,8.7 mg / L ZnSO43 mg / L MnSO4和2毫克/ mLcontainingp . expansum细胞壁碎片,海带多糖或葡萄糖为唯一碳源)获得最大数量的酶活性。酶活性测定在200毫升的二甲基砜溶液在24日,48岁,72年、96年和120年在30°C和h(孵化摇晃在165 rpm。β-1,3-glucanase生产。获得酶法提取,Bar-Shimon的方法论等人之后(15]。5毫升MSM整除被吸引在24、48、72、96和120 h的孵化和离心机在6136×g删除酵母细胞。上层清液过滤使用0.2μm微孔过滤器和当时用于酶试验。沉淀在蒸馏水洗两次,resuspended 2毫升蒸馏水来衡量生物质在600海里。沉淀脱水在37°C到恒重获得在几天酵母干重。β-1 3-glucanase化验。确定β-1,3-glucanase酶法提取的活动,使役动词的过程等。2000年之后,和活动为每个孵化时间点确定。试验解决方案包含62.5μL酶法提取+ 62.5μL 0.5%的海带多糖(海带多糖溶解在50 mM, pH值5.0醋酸缓冲),和反应是停在20,80和100分钟的孵化40°C。停止反应在每一个时间点,125μL二硝基水杨酸(σ,d0550 - 100 g,由混合300毫升4.5%的氢氧化钠与含有8.8克的880毫升的解决方案3,5-dinitrosalicylic酸和255克双酒石酸钠和钾)被添加到每个解决方案。解决方案是在100°C水浴孵化五分钟,用分光光度计测定吸光度(标Bio-Rad 550)在490海里。 Absorbance readings for each time point of the enzymatic kinetic study were transformed to g/L of glucose using the regression equation Y=0.322x + 0.009 (R2= 0.994)。葡萄糖浓度转换为单位/ L的生长介质池葡萄糖浓度在每个不同时期的酶动力学研究中,生成方程代表了总葡萄糖浓度,mg / mL / min,每个酶动力学时间点,然后转化为单位转换为微摩尔/分钟* L = U / L。
血清总蛋白测定
布拉德福德,1976过程被用来确定每个样本的总蛋白质含量。25μL每个样本和200μL布拉德福德试剂(1 x)和孵化五分钟在室温下。吸光度测量在595海里,然后使用回归方程转化为μg / L x Y = 0.0049 + 0.0057 (R2 = 0.991)基于牛血清白蛋白。
β-1、3-Glucanase净化
净化β-1 3-Glucanase。由超滤酶纯化是由集中样本(Amicon过滤膜10 kDa,σZ706345-8EA,美国)和离心4000 g×15分钟后跟diethylaminoethyl琼脂糖(DEAE阴离子交换色谱法)。超滤器酶提取应用于DEAE琼脂糖快流(σ)列,这是平衡与五列卷,230毫升,20毫米三羟甲基氨基甲烷盐酸,液pH值8.0。列是筛选了氯化钠梯度(0.2,0.3,0.4米)在20毫米三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液,pH值8.0,500μL /分钟的流量。收集3毫升分数和总蛋白质含量和β-1 3-glucanase测定特定的活动。酶的纯度由SDSPAGE变性和减少条件下决定。聚丙烯酰胺凝胶是准备使用10%聚丙烯酰胺和4%的混合物bis-acrylamide解决方案。电泳是由100毫伏(mV)在室温下为1.5 h。迁移后的样本AgNO染色3解决方案。本地页面程序进行,通过使用一个不连续系统20 mA为1.5 h在室温下,用2毫克/毫升分离器的海带多糖凝胶。经过电泳,凝胶在40°C孵化1 h 200毫升的50毫米醋酸钠缓冲,pH值5.0。凝胶浸泡在0.005%苯胺蓝在150毫米磷酸钾,pH值8.6,15分钟。乐队紫外光照下观察(紫外线反式照明高性能290年柯达eda,美国)。
表征β-1 3-Glucanase
的最佳pH值、温度和热稳定性测定如下。一个50毫米醋酸钠缓冲被用来确定酶的最佳pH值。pH值范围从5到8进行测试。混合物包含62.5μL纯化β-1,3 -葡聚糖酶解和62.5μL 0.5%的海带多糖是孵化90分钟40°C为每个不同的pH值测试。相对活动的最大酶活性被认为是100%。几个温度评估β-1 3-glucanase。50毫米醋酸钠缓冲被用来确定最佳温度和所确定的最佳pH值是用于这些试验。混合物包含62.5μL纯化β-1,3-Glucanase解决方案和62.5μL 0.5%的海带多糖是孵化为1.5 h(0) 4、10、20、30、40和50°C。观察到的最大酶活性相对活动被认为是100%。确定酶的热稳定性,62.5μL纯化β-1,3-glucanase曾孵化出了30岁,40岁,50岁,60岁,70年、80年和90°C在50毫米醋酸钠缓冲60分钟的最佳pH值,得到酶在之前的试验。 After this step, 62.5 μL 0.5% of laminarin was added to the previously incubated solutions before initiating a new incubation period at the optimal temperature. The maximum enzymatic activity was considered 100% relative activity.
β-1、3-Glucanase效果p . expansum分生孢子的萌发和菌丝的生长
不同量的纯化β-1 3-glucanase, 1.9, 3.75和7.5 U /毫克,与300年被孵化p . expansum分生孢子在ELISA (ELISA标)板48小时27°C。此外,负面的控制包括由β-1,3 -葡聚糖酶灭活的加热在100°C五分钟,和积极的控制,a .尼日尔(σ49101,美国)β-1 3 -葡聚糖酶,也包括在内。在孵化后,p . expansum分生孢子的萌发是评估通过计算那些已经发芽。最大的分生孢子的萌发被认为是相对活动的100%。与此同时,p . expansum七天生长在PDA 27°C。然后,琼脂包含0.5平方毫米的菌丝被再次接种在PDA为1.9,3.75和7.5 U /毫克的纯化β-1 3-glucanase和孵化120 h为27°C。此外,包括消极的控制,包括β-1 3-glucanase灭活通过加热在100°C五分钟,和积极的控制、a .尼日尔β-1 3 -葡聚糖酶,也包括在内。在孵化后,p . expansum菌丝体生长评估。最大的菌丝体生长被认为是相对活动的100%。
统计分析
每个实验重复三次。当结果百分比时,他们改变了ArcSen和方差分析分析应用。使用三个复制统计设计完全是随机的。比较意味着使用图基进行测试(α= 0.05)。SAS统计分析系统,8.0,卡里,数控、美国)的窗口。
的增长c . oleophilaL-06
的生长曲线c . oleophilaL-06所示(图1)的光学密度(OD)值相当于5 X 105 CFU /毫升100 h孵化30°C。Log10转换CFU /毫升时,有一个线性响应,这表明一个指数对酵母细胞生长速率。结果也证明一个指数阶段跨越到27 h。Bar-Shimon et al .,报道类似的增长曲线c . oleophila。因此,最大限度的增长发生在NYB 27 h,并且每个生命周期(一代)酵母持续了2.6 h。马迪根et al .,建议在增长的最高点,酵母细胞的酶机械完成,因此能够产生更大数量的酶。基于这些结果,c . oleophila孕育了L-06 27 h (16]。酵母细胞被分开NYB介质通过离心,然后转移到男男同性恋者为了进行以下实验。
图1所示。c . oleophilaL-06 NYB介质中生长曲线。(摇165 rpm, 30°C, 100 h),箭头表示增长的最高点。
在不同的基质β-1 3-Glucanase生产
β-1最高,3-glucanase特定活动获得了48小时的孵化和1.7 U /毫克蛋白(图2一个)。这些结果证实酶活性的最高水平c . oleophilaL-06期间发生的最大增长,正如已经提到的,马迪根et al。16]。这一时期后,酶活性急剧减少。酶特定的活动减少高达0.04 U / mg在潜伏期。不同酶活性(P < 0.01),葡萄糖,海带多糖p . expansum细胞壁是单独使用作为唯一碳源。(图2一个)显示酶活性之间的关系(U / L)和时间(h)的碳源也有显著的影响(P < 0.01。最大数量的观察酶活性与葡萄糖,48 h后249 U / L(图基p < 0.05),其次是海带多糖,在233 U / L。这段时间后酶活性下降,但一些酶活性直到孵化的结束。酶活性的最低数量,173.9 U在72 h / L,生产使用p . expansum细胞壁。微生物对碳源的反应是可变的(马丁等)。一些微生物,如木霉属harzianum和木霉属asperellum,产生高水平的β-1,3-glucanase生长培养基含有真菌细胞壁巴拉et al。17]。其他人,如粗糙脉孢菌和木霉,产生低或没有活动在中含有葡萄糖。在这工作,c . oleophilaL-06产生了更高层次的β-1,与葡萄糖比PeCW 3-glucanase,类似于酿酒酵母生长介质时补充葡萄糖。葡萄糖和海带多糖建议的结果c . oleophilaL-06需要葡萄糖产生高水平的β-1,3-glucanase活动Bar-Shimon et al .,然而,在特定的时间在潜伏期,3-glucanase活动的高葡萄糖水平抑制β-1反馈抑制Wisniewski et al。15,18,19]。(图2 b)展示了干重之间的关系和时间和酶特定的活动和时间。
图2。c . oleophilaβ-1 3-glucanase活动。(一)β-1 3-Glucanase活动使用不同的碳源。(B)生物量之间的关系和β-1 3-glucanase特定活动使用葡萄糖为唯一碳源。
β-1、3-Glucanase净化
Non-gel附加筛选了样本β-1,3-glucanase特定活动高峰时水解海带多糖形成葡萄糖为唯一的产品。Gel-attached筛选了样品有两个具体的活动高峰,高峰b (a), 49岁的相应分数和峰值c (b),对应分数62 (图3)。特定的酶活性与分数最高的峰值c,这是超滤器以后获得更大的酶浓度表征和使用成生物药物p . expansum。峰b有一个特定的活动类似于葡糖苷酶和可能是由于存在β-1,3-glucanase低特定活动的彭et al ., (20.]。在色谱过程的结束时,其他蛋白质筛选了使用0.4 M氯化钠溶液。这些蛋白质并没有显示β-1 3-glucanase特定活动。有十亚型或β-1同功酶,从t . harzianum 3-glucanase报道,其中7人被2%葡萄糖抑制20.]。三支顶孢属persicinum exo-β-1,3-glucanases表达不同的基因,其中GNI GNII,有相同的氨基酸序列;这些酶显示差异相比,第三β-1 3-glucanase (GNIII)。进一步分析有关这些酶的规定表明,他们可能也有不同的功能。β-1 3-glucanase孤立的c . oleophilaL-06净化74倍与总蛋白相比,与一个特定的酶活性为15.5 U /毫克,表明蛋白质纯化约~ 74倍。酶回收率大于20%相比,粗提物(表1)。由于酶恢复小分数,有必要额外10次净化提取。
| 净化过程 | 总量(毫升) | 总蛋白(毫克/升) | 总活动(U) * | 具体活动(U /毫克) | 净化程度(的时候) | 收益率 (%) |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 粗提物 | 1000年 | 1380.4 | 288.7 | 0.21 | 1 | One hundred. |
| 超滤 | 20. | 740.9 | 233.7 | 0.32 | 1.5 | 81年 |
| DEAE琼脂糖 | 4 | 4.2 | 65.5 | 15.5 | 74年 | 22.7 |
*单位(U),大量的酶,这种酶催化1µMol葡萄糖/分钟的转换。
表1。净化过程β-1,3-glucanase L-06 oleophila隔离。
图3。阴离子交换色谱法的超滤器的生长介质提取c oleophila用DEAE琼脂糖快速流动。列筛选了0 - 0.4 M氯化钠梯度。每个分数3毫升。
纯化β-1的分子量和纯度,3-glucanase测定使用分数62,由于其最高比活度(DEAE琼脂糖)。(图4一)展示了一种蛋白质带的相对质量48.3 kDa,对应于β-1,3 -葡聚糖酶的c . oleophilaL-06。彭β-1相似,3-glucanases被报道为酵母et al ., (47.5 kDa)。(图4 b)显示β-1 3-glucanase活动电泳分析了本地页面时都超滤器粗提取液(1)和β-1 3 -葡聚糖酶从DEAE琼脂糖(3)。海带多糖(2毫克/毫升)作为底物在凝胶电泳,允许识别溶解区,对应于β-1 3-glucanase活动,这里表示为黑暗的乐队。只有一个乐队的观察观察粗提取液,DEAE琼脂糖,在两种类型的电泳,变性/减少和本地条件,表明β-1,3-glucanase获得的c . oleophilaL-06是单体的,分子量48.3 kDa。这些结果与报道的协议Bar-Shimon et al。15]。
图4。电泳分析β-1,从c . oleophila 3-glucanase。(一)变性凝胶(10%)和减少页面。这种凝胶银染成了红色。1、分子量标记:磷酸化酶b (97.4 kDa),牛血清白蛋白(66.2 kDa),卵清蛋白(45 kDa)、碳酸酐酶(31 kDa)和胰蛋白酶抑制剂(21.5 kDa)。2,粗提物c oleophila生长介质(6μg /毫升)。3,筛选了β-1,3 -葡聚糖酶(2μg /毫升),估计48.3 kDa的分子量。(B)本地页面电泳凝胶(10%)。1,c . oleophila(6μg /毫升)粗提物生长介质。2,筛选了β-1 3-glucanase (0.4 U /毫升),灭活在100°C沸腾5分钟。3,筛选了β-1,3-glucanase (0.4 U /毫升)的酶活性(凝胶由黑带)表示。
描述的c . oleophilaL-06 Exo-β-1,3-Glucanase
pH值:酶活性出席所有pH值评估,除了pH值3.0 (图5 b)。的lack of activity at this low pH could be due to degradation or to modification of the active site due to the low pH [21]。确定最佳pH值是5.0,酶的特定活动13.2 U /毫克(100%相对活动)和pH值4.0和6.0之间的相对活性高于80%。损失超过50%的相对活动观察在pH值为7.0和8.0。有显著(α= 0.05)差异β-1 pH值评估,3-glucanase生产。这项工作的结果是类似于大多数β-1 3-glucanases从不同的微生物22,23]。
图5。温度和pH值的影响(A) (B)在β-1 3-glucanase特定活动。最高的特定活动,13.2 U / mg和11.2 U /毫克,pH值和温度的最适条件,相对活动,分别对应于100%。β-1 3-Glucanase热稳定性(C),酶是孵化为一个h在不同的温度下,确定具体的活动。最高的特定活动,8.9 U /毫克,相当于100%相对活动。每个实验进行了三次。
温度:有特定的活动在所有温度下评估,除了在0°C (图5一个)。酶的最适温度为40°C,具有特定的活动11.2 U /毫克。还有一个特定活动的90% 50°C。有显著(α= 0.05)差异治疗评估。低温,如4°C,降低的具体活动40%;在0°C,没有特定的活动。
热稳定性:温度范围从30到60°C 60分钟用来评估相对酶活性。更大的热稳定性观察30°C,与特定活动8.9 U /毫克(图5 b和5度)。有具体的活动60°C,损失高于70%。重大(α= 0.05)被发现在所有治疗酶活性的差异。酶孤立在这个工作可以被视为一个适度thermo-stable酶,因为它表现出特定的活动从50到60°C。这种酶的低或零活动在4°C或更低可能代表一个缺点,因为苹果果实是存储冷在0°C。的c . oleophilaL-06隔离报道能够生长在低温下(13]。还有可能,L-06,当挑战对植物病原真菌,可能显示β-1 3-glucanase活动与几个温带水果冷藏温度0和5°C (24]。
因为β-1 3-glucanase高温特定的活动,比如60°C,这种酶作为工业bio-catalyzer可能被视为有效。此外,它有一个更高的抗变性剂,如co-solvents,离液序列高的代理和洗涤剂,和长寿命。这些特征可能会允许c . oleophilaL-06商业化生产。分离和纯化的酶在这工作特点类似报道彭等人在处理Williopsis saturnus,最佳pH值为4.0,40°C和热稳定性的最佳温度为70°C。
β-1、3-glucanase效果p . expansum分生孢子的萌发和菌丝的生长:p . expansum分生孢子受到以下剂量的纯化酶:1.9、3.75和7.5 U /毫克。分生孢子的萌发是类似的积极控制,a .尼日尔β-1 3-glucanase (图6)。有显著(α= 0.05)差异治疗剂量,包括c . oleophila答:尼日尔β-1 3-glucanases。高剂量的酶产生更大的抑制分生孢子的萌发。答:尼日尔酶产生更大的抑制分生孢子的萌发(55.4%)比c . oleophila酶(50%),显著(α= 0.05)差异被观察到在这些和其他的治疗方法。
图6。纯化的影响c oleophilaβ-1,3-glucanase expansum页。(一)分生孢子的萌发。(B)菌丝体的生长。尼日尔β-1 a, 3 -葡聚糖酶是用作积极控制。上面图的A和B是图像p . expansum菌丝体的生长抑制。左到右:7.5 U /毫克,3.75 U /毫克,1.9 U / mg和消极的控制。每个实验进行了三次。
的百分比p . expansum菌丝体生长(图6 b)是显示在受到不同β-1 3-glucanase治疗。有显著(α= 0.05)差异治疗剂量,为c . oleophila答:尼日尔β-1,3 -葡聚糖酶。剂量越大,抑制就越大p . expansum菌丝的生长。答:尼日尔菌丝体的控制比c . oleophila。的c . oleophila酶,以最低的剂量,产生一个重大的(α= 0.05)差异相对于其他治疗方法。c . oleophilaβ-1,3-glucanase破坏p . expansum细胞壁葡聚糖(25,26]。p . expansum分生孢子的萌发和菌丝的生长抑制c . oleophilaL-06孤立β-1,3-glucanase可能表明裂解酶的生产是一个模式的作用c . oleophilaL-06隔离。Guerrero-Prieto等人报道c . oleophilaL-06, L-07光滑,L-07有皱纹的生物电控制在展出p . expansum和b灰质在采后苹果果实。这项工作的报告结果可能表明最好使用酵母本身,而不是单独酶,因为c . oleophila可能包含几个模式的行动,如裂解酶的生产、营养和空间竞争和抵抗的感应p . expansum(5]。
c . oleophilaL-06产生β-1,3-glucanase 48.3 kDa的分子质量,最优的pH值为5.0,40°C的最佳温度,热稳定性之间的间隔20和40°C,和酶活性60°C。β-1,3-Glucanase抑制p . expansum分生孢子的萌发和50%的菌丝体生长70%在使用剂量的7.5 U /毫克的纯化酶。结果表明,生产β-1,3-glucanasec . oleophila是行动的模式吗p . expansum。
