药学与药学研究与评论“雷竞技苹果下载，
菜单e-ISSN:2320-1215 p-ISSN: 2322-0112
e-ISSN:2320-1215 p-ISSN: 2322-0112
1印度泰米尔纳德邦金奈市波鲁市Sri Ramachandra大学药学院。
收到:17/04/2014接受:17/05/2014修改后:23/05/2014
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标准化是阻碍中草药被广泛接受的最重要因素，也是确认中草药身份、确定中草药质量和纯度的重要因素。通过物理评价(灰分值(总灰分、酸不溶性和水溶性)、浸出物(醇溶性和水溶性)、干燥损失和粗纤维含量等参数，以及重金属、农药和微生物污染物的分析，对三叶花椒乙酸乙酯浸出物的标准化进行了尝试。物理评价结果良好，重金属含量测定结果良好;农药和微生物检测结果均符合标准规范。
标准化，重金属，农药，物理评估
Calanthe triplicata是兰属的一种兰花，属于兰科。据报道，这些草药用于治疗肠胃疾病;根与槟榔或其他芳香物质一起咀嚼，腹泻。报道的活性包括高效薄层色谱(HPTLC)指纹图谱、体外抗氧化活性、植物化学及气相色谱-质谱分析[12-13]。
在草药的众多实际应用中，对生药的评价是制药工业的重要环节。明确了药材的特性，涉及到药材的鉴别、纯度和质量的确定。标准规格限度用于确认草药的质量[2]。
在中草药制剂的检测过程中，通常控制来自中草药的杂质，如农药和重金属，不需要对中草药产品中的这些杂质进行检测。应使用适当的经过验证的方法来控制所有潜在的残留。植物相关微生物及其与植物的相互作用影响着植物的健康。有需要指明需氧微生物的总数及是否存在特定的不良细菌[3.-7]。
该植物采集自泰米尔纳德邦Namakkal区的Kolli山，并由印度泰米尔纳德邦金奈Arignar Anna政府医院校园Siddha中央研究所助理主任(生药学)Sasikala Ethirajulu博士鉴定。
氢氧化钠、盐酸、乙醇、氯仿水、硝酸、微孔水、乙酸乙酯、乙腈、Whatman (No.4)滤纸、磷酸盐缓冲盐水、溴化钾、紫红胆琼脂、乳糖、浓缩青霉、麦康基肉汤、色氨酸肉汤、吲哚试剂、硫酸钠和一次要胺(PSA)吸附剂为分析级。甲醇和水为HPLC级。
植物粗料需要根据不同的理化参数，如总灰分值、酸不溶灰分值、水溶灰分值、干燥损失等进行适当的评价和检测。通过对这些参数的评价，可以清楚地了解药材的具体特性。
称量约2克粉状药物，并将其转移到一个精确称量和先前点燃的柏油硅坩埚中。坩埚被支撑在支架上。用燃烧器加热，使用约2厘米高的火焰，将坩埚支撑在火焰上方约7厘米的地方，轻轻地加热到蒸汽几乎停止产生，然后放下坩埚，更强烈地加热，直到所有的碳都燃烧掉。残渣在合适的干燥器中冷却并称重。
用25毫升稀盐酸清洗上述程序中得到的总灰分，并转移到100毫升烧杯中。将溶液煮沸5分钟，用“无灰”滤纸过滤，并用热水清洗两次残留物。一个空的硅坩埚在火焰中点燃，冷却并称重。将滤纸和残渣一起放入坩埚中，轻轻加热，直到蒸汽几乎停止产生，然后再进一步加热，直到所有的碳都被去除。残渣在合适的干燥器中冷却并称重。
水溶性灰分值的测定方法与酸不溶性灰分相似，用25毫升水代替稀盐酸，并对水溶性灰分的残留量进行称重。
灰分值的百分比按以下公式计算
样品总灰分/酸不溶灰分/水溶灰分值=
在称量瓶中称量约5克粉状药物，并将其转移到干燥的250毫升锥形烧瓶中。在量筒中取约100毫升90%乙醇。洗净称量瓶，将洗涤液和溶剂一起倒入锥形瓶中。用软木塞将烧瓶放置24小时，经常摇晃。过滤溶液，将25毫升滤液倒入称过的瓷盘中。在水浴中蒸发至干燥，在烤箱中以100°C完成干燥。残渣在合适的干燥器中冷却并称重。
水溶物提取值的测定方法与醇溶物提取值相似，使用100 ml氯仿水代替乙醇，并对水溶物的残留物进行称重。计算萃取值百分比。
称出约1.5克粉状药物，并将其转移到一个精确称重的瓷盘中。在烤箱中以100°C干燥，并在合适的干燥器中冷却。对残渣进行称重，计算其含水率。
称出约1.5克粉状药物，并将其转移到烧杯中。加入约50毫升10% v/v硝酸，沸腾开始后加热30秒，不断搅拌。用带吸力的布氏漏斗上的细棉布过滤上述混合物。用沸水清洗残留物，并将残留物从布中转移到烧杯中。
然后加入50ml 2.5% v/v的氢氧化钠溶液，加热煮沸(保持沸点30秒，不断搅拌)。如前所述，用热水过滤和清洗。将残渣转移到干净干燥的硅坩埚中并称重。计算了粗纤维的含量
约2.5 g均质良好的样品在微波消化器中精确称重。加入约5毫升浓硝酸和2毫升30%过氧化氢。管被盖上。操作微波消化器。消化过程完成后，容器彻底冷却。将溶液转移到25毫升标准烧瓶中，用蒸馏水稀释至标记。然后用原子吸收光谱法(AAS)进行分析[8]。
约5 g均质良好的样品在消化瓶中精确称量。加入约10 mg五氧化二钒和20 ml硫酸-硝酸(1:1)v/v。首先将烧瓶保持在小沸点6分钟，然后大火煮沸10分钟。消化过程完成后，将容器冷却并用水冲洗。将溶液转移到50毫升标准烧瓶中，用蒸馏水稀释至标记。然后用冷蒸气原子吸收光谱法进行分析[9]。
用3%硝酸将合适的溶液稀释到所需体积，制备了汞(0.01、0.02、0.05、0.075、0.10和0.15 mg/ l)和砷/镉(0.02、0.05、0.10、0.20、0.50和1.00)的校准单独工作标准。
预处理材料(紫红色胆汁琼脂)在乳糖肉汤中30°C孵育2小时，使细菌复活。使用均质材料在乳糖肉汤被转移接种1毫升,0.1毫升,和0.01毫升的样品在肠杆菌科浓缩汤莫塞尔(100毫升)单独然后孵化24小时(35°C)。在孵化后,亚文化是准备用紫罗兰色胆汁与乳糖琼脂板又孵化24小时(35°C)。没有红色或红色殖民地表明,肠杆菌科的样品通过了测试。
取大约1克预处理过的乳糖肉汤样品，接种到100毫升麦康基肉汤中孵育(45°C孵育24小时)。孵育后，在平板上用麦康基琼脂进行传代培养，再次孵育(45°C孵育18-24小时)。革兰氏阴性菌的红色非黏液菌落生长，周围有红色沉淀区，可见大肠杆菌的存在。样品通过了测试，因为没有检测到菌落。取1个完美疑似菌落接种到色氨酸肉汤中，43.5℃孵育24 h，孵育后加入2滴吲哚试剂进行验证试验。红色环未出现;测试证实了大肠杆菌的缺失。
取约10ml样品接种到100ml氯化钠蛋白胨溶液中，再将1ml该肉汤接种到酵母浸膏琼脂培养基中。在25°C下培养5 d。酵母真菌和霉菌样黏液菌落的空中生长被认为是检测真菌总数的阳性。菌落未被检测到，并证实总真菌[10]。
原液(1毫克/毫升):每种农药标准品约10毫克称量后，转移到10毫升的量瓶中，用乙酸乙酯补充体积。
中间溶液(10 μg/ml):将每个原液约1ml转移到单独的100ml容量瓶中，用乙酸乙酯补充体积。
工作溶液(0.1 μg/ml):每种中间溶液各取约1ml，分别放入100ml容量瓶中，用乙酸乙酯补充体积。
提取方法是取大约5克的粉碎样品，并以每分钟10,000转(RPM)的速度均质1分钟。取约1克均质样品，加入50毫升乙酸乙酯和25克硫酸钠。样品在10,000 RPM下再次均质1分钟。在每次均质后，清洗-水-乙酸乙酯-水序列中的turrax以去除附着在turrax上的固体基质。提取液在高容量离心机中以1200转/分的速度离心1分钟。从高容量离心机中提取的约1ml上清液转移到eppendorf管(容量为2ml)中，加入25mg Primary仲胺。在10000转/分下离心2-3分钟。从eppendorf管中取约1-2 μl提取液注入GC-MS [11]。
灰分值通过检测过量的泥土物质，可用于评价生药纯度。灰分分为总灰分、酸不溶灰分和水溶灰分，分别为8.65 + 0.114、2.01 + 0.070和4.25 + 0.035。提取值代表了粗植物成分的性质，用特定溶剂(酒精和水)进行检测，分别为18.96 + 0.081、14.72 + 0.061。采用干燥损失法(LOD)和粗纤维含量法测定水分含量和过量木质材料，分别为1.5 + 0.026、43.5 + 0.529。结果显示在表1．
微量金属含量对粗生植物的营养价值至关重要。铅、镉、砷、汞的检出限为0.05 ppm。结果发现符合世界卫生组织规范。这意味着金属含量的总浓度可以忽略不计。（表2) (图1）.
采用萃取法从基质中分离农药残留。纯化后，通过与标准品保留时间比较，鉴定浓缩洗脱液中的残留，并定量测定其残留水平。检测结果符合世界卫生组织的规格(表3) (无花果．4，5）.
为了确保样品的安全使用，微生物检测是很重要的。对特定活菌的定性和定量估计结果令人满意。结果表明，样品中肠杆菌科和真菌总数明显降低，大肠杆菌不存在。结果载于(表4) (无花果．2，3.）.
表1:物理评价
表2:重金属
表3:杀虫的分析
表4:微生物分析
图1:肠杆菌科
图2:总计真菌数
图3:大肠杆菌
图4:农药标准
图5:农药样品
采用现代方法对药用植物进行标准化筛选。通过分析各种参数并与官方指南中提到的标准规格进行比较，达到了质量和纯度。综上所述，中药提取物Calanthe triplicata不含重金属、农药和微生物污染物，可用于进一步分析。
作者感谢斯里罗摩昌德拉大学药学院生药学系和药物化学系提供的化学品和试剂，也感谢印度泰米尔纳德邦金奈Porur斯里罗摩昌德拉大学的管理层鼓励并为开展工作提供必要的设施。
