白藜芦醇一Ž²环糊精/卵磷脂复合物:肝脏功能障碍的一种新方法治疗

文摘

摘要目的:肝脏疾病的患病率在沙特阿拉伯是相对较高的,和死亡率具有重要意义。因此,这项研究的目的是修改物理化学,因此trans-resveratrol的生物学特性,王亚南代理,通过三元的形成β-环糊精/大豆卵磷脂复合物溶剂蒸发和冷冻干燥技术使用23-full阶乘设计方法。

方法:溶解度的白藜芦醇的存在(0米到0.02米)β-cyclodextrin没有0.5%卵磷脂进行了研究。准备的复合物被解散评估研究中,扫描电子显微镜、差示扫描量热法和x射线粉末衍射测量。β-cyclodextrin和大豆卵磷脂浓度的影响以及制备方法,独立变量,10分钟后释放的白藜芦醇(Q₁₀后60分钟(DE)和溶解效率₆₀),因变量,利用表面等高线图和交互图进行了研究。最后,优化白藜芦醇治疗有效性的复杂(F8)相比,商业水飞蓟素产品(Legalon)^©生物化学研究和组织病理学在老鼠四氯化碳(CCl吗₄全身的)肝毒性。

结果:结果显示,增加卵磷脂络合效率和稳定常数增加了3折左右。物理化学特性使用扫描电子显微镜、差示扫描量热法和x射线粉末衍射测量显示白藜芦醇络合β-cyclodextrin腔内药物结晶度降低。轮廓和交互图表表明,复杂的制备的方法是最重要的因素影响溶解性能的白藜芦醇的复合物卵磷脂浓度然后β-cyclodextrin浓度紧随其后。优化白藜芦醇复杂(白藜芦醇:β-cyclodextrin:卵磷脂、1:2.5:0.5 w / w)有明显的治疗效果与肝损害与商业水飞蓟素产品相比(Legalon)^©。

结论:三元白藜芦醇复杂的环糊精和卵磷脂可能是一个很好的替代医学治疗的肝损伤。

关键字

白藜芦醇,β-Cyclodextrin、卵磷脂、三元复杂,四氯化碳诱导肝毒性

介绍

天然植物化学物质的使用,改进的病最近获得了相当大的声望(1,2]。天然产品已经广泛应用在沙特人口,因为他们相信,天然产品健康有很多益处,没有有害的副作用。在沙特阿拉伯,肝脏疾病是普遍和死亡率具有重要意义。Al - Zahim等人进行了一项研究在沙特肝病患者使用天然产品来治疗他们的肝脏疾病,他们发现,76.6%的参与者满意使用天然产品来帮助控制他们的疾病3]。葡萄是世界上被广泛种植的水果。葡萄皮中含有多酚(白藜芦醇),具有较高的抗氧化活性。最近,提取含有白藜芦醇已经用于治疗许多疾病,包括心脏病、高胆固醇血症和炎症。它可能会限制肿瘤细胞扩散的有效王亚南代理(4]。然而,白藜芦醇低bioavailabilty人类由于广泛的肠上皮细胞的新陈代谢,溶解度低,期间以及光敏性配方开发(5,6]。已研制出许多方法提高白藜芦醇bioavailabilty,包括微粉化、溶解度提高通过络合hydroxypropyl-β-cyclodextrin白藜芦醇和加载到脂质核nanocapsules [7- - - - - -9]。

包含络合与环糊精用于修改药物的物理化学性质。先前文献报道改进的溶解度,因此许多水溶性差的药物的生物利用度β-cyclodextrin络合(10,11]。药物的住宿(客人分子)环糊精空腔(主机分子)取决于客人和主人分子的物理化学性质。包含络合的缺点之一是高容量的剂型取决于所需的环糊精。使用少量的环糊精的一个方法是增加溶液化效率,因此通过添加少量的水溶性聚合物络合效果系统(12,13]。先前的研究指出,添加少量的水溶性聚合物如聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素和渐变80在配方的药物-环糊精复合物导致增加药物的生物利用度,同时降低环糊精的含量高达80% (14]。所以,本研究的目的是修改白藜芦醇的理化,因此生物特征通过三元resveratrol-β-CD复合物的形成和大豆卵磷脂。

材料和方法

材料

Trans-resveratrol购买从西安Lukee生物科技有限公司有限公司(西安、陕西盛、中华人民共和国)。β环糊精(β-CD),大豆卵磷脂,和橄榄油从蓍草化学分公司购买,孟买。商用水飞蓟素产品(Legalon胶囊)^©,每个胶囊包含干燥提取水飞蓟水果相当于水飞蓟素86.5毫克到93.35毫克,70毫克。酒精和四氯化碳(三地₄)从BDH购买化学品、英国。

析因设计

白藜芦醇的8个批次(F1-F8)包含复合物基于23-factorial准备设计的三个独立因素即浓度β-CD (A)和大豆(B)的浓度在两个层面,即高(+)和低(-)和制备方法。β-CD的浓度是2.5%(+)(-)和5%而大豆卵磷脂的浓度是0.5%(-)和1%(+)和两种制备方法:溶剂蒸发(-)和冷冻干燥(+)。此外,10分钟后的药物释放量(Q₁₀),解散60分钟(DE后效率₆₀)作为响应参数作为因变量。研究制定变量表示图1。

通过溶剂蒸发制备白藜芦醇包含复合物

批次1 - 4 (表1)是由溶剂蒸发法如下。指定数量的白藜芦醇一起β-CD和大豆卵磷脂是搅拌20毫升乙醇在800 rpm(电磁搅拌器吴- 04807 - 30,科尔-改国际,625年东地堡法院的弗农山,美国)1 h。然后烧杯被放置在一个通风橱在室温(25°C±1°C) 24 h轻轻允许溶剂蒸发。干质量是通过80目筛,结果包含复杂粉末是保存在一个干燥器在25°C±1°C和受光照到使用[15]。

表1:组成不同的白藜芦醇三元复合物。

通过冷冻干燥制备白藜芦醇包含复合物

批次5 - 8 (表1)是由冷冻干燥如下。β-CD和大豆卵磷脂是溶解在乙醇50毫升的50% v / v。白藜芦醇添加,搅拌,直到一个明确的解决方案。解决方案是冻结在-40°C 24 h和冻干在冷冻干燥机(dfu - 1200,东京Rikakikai有限公司,日本)在-40°C 48 h。干质量是通过80目筛和结果包含复杂的粉末是保存在一个干燥器在25°C±1°C和受光照到使用[15]。

相溶解度的研究

相溶解度研究根据Higuchi和康纳斯描述的方法16]。过剩的白藜芦醇20毫克量加入5毫升dist.水包含不同的摩尔浓度(0米到0.02米)β-CD有或没有0.5%卵磷脂。然后分散体被转移到一个恒温瓶水浴(lsb - 030年代,帝Labtech有限公司有限公司,新德里,印度)保持在25°C 72小时。reseveratrol唯一dist.水的溶解度也决定。平衡后,样本0.45μm过滤器过滤(美国微孔,MA)和分析spectrophotometrically在306纳米17]。

相溶解度图是由策划的摩尔浓度的白藜芦醇与摩尔浓度β-CD 0.5%卵磷脂的缺失和存在。1:1药物/β-CD复杂,络合效率和表观稳定常数可以估计的斜率相溶解度图如下:[18]。

,斜率是相溶解度图的斜率和S₀白藜芦醇的平衡溶解度dist。水没有任何添加剂。

白藜芦醇含量测定

指定数量的每个包含复杂的包含相当于25毫克的白藜芦醇被放置在一个5毫升容量瓶v / v为50%乙醇。样本用使用30分钟的超声波超声发生器。解决办法是45μm过滤器过滤(微孔、马、美国),稀释50% v / v乙醇和分析spectrophotometrically 306海里。每个样本进行了一式三份(17]。

药物含量百分比计算如下:

白藜芦醇的描述包含复合物扫描电子显微镜(SEM)

两个选择白藜芦醇包含复合物的表面形态与SEM研究了纯白藜芦醇和β-CD相比(Jeol地产- 6360 a,东京,日本)。样品被固定到一个铝存根使用双面胶带和涂有gold-palladium在真空中以使其导电。记录下了在不同的放大显微图工作的激励电压15千伏(19]。

差示扫描calorimetery (DSC)

DSC的分析选择白藜芦醇包含复合物相比,个人成分进行使用差示扫描量热计(模型DT-60、日本岛津公司、日本)来确定药物的物理状态准备的复合物。氮气氛下流量80毫升/分钟,5毫克的样本被密封在一个平底的铝锅,加热的温度范围30°C到400°C和10°C以上的恒定速率¹。空铝锅是作为参考19]。

x射线粉末diffractometery (XRPD)

XRPD研究表现为选定的白藜芦醇包含复合物相比,个人成分使用X 'Pert PRO衍射仪(美国PAnalytical)检测白藜芦醇的物理形式的复杂。衍射模式测量2 -θ角范围的3°~ 60°(19]。

在体外解散的研究

的在体外解散研究进行使用USP解散测试仪器二世,桨类型,(sp6 - 400, G.B. CALEVA有限公司,多塞特郡,英格兰)在900毫升的桨转速为100 rpm dist.水37°C。25 mg白藜芦醇的样本或准备的复合物被填充进空硬明胶胶囊(0)大小和放置到解散的媒介。5毫升的整除收集在5、10、15、20、30、40、50和60分钟,取而代之的是新鲜溶解介质。样本过滤过滤0.45μm过滤器(美国微孔,MA)和分析spectrophotometrically 306海里。所有的实验进行了一式三份(20.]。

为了比较不同白藜芦醇溶解性能的配方,白藜芦醇的比例释放后10分钟(Q₁₀60分钟(DE后),溶解效率₆₀)和溶解增强率计算如下:

溶解效率(DE)可以从溶解曲线下的面积计算时间点之间的t1和t2和百分数表示的矩形的面积被解散100%,日圆,在同一时间内21]。

在那里,y是溶解药物的比例。

解散增强比(DER)可以获得溶解效率除以60分钟后白藜芦醇复杂的纯白藜芦醇溶解效率。

药理研究

白藜芦醇配方和最佳溶解参数被选中在活的有机体内研究并与商用水飞蓟素产品(Legalon)^©。

动物

所有动物保健和程序进行动物护理和治疗指南的欧洲共同体机构动物伦理委员会批准,学院制药、嗯Al Qura大学。五十岁男性白化大鼠体重180克到200克是位于25°C到30°C和免费的食物和水被允许在实验开始前1周的适应。

基底的饮食

基底的饮食准备,包括20%的蛋白质(酪蛋白)、10%蔗糖、4.7%的玉米油,氯化胆碱2%,1%维生素混合,3.5%盐混合物和5%纤维(纤维素)。其余的是玉米淀粉。

实验设计

五十大鼠被分成五组十个动物的每个(n = 10)。这项研究是基于使用四氯化碳(CCl₄全身的)肝毒性模型,因为它是一种最常用的急性肝损伤模型研究[22]。

第一组(正常控制):它被用作正常控制老鼠和他们每天摄入1毫升盐水口头14天。

第二组(积极控制):每个老鼠收到CCl 2.5毫升/公斤的体重₄在橄榄油溶液(1:1)v / v比IP一次(20.]。

第三组:每个老鼠收到CCl 2.5毫升/公斤的体重₄解决IP。72 h后,75毫克/公斤。(23]纯白藜芦醇(3毫升悬浮在CMC)每天口服一次连续11天。

第四组:每个老鼠收到CCl 2.5毫升/公斤的体重₄解决IP。72 h后,相当于75毫克/公斤白藜芦醇(F8)(3毫升悬浮在CMC)每天口服一次连续11天。

V:每个老鼠收到CCl 2.5毫升/公斤的体重₄解决IP。72 h后,相当于75毫克/公斤水飞蓟素(Legalon)^©(3毫升悬浮在CMC)每天口服一次连续11天。

14日^th一天,两个小时后治疗,血液样本是通过获得retroorbital窦神经丛,然后老鼠牺牲。血凝了在室温和血清在4000转离心获得的15分钟,保持在-20°C进一步进行生化分析。部分肝组织,并立即获得嵌入在10%福尔马林处理和组织病理学分析。组织部分肝脏的苏木精和伊红染色())。生化分析包括肝功能试验(测定AST、ALT、高山、印度,TP和铝青铜)和肾脏功能测试(如血清尿素和肌酐)。生化指标进行了使用商用设备

肝脏组织病理学分析

组织病理学研究不同组的小鼠的肝组织获得,用冰冷的生理盐水洗净,并立即固定在磷酸缓冲中性10%福尔马林。适当的固定后,标本在梯度酒精脱水(50%到100%),清除在二甲苯中,嵌入在石蜡制作。薄组织石蜡切片(5μm厚度)准备并与常规苏木精和伊红染色(圆))除了用甲苯胺蓝染色剂染色。样本在显微镜下检查肝组织,组织病理学变化和拍摄在不同的放大能力。组织学检查是在组织学实验室完成的解剖学部门,医学院嗯Al-Qura大学,沙特阿拉伯。

结果与讨论

相溶解度的研究

白藜芦醇略溶于水(8.24×10⁵米)。白藜芦醇的溶解度显著增加到0.00094年的β-CD溶解效率为11.4。添加0.5%卵磷脂w / v作为第三辅助剂进一步增加白藜芦醇溶解度和溶解效率为24.3,0.002代表2.1折的增加(表2)。

表2:数据的相溶解度的研究不同摩尔浓度的白藜芦醇β-CD和卵磷脂。

相溶解度图不同的摩尔浓度的白藜芦醇β-CD没有0.5%卵磷脂w /五所示图2。白藜芦醇的水溶解度的增加线性增加β-CD集中描绘一个基地类型相溶解度图根据Higuchi和康纳斯。观察到的溶解度的增加是由于形成1:1 M包含复杂(24]。络合程度的水媒体的特征是明显的稳定常数K_1:1。的计算值resveratrol-β-CD稳定常数(K_1:1)是611.54米¹与之前报道在协议范围(50米¹到2000米¹)由Cannors [16]。白藜芦醇的络合计算效率与β-CD 0.05。然而,添加少量的卵磷脂β-CD系统进一步提高了β-CD络合和增溶的效率。稳定常数K_1:1和络合三元复杂的效率是1860米¹和0.153,分别显示两个值增加三倍。这个结果证实了我们的假设,添加少量的卵磷脂会减少所需数量的药物复杂的配方中。Loftsson 2005年报道,随着药物环糊精络合效率增加,药物复杂体积剂量减少(25]。

增强的环糊精添加少量的卵磷脂络合是归因于这些组件之间的协同效应。据报道,磷脂作为表面活性剂改善药物润湿性的优势是无毒、生物相容性(26]。Loftsson和同事解释的协同效应对环糊精水溶性聚合物络合能力的聚合物稳定胶束和其他类型的总量,减少环糊精流动性和提高配合物的溶解度通过改变环糊精分子的水合性质(27]。

白藜芦醇含量测定

%药物所有准备的内容包含复合物被发现之间的98.6%和99.60%,表明该药物均匀分散在准备的复合物。

白藜芦醇包含复合物的表征

扫描电子显微镜(SEM)

选定的表面形态白藜芦醇复合物(F4和F8)相比,纯白藜芦醇和β-CD见图3。纯白藜芦醇与光滑表面表现出一种杆状(图3一),而β-CD显示立方形状与光滑表面(图3 b)。另一方面,配方(F4和F8)显示出不同于单个成分和形态表现出药物的晶体结构的变化(图3 c和3 d),这可能归因于络合过程(28]。

差示扫描calorimetery (DSC)

DSC热分析图的个别成分和一些选定的白藜芦醇复合物所示图4。白藜芦醇出现大幅吸热峰在272.7°C(ΔH = -45.8 J / g)对应于它的熔点(29日]。β-CD有广泛的吸热峰在114.65°C(ΔH = -85.12 J / g)对应于水的蒸发包含在环糊精空腔(29日]。卵磷脂展出一个吸热峰在202.13°C(ΔH = -18.26 J / g)。不同的白藜芦醇复合物显示只有一个广泛的峰值在122 - 137°C。然而,吸热峰的环糊精复合体由冷冻干燥(F7和F8)显示显著减少熔化热相比,那些由溶剂蒸发(F3, F4)。这些变化可以解释复杂的形成和晶体白藜芦醇为无定形状态的变化是更重要的在白藜芦醇复合体由冷冻干燥24]。Gidwani和Vyas以及报道,药物-环糊精络合的驱动力包括去除水分子从环糊精的疏水空腔和范德瓦尔力和氢键相互作用形成30.]。

x射线粉末diffractometery (XRPD)

个人XRPD成分和一些选定的白藜芦醇复合物所示图5。纯白藜芦醇和β-CD表现出该地区的多个衍射峰6.6°32°强度高(13.8%对100%)来显示他们的结晶性质,而卵磷脂显示非晶自然。不同的白藜芦醇复合物显示,白藜芦醇峰的消失和出现的一些新的高峰在不同衍射角。然而,白藜芦醇复合体由冷冻干燥(F7和F8)显示,衍射峰的强度显著降低指示相比减少药物结晶度高由溶剂蒸发。XRPD结果与通过DSC结果。

在体外解散的研究

解散概要文件不同的白藜芦醇复合物相比,纯中演示了白藜芦醇图6。计算溶解参数不同的白藜芦醇复合物相比,其纯粹的形式进行了总结表3。纯白藜芦醇溶解速度缓慢(Q展出₁₀= 5.8%±1.2%)与少量的药物释放的60分钟(DE₆₀= 10.6%±1.1%)。这个结果是由于疏水性药物性质,因此可怜的润湿性,以及粒子聚集在溶解过程中(17]。解散概要文件不同的白藜芦醇复合物显示显著改善药物溶解的速率和程度可以解释复杂的基础上形成,从而增加药物润湿性增强效应的β-CD和卵磷脂。β-CD和卵磷脂的协同表面活性性能可以减少白藜芦醇粒子和溶解介质之间的界面张力,导致更大的溶蚀率(31日]。增强药物溶解的另一个因素是降低药物结晶度是证实通过特性研究[32]。

表3:白藜芦醇溶解参数不同的复合物而纯粹的白藜芦醇。

然而,白藜芦醇复合体由冷冻干燥显示更高的溶解性质比由溶剂蒸发。制定F8显示,100%在10分钟解散。冷冻干燥技术的优越性解散白藜芦醇可以强烈支持的增强特性的结果。Badr-Eldin和同事解释白藜芦醇溶解的显著增加复合体由冷冻干燥的基础上完成包含药物的环糊精空腔在冷冻干燥过程中导致的形成固溶体的药物,因此它的粒度降低到分子大小导致快解散(33]。

统计上理解不同的配方变量的影响,β-cyclodextrin和大豆卵磷脂浓度(X₁,X₂(X)和制备方法₃冷冻干燥,X₄溶剂蒸发),白藜芦醇的比例释放后10分钟(Q₁₀后60分钟(DE)和溶解效率₆₀),回归分析和三因子二级因子设计的实验进行了使用Minitab软件和17所示的结果表4和图7 - 9。

表4:多元回归分析和方差分析结果不同的配方变量的影响的调查反应。

多重回归分析可以解释使用以下方程:

在那里,Y是响应预测。一个是回归方程的截距。y₁y₂y₃和y₄改变变量的系数线性。回归模型显示预测的效率为95.46%和89.52%的比例白藜芦醇发布后10分钟(Q₁₀后60分钟(DE)和溶解效率₆₀),分别。β-cyclodextrin和大豆卵磷脂的浓度有一个无意义的负面影响(P > 0.05)的百分比白藜芦醇发布后10分钟(Q₁₀后60分钟(DE)和溶解效率₆₀)。另一方面,溶剂蒸发法(P < 0.05)有显著负面影响在白藜芦醇的复合物的溶解性能和冷冻干燥技术相比。

方差分析的结果显示八白藜芦醇复合物表现出很强的显著差异在因变量的值通过改变研究的水平因素(表4)。为了验证方差分析的结果分析,剩余的情节。从残差正态分布和随机图案看,分析被认为是可以接受的(图7)。

轮廓图

二维等高线图是用来理解白藜芦醇的百分比的变化释放后10分钟(Q₁₀后60分钟(DE)和溶解效率₆₀)最高和最低值的独立变量(图8)。在β-CD低价值,增加卵磷脂浓度呈负影响药物释放的速度(Q₁₀)和药物溶解(DE的程度₆₀)。同样的结果在高β-CD价值。值得提及,卵磷脂浓度对白藜芦醇的溶解性能更强的三元复合物而不是β-CD浓度。这个结果可以归因于增加卵磷脂浓度降低的亲和力白藜芦醇与后续β-CD腔解散整体性能下降。

变量之间的相互作用

不同的配方变量之间的关系,β-CD卵磷脂浓度和制备方法,研究(图9)。交互意味着废除一个变量的影响在一定价值的其他变量。在这些情节,相关程度的交互可以non-parallelism越多,非线相互作用越强(34]。

情节在右上角显示的效果β-CD百分比浓度的白藜芦醇发布后10分钟(Q₁₀)(A)和解散后60分钟(DE效率₆₀)(B)当使用两种制备方法。制备方法更优越的效果增强解散属性(Q₁₀,德₆)比β-CD的浓度。接下来的情节显示β-CD浓度和卵磷脂浓度之间的强相互作用。β-CD浓度较低,增加卵磷脂浓度负面影响复合物白藜芦醇的溶解性能。另一方面,在高β-CD浓度,增加卵磷脂浓度导致了一些提高白藜芦醇溶解。的情节完全展示了卵磷脂浓度对白藜芦醇的百分比的影响发布后10分钟(Q₁₀)(A)和解散后60分钟(DE效率₆₀)(B)当使用两种制备方法。没有关于他们的两个变量之间的交互影响药物释放的速度(Q₁₀),然而,这两个变量之间有交互影响解散时效率(反₆₀)。因此,变量可以列为卵磷脂浓度>制备方法>β-CD浓度影响药物释放的速度(Q₁₀)。

然而,制备方法>卵磷脂浓度>β-CD浓度是影响溶解效率排名后60分钟(DE₆₀)。

药理研究

生物化学分析

肝脏和肾脏功能测试的结果进行了总结表5。很明显,管理创新领导力₄导致一个高度显著(P < 0.001)海拔hepatospecific血清标记ALT, AST,高山和总胆红素降低血清总蛋白与正常相比控制老鼠。此外,有高度显著(P < 0.001)海拔肾血清标记肌酐和尿素。

表5:治疗效果的白藜芦醇三元复杂(F8)与纯白藜芦醇和商业水飞蓟素在血清肝和肾功能测试在亚兰治疗男性白化病老鼠。

CCl的肝毒素的效果₄归因于其微粒体代谢的细胞色素P450 (CYP)在哺乳动物肝脏等致命的活性代谢产物三氯甲基(CCl吗₃•)和过氧化三氯甲基(三地₃OO•)自由基导致过氧化反应的多种重要的生物细胞分子,如蛋白质、脂质、核酸。这导致肝功能的损伤导致肝细胞损伤(20.]。

另一方面,治疗与白藜芦醇配方或商业水飞蓟素连续14天高度显著(P < 0.001),减轻这些CCl的不良反应₄。比较三种配方的治疗效果(纯白藜芦醇、白藜芦醇复杂(F8)和商业水飞蓟素),有非常显著差异(P < 0.001)之间纯粹的白藜芦醇和白藜芦醇复杂(F8)和商业水飞蓟素。然而,没有显著性差异(P > 0.05)之间的白藜芦醇复杂和商业水飞蓟素表明两种剂型有相同的缓解效果。白藜芦醇的有益作用在治疗肝损害归因于其多酚含量强有力的抗氧化、消炎,抗氧化剂酶介导感应,降低肝脂质过氧化作用[35]。据报道,白藜芦醇增加肝脏谷胱甘肽含量,进行清除自由基,引发二期肝代谢的酶。此外,它可以抑制转录因子核factor-kappa B (NF kB),诱导炎症反应以及它能减少一些促炎细胞因子的表达(36,37]。疗效的机制提供的水飞蓟素对肝损伤也由于其高含量的酚具有很强的抗氧化活性(38]。它可以防止肝脏毒素进入肝细胞的渗透改变细胞膜的外部结构(39)核糖体蛋白合成增加,从而刺激新的肝细胞的形成40)的合成,抑制化学炎症介质(41]。

这项研究表明,商业水飞蓟素更有效的作用比纯白藜芦醇治疗肝损伤与之前报道的发现协议的Kumar和同事(42]。然而,解决复杂白藜芦醇(F8)与商业活动可比hepatotherapeutic sylimarin产品。这个观察增强hepato-therapeutic白藜芦醇的影响复杂(F8)与纯白藜芦醇相比可能是由于药物溶解增强协同效应的β-CD和卵磷脂促进更快的释放药物的体液,因此快速分区到肠膜,同时吸收(20.]。类似的结果被库玛丽和同事报道(43]。

组织病理学分析

生化观察被在鼠肝组织病理学发现平行CCl的情况₄和治疗组。显微镜检查大鼠肝组织的不同群体使用不同的污渍所示图10来12。

图10显示了使用)染色组织学检查,,正常对照组大鼠的肝脏部分(我)显示肝小叶的正常组织学结构;正常肝小叶结构和中央静脉和辐射肝索。它揭示了正常肝细胞突出的核和核仁。

而CCl小鼠的肝部分处理₄(10-II)显示肝体系结构的完全丧失,显示脂肪变性,扩张门户空间、焦肝坏死相关的退行性变化,液泡化,hyper-chromatosis和肝细胞坏死;小叶中心的坏死。膨胀的肝细胞可以很容易地检测到,除了严重的炎症在门户区伴随着相邻小叶法术,缩小肝血窦和细胞的渗透和fibrosed血管。CCl诱导的肝损伤的影响₄可以主要归因于其氧化应激机制,CCl的代谢产物₄可以发起直接氧化损伤脂质、蛋白质和DNA (44]。

老鼠肝脏标本处理纯白藜芦醇(10-III)显示中度门户呼吸道炎症,中度退化性变化与渗透门管区mono-nuclear细胞。坏死的肝细胞也发现病灶部位。另一方面,小鼠的肝部分优化白藜芦醇处理公式,F8, (10-IV)显示最少的退行性变化,最小的门管区mono-nuclear细胞的渗透。没有可以观察到细胞坏死。它显示了或多或少与正常对照组正常肝小叶结构。肝细胞可能会恢复到正常状态。

肝脏部分参考治疗组(10 v)显示轻度退行性变化与单核细胞渗透门管区。轻微的炎症和中央静脉阻塞可以观察到,这有点高于可以观察到大鼠治疗的优化公式。高倍镜下,肝细胞肿胀和泡沫外观除了分散纤维组织,可以看到。

图11代表了显微镜检查使用甲苯胺蓝(TB)污渍。可以注意到,肝脏正常控制老鼠(我)部分显示正常的肝细胞,中央静脉和门管区。肝脏部分的显微照片从老鼠CCl处理₄only-diseased组:显示瘀、退行性变化和肥大细胞浸润(11-II)。

,肝脏的部分大鼠接受纯白藜芦醇(11-III)显示中度退化性变化与渗透门管区mono-nuclear细胞。正常肝小叶显然是注意到从大鼠肝脏处理优化的白藜芦醇公式,F8,显示最小(11-IV)组织病理学变化。而老鼠的肝脏部分的显微照片处理参考显示轻度退行性变化与渗透门管区mono-nuclear细胞(11-V)。结果使用结核病染色增强使用)染色结果。这些发现与Girish等人在协议支持活跃的植物化学物质的使用对中毒性肝损伤水飞蓟素,可能通过阻止脂质过氧化,增强肝细胞的抗氧化防御系统或再生(45]。

高碘酸首席(PAC)的组织病理学发现染色显示,没有组织化学反应肝细胞糖原累积的正常对照组与正常肝细胞中央静脉,门户大片,也没有组织化学反应对糖原累积(我),然而在第二组肝细胞(病变组),与糖原代谢缺陷有关。糖原累积在肝细胞的细胞质造成渗透负荷和增加含水量和严重,肝脏是苍白但肯定不是在某种程度上作为一种严重的脂肪肝。显微镜下,影响肝细胞肿胀,脸色苍白,有液泡的细胞质有时被称为“毛玻璃”(混浊肿胀)(12-II)。同时肝细胞在纯白藜芦醇治疗组显示适度的组织化学反应对糖原累积(12-III)成为有限的优化配方,F8,治疗组,积累但在一端的细胞(12-IV)。但在参考治疗组,最小的组织化学反应对糖原累积可能注意到(12 v)。

获得的结果使用PAC染色后,在协议,获得圆)和结核病染色,进而增强生化结果。

药理研究表明,白藜芦醇的新的优化公式,F8,可能产生王亚南高于纯白藜芦醇或获得的水飞蓟素的引用。水飞蓟素,根据组织病理学研究表明,未能改善病变肝组织的全貌,显著程度的纤维化,炎症和脂肪变性仍在观察肝脏组织,优化白藜芦醇处理公式相比,显示几乎正常肝脏组织结构和恢复正常的架构。

结论

制定白藜芦醇三元复杂β-cyclodextrin和卵磷脂是一种有效的工具来增强的溶解度,因此解散白藜芦醇的性质。制备三元(白藜芦醇:β-cyclodextrin:卵磷脂)复杂的重量比1:2.5:0.5 w / w冷冻干燥技术(F8)显示出比这更好的溶解性能由溶剂蒸发技术。三元环糊精的研究揭示深刻的hepato-therapeutic效果复杂(F8)可以作为一个有前途的替代医学。

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