研究和评论:药物分析杂雷竞技苹果下载志》上
菜单e-ISSN: 2320 - 0812
e-ISSN: 2320 - 0812
Rajendra帕蒂尔1*,印度央行德斯穆克1维贾伊,帕蒂尔1,Kishanchand口2
1乡镇企业的尊敬Loksevak Madukarrao Chaudhari药学院,Jalgaon - 425503,印度马哈拉施特拉邦
2JSPM的Rajarshi Shahu药学院和研究,普纳- 411033,印度马哈拉施特拉邦
收到日期:2014年4月22日接受日期:2014年5月21日
访问更多的相关文章研究和评论:药物分析杂雷竞技苹果下载志》上
分析方法发展必须验证为监管提供可靠的数据提交。这些方法是至关重要的目的,包括测试质量控制稳定的版本,测试样品,测试的参考资料和规范提供数据支持。之后分析方法建立证据的过程,提供了高度的保证和药物发现是一个重要的过程。虽然药物显示了良好的效果,缺乏验证分析方法将不允许药品进入市场。这是确保药品的质量和安全。本文给出了关于各种方法检查药物的稳定性和不同的验证参数根据不同的监管机构。
验证参数,稳定显示,监管当局。
药物引入到市场的数量每年都在增加。这些药物可能是新的实体或局部结构修改现有的一个。任何分析测量的目的是获得一致的、可靠的、准确的数据。验证分析方法在实现这一目标发挥重要作用。方法验证的结果可用于判断质量,分析结果的可靠性和一致性,是任何良好的分析实践不可或缺的一部分。验证所需的分析方法也是大多数法规和质量标准,影响实验室。经常有一个日期的时间差引入药物进入市场的日期在药典的包容。这是因为可能的持续的不确定性和更广泛的使用这些药物,新的毒性的报道(导致其退出市场),病人的发展阻力和介绍更好的药物的竞争对手。在这种情况下,标准和分析方法对这些药物可能不是药典中可用。有一个范围,因此开发这类药物新分析方法。 Analytical methods development and validation play important roles in the discovery, development, and manufacture of pharmaceuticals.医药产品制定有超过一种药物,通常称为组合产品,旨在满足先前未满足的患者,需要分析方法的开发和验证相结合两种或两种以上药物的治疗效果在一个产品。这些组合产品分析化学家提出严峻的挑战负责分析方法的开发和验证。官方的测试方法,使用这些过程质量控制实验室,确保身份、纯度、效力,和性能的药物产品。识别和量化的杂质是一个至关重要的任务在制药过程中开发的质量和安全。相关组件是多余的杂质在医药化学物质的活性药物成分(API),或开发稳定性测试期间,或开发在配方或老化的API和API来制定药品。这些即使在少量有害化学品的存在可能影响药品的疗效和安全性。各种分析方法用于测定药品的相关组件。是一个伟大的需要新分析方法的开发新兴药物的质量评价。
新方法开发的基本标准药物分析
•的药物或药物组合可能不是官方药典
•一个适当的分析方法的文献中出现的药物可能不是由于专利法规
•分析方法可能不是可用于药物的形式制定制定辅料造成的干扰
•对药物的定量分析方法在生物体液可能不可用
•分析方法结合其他药物的药物可能不可用
•现有的分析方法可能需要昂贵的试剂和溶剂。它还可能涉及到繁琐的提取分离过程和这些可能不可靠1]。
方法验证
需要验证的分析方法分析遇到的制药行业几乎每天,因为充分验证方法是符合规定的申请的必要性。什么是一个验证方法,然而,受分析师解释,因为没有公认的行业实践分析验证。方法验证在文学已经受到了相当大的关注和工业委员会和监管机构。国际协调会议(ICH)技术要求的注册药品对人类使用了文本分析方法验证的共识。文档包括定义不同的验证参数。美国环境保护署(EPA),资源保护和恢复法案》(《),美国官方分析化学家协会(采用AOAC公认的),美国环境保护署(USP)和其他科学组织通过multi-laboratory研究提供验证的方法(2]。美国食品和药物管理局(FDA)提出了指导方针在提交样品和分析方法验证的数据。美国药典(USP)发表了具体方法验证和复合评价指南(3]。
分析方法的验证的目的是证明适用于其预期的目的。验证分析方法的讨论是针对四种最常见的类型(4]。
•识别测试。
•为杂质定量测试内容。
•为杂质的控制极限测试。
•积极的一部分样品的定量测试药物物质或药物产品或其他选定的组件药物产品。
方法需要验证和再验证(5]。
•在他们引入到常规使用。
•当条件改变的方法验证如仪器具有不同特点。
•只要方法改变,变化超出原方法的范围。
特异性的能力方法测量分析物的存在其他相关组件预计将出现在一个示例。分析技术可以测量分析物反应的所有潜在样本组件应该用于特异性验证。并不总是可以证明一个分析性程序是特定于一个特定的分析物。在这种情况下的组合两个或两个以上的分析方法建议实现必要水平的歧视。一种常用技术在制药实验室高效液相色谱法(高效液相色谱),在某种程度上气相色谱法(GC)。在实践中,准备了一个测试混合物包含分析物和所有潜在样本组件。结果与分析物的反应。在测试混合物制药,组件可以来自合成中间体,辅料和降解产物。代的降解产物可以加速通过将样品在压力条件下,如高温、湿度或光线。特异性的液相色谱法通过选择最佳色谱条件列和设置,如流动相组成、温度和检测器波长列。除了色谱分离、样品制备步骤也可以优化的最佳选择。这是一个困难的任务在色谱法确定样品色谱图中的峰是纯粹的或由不止一个的化合物。分析师应该知道有多少化合物的样品并不总是可能的。因此,应评估目标化合物峰纯度。
准确性和恢复
分析过程的准确性表达亲密之间的协议价值被接受作为一个传统的真实价值或一个公认的参考价值和价值发现。因此,准确的测量分析方法的正确性。精度也可以被描述为在多大程度上测试结果生成的方法和真正的价值认同。精度评估的真正价值可以通过多种方式获得。一个替代方法是比较的结果建立的方法与结果的参考方法。这种方法假设的不确定性是已知的参考方法。其次,精度可以通过分析样本与已知浓度(例如,一个控制样本或认证的参考材料)和比较测量值与真实值作为提供的材料。如果认证参考资料或控制样本并不可用,一个空白样本矩阵的利益可以与一个已知的浓度上升按重量或体积。提取后的分析物从矩阵和注入分析仪器,它的复苏可以确定通过比较提取的反应与参考材料溶解在一个纯粹的反应溶剂。因为这个样品制备的有效性,准确性评估措施应注意尽可能模拟实际的样品制备。 If validated correctly, the recovery factor determined for different concentrations can be used to correct the final results. The concentration should cover the range of concern and should include concentrations close to the quantitation limit, one in the middle of the range and one at the high end of the calibration curve. Another approach is to use the critical decision value as the concentration point that must be the point of greatest accuracy. The ICH document on validation methodology recommends accuracy to be assessed using a minimum of nine determinations over a minimum of three concentration levels covering the specified range (for example, three concentrations with three replicates each). Accuracy should be reported as percent recovery by the assay of known added amount of analyte in the sample or as the difference between the mean and the accepted true value, together with the confidence intervals.
精度
精密的分析性程序表达亲密的协议的一系列测量获得的多个采样均匀样品在规定的相同
可重复性
重复性精度表达了在相同的操作条件下在一个小的间隔时间。可重复性也称为intra-assay精度。
中间精密度
中间精密度表示实验室内部变化:不同天,不同的设备,确定中间精密度等。通过比较方法的结果在一个实验室中运行的天。方法的中间精度可能反映差异的结果
•不同的运营商
•不一致的工作实践
•不同的乐器
•标准和试剂从不同的供应商
•列从不同的批次
•结合
中间精密度验证的目的是验证在同一实验室的方法将提供相同的结果一旦开发阶段结束。
再现性
再现性表达之间的精密实验室(协作研究通常应用于标准化的方法)。再现性的目的是验证该方法在不同的实验室将提供相同的结果。分析方法的重现性是由分析整除从均匀很多不同在不同的实验室分析。此外,典型的操作和环境条件变化可能不同,但仍在使用指定的参数的方法。验证的再现性是很重要的,如果使用的方法是在不同的实验室。再现性影响的因素包括房间温度和湿度的差异,或延迟体积等设备具有不同特点的高效液相色谱系统,从不同的供应商或列不同批次和不同经验和horoughness运营商。
个体分析方法的检出限是样品中分析物的最低数量能被探测到的但不是量化的精确值。
检测极限(LOD)是在哪个点测量值大于与之相关的不确定性。中被测物能被定量测定的最低浓度能被探测到,但不一定是量化。经常混淆的极限检测方法的灵敏度。
的灵敏度分析方法是方法的能力区别小浓度的差异或测试分析物的质量。实际上,灵敏度的校准曲线的斜率是通过绘制响应对分析物的浓度或质量。色谱法的检出限是导致峰的注射量身高至少有两个或三倍基线噪音水平。除了这信噪比的方法。
定量限
个体分析方法的定量限是样品中分析物的最低数量,可以定量测定精密度和准确度。定量限制是一个参数的低水平的化合物的定量测定样本矩阵和特别用于杂质或降解产物的决心。定量分析的参数定量限制低水平的化合物在样本矩阵,,特别是用于测定杂质或降解产物。定量限制通常是由样本与已知浓度的分析物的分析,通过建立分析物的最低水平可量化和可接受的准确度和精密度。如果所需的精度的方法定量限制的规定,5或6和样品分析物的减少量注射六次。所确定的数额范围从已知的LOD LOD的20倍以上。
线性
的线性分析程序是能够获得测试结果直接与样品中分析物的浓度成正比。线性测试物质可以直接证明(由一个标准储备溶液稀释)或单独考虑合成混合物测试产品的组件。线性是由一系列注射5到6的5个或5个以上标准浓度跨度80 - 120的预期的浓度范围。响应应该直接成比例的分析物的浓度或比例通过一个定义良好的数学计算。线性回归方程应用到结果应该有一个拦截不明显不同于零。如果获得显著非零截距,它应该表明这对精度没有影响的方法。频繁,线性评估图形,除了数学评价或作为替代。评估是由视觉检查一块信号高或峰面积作为分析物浓度的函数。因为偏离线性有时难以检测,可以使用两个额外的图形程序。第一个是情节偏离回归线和浓度。
如果有一个线性关系测试结果应该由适当的统计方法评估
•相关系数(r)
•y轴截距
•回归线的斜率
•残差平方和
一般验收标准为一个线性校准曲线- r > 0.999;截距< 0 - 5%的目标浓度相对标准偏差(w·r·t .校准曲线)< 1.5 -2%。
范围
分析过程的范围之间的间隔上、下样品中分析物的浓度,它已经证明了分析过程有一个合适的精度,精度和线性度。范围通常是用相同的单位表示测试结果(例如百分比,ppm)分析方法获得的。
•分析- 80测试浓度的120%
•含量均匀度-•70测试浓度的130%
•溶解- q - 20%到120%
•杂质——报告水平——120%的杂质规格限制
•分析&杂质——报告水平测定特定的120%。
线性有限保质期的150%规格的杂质
•测试浓度可用于确定杂质
•确定药物物质(试验)测试浓度必须被稀释
•的范围是0 ~ 150%杂质规范
鲁棒性
分析性程序的健壮性是衡量其能力不受影响小而故意变化方法参数和提供了一个指示的能力在正常范围内。
鲁棒性测试检查操作参数对分析结果的影响。测定方法的鲁棒性,方法参数,如pH值、流速、柱温、注入体积、检测波长或流动相组成、多种多样,一个现实的范围内,确定变量的定量影响。如果参数的影响在先前指定的公差,据说参数方法的鲁棒性范围内。获得这些影响数据有助于评估方法需要重新检验它是否一个或多个参数改变时,例如,为了弥补列性能随着时间的推移。在我document5建议考虑方法的鲁棒性的评估在发展阶段,和任何结果至关重要的方法应该被记录下来。
强度
强度是结果的再现性的程度在不同的条件下,如不同实验室、分析师、仪器、环境条件、操作符和材料。再现性的强度是衡量测试结果正常,预计操作条件从实验室到实验室和从分析师分析师。强度是由整除的分析在不同的实验室均匀很多。
化合物可以分解色谱调查之前,例如,在样品的制备方案,提取、清理、相转移或存储准备瓶(在冰箱或一个自动取样器)。在这种情况下,方法开发应该调查分析物的稳定性和标准。这是一个衡量偏差在预选中在分析结果生成时间间隔,例如,每小时46小时,使用一个单一的解决方案。稳定性测试是重要的评估之间的允许时间跨度样本收集和样本分析。同样重要的是评估分析方法的能力来衡量药物产品的降解产物。实验应该在实际样品存储条件下进行,因为药物物质的稳定性是一个函数的存储条件下,药物的化学性质,矩阵和容器系统的稳定性。研究应评估的稳定性分析物在样品收集和处理后典型的存储场景如长期存储(当冻结在目的存储温度),短期储存在室温下(在一系列样本分析),之后,冻结和解冻周期。条件用于稳定性试验应反映情况时可能遇到的实际样品处理、存储和分析。所有稳定性决定应该使用一套样品准备从一个新鲜的股票的解决方案的分析物在适当analyte-free,抗干扰的矩阵。股票的解决方案的分析物稳定性评估准备在一个适当的溶剂浓度。 The stability of the stock solutions of the drug and the internal standard should be evaluated at room temperature for at least six hours. After completion of the desired storage time, the stability is tested by comparing the instrument response with that of freshly prepared solutions. System stability is determined by replicate analysis of the sample solution and calculation of the RSD of the responses. System stability is considered appropriate when the RSD does not exceed more than 20 percent of the corresponding value of the short term system precision. If the value is higher on plotting the assay results as a function of time, the maximum duration of the sample solution usability can be calculated. To force degradation, ICH4 also recommends conducting stress studies, in conditions such as elevated temperature, humidity or light to demonstrate the specificity of the assay in presence of degradation products. The goal is to generate typical degradation products that may be expected. As a rule of thumb, stress conditions should be selected so that 5-20 percent of the drug substances are degraded. In addition, it is recommended to measure the stability under different freeze and thaw cycles, both short and long term. Below are example conditions suggested for bioanalytical studies. Exact conditions depend on application-specific storage conditions.
图1:流程图的稳定
StudiesAcid和碱水解13- - - - - -15]
的水解降解药物在酸性和碱性条件下可以通过回流研究药物盐酸0.1 N / 0.1 N氢氧化钠。如果合理的退化,测试可以停在这一点。但是如果没有退化被认为在这些条件下酸/碱的药物应回流更高的强度和持续时间更长。或者如果总降解后对药物初始条件、酸/碱强度可以降低反应温度下降。
氧化
为氧化试验,建议使用过氧化氢浓度范围的3 - 30%。在某些药物广泛降解被认为当暴露于3%的过氧化氢在室温下很短的时间内。在其他情况下暴露在高浓度的过氧化氢,即使在极端条件下不会引起任何显著下降。预期的行为,因为一些药物事实上oxidisable,虽然有其他不是。后者是不会显示任何改变即使在高剂量的氧化剂的存在。
图2:流程图的酸/碱诱导水解
光解的退化
阳光:光解的研究应包括药物溶液的接触阳光。药物的解决方法应该是暴露在阳光下4天。
紫外线:药物的解决方案应该暴露于紫外线辐射,紫外线室4天研究光解的药物稳定性。
图3:流程图的氧化
中性的水解
压力测试可以开始在中性条件下回流水的药物12小时。回流时间应该增加或减少每12小时内获得的退化。
干热:药物粉末在高温烤箱加热可以为干热退化进行压力测试。可以增加加热时间12小时以上,如果没有足够的退化在初步研究。
潮湿的热量:潮湿的热降解可以几个小时回流药物研究的解决方案。
压力测试产生的另一个实用方面询盘从从业人员是一个问题最好的方式处理样品含有高浓度的酸、碱、氧化剂对高效液相色谱法。一种方法是足够稀释样品,试剂的浓度下降在可接受的范围之内的。为高效液相色谱流动相稀释可以执行,至于TLC一个合适的溶剂如甲醇或乙醇可以使用。第二种方法包括中和酸和碱解容许博士稀释比中和通常更容易。中和的问题,很难执行以定量的方式,而且通常会导致沉淀溶解成分的样品。可以由过滤控制样本的注射器过滤器。
图4:照片稳定的流程图
冻结和解冻稳定
分析物稳定性应确定在三冻结和解冻周期。至少三个整除的高低浓度应该存储在目标存储温度为24小时,在室温下解冻无助的。
短期温度稳定性
三个整除每个低和高的浓度应在室温下解冻,保持在这个温度4至24小时(基于预期的持续时间,样品在室温下将保持在预期的研究)和分析。
长期稳定
存储在长期稳定性评价应超过首样的日期之间的时间收集和最后的样本分析的日期。长期稳定应该由存储至少3整除每个低和高的浓度相同的条件下为研究样本。所有稳定性样品的浓度应该比back-calculated值标准的意思是在适当的浓度从长期稳定性测试的第一天。
稳定的加工样品
处理样品的稳定性,包括autosampler的驻留时间,应该确定。药物的稳定性和内部标准应该评估预期运行时验证批大小的原始样本的基础上,通过确定浓度校准标准。
文档(20.]
验证分析方法的建立和验证了实验室研究,和文档的成功完成这些研究应提供试验验证报告。一般和特定的安抚和良好记录的一个重要组成部分分析方法进行验证。数据生成的生物分析方法建立和质量控制应记录和可用的数据审计和检查。文档提交给该机构应包括:
•摘要信息
•开发和建立方法
•生物分析报告应用程序的常规样品分析的方法
•其他信息适用于方法开发和建立和/或常规样品分析。
对方法开发和建立的文档包括:
•运营分析方法的描述。
•药物纯度和身份的证据标准,代谢物标准和内部标准用于验证实验。
•稳定性研究和支持数据的描述。
•实验确定的描述精度,精度、复苏,选择性,量化的限制,校准曲线(方程和称重功能使用,如果有的话),从这些研究中获得的相关数据。
•内部文档和inter-assay精密度和准确度。
应用程序的分析方法开发23]
•所有样本的化验分析物的生物基质内应该完成的时间稳定性数据是可用的。一般来说,生物样品分析有一个决心没有重复或复制分析测定方法是否可接受的变化所定义的验证数据。以下建议在应用时应注意bio-analytical常规药物的分析方法
•响应函数:一般情况下,相同的曲线拟合,考虑,配合和美好,决定在重新研究验证应该用于研究中的标准曲线。响应函数是由适当的统计检验根据实际标准点在每次运行验证。响应函数的变化之间的关系的预研验证和日常运行验证表明潜在的问题。
•QC样品应该用于接受或拒绝。QC样品与分析物矩阵飙升。
•系统适用性
•基于被分析物和技术,一个特定的SOP(或样本)应确定以确保最佳操作系统的使用。
分析师分析方法提供了所需的数据对于一个给定的分析问题,灵敏度、准确度、精度范围的分析,即本质上的最低要求的规范方法的目的能够分析所需的分析物在不同的矩阵与担保和确定性。分析方法引入到常规使用前需要验证;当条件改变的方法验证(例如,具有不同特点的乐器或样品不同的矩阵);每当方法是改变,改变原来的范围以外的方法。稳定性指示分析已经开发大量的药物,但他们中的大多数无法满足当前监管要求个人降解产物的分离和分析。所以提供的讨论是普遍和广泛使用。如今,这是一个强制性要求各药典知道杂质存在于API的。隔离和表征的杂质需要获取和评估数据,建立生物安全,揭示了需要和杂质分析药物在制药研究的范围。本文的目的是提供一种简单的方式来使用方法以一个正确的科学背景,提高质量分析方法的开发和验证。生物分析方法在常规药物分析中的应用也在考虑这篇文章。 Method development involves a series of simple steps. All the conditions are optimized as required for the purpose of the separation and the method is validated using ICH guidelines. The validated method and data can then be documented.
