紫荆叶乙醇提取物对LT4诱导的雌性白化大鼠甲状腺功能亢进的改善作用

摘要

以紫荆叶乙醇提取物为研究对象，研究紫荆叶乙醇提取物对黄疸病的调节作用甲状腺机能亢进白化wistar大鼠模型。本研究以血清三碘甲状腺原氨酸(T)、甲状腺素(T)和促甲状腺激素(TSH)浓度作为甲状腺功能的最终参数。甲状腺组织病理学检查。LT给药(0.5 mg/kg/d，连续12天)可使血清T水平升高，TSH 3 4水平下降。然而，同时给予EEBP (100 mg/kg, 150 mg/kg 12-30天)给LT诱导的甲亢动物逆转了所有这些作用，表明它们在调节甲亢中的潜力。PTU (10 mg/kg, 12-30 d)作为标准药给药。根据许多抗甲状腺的研究，PTU被选为标准药物。当与标准抗甲状腺药物丙基硫脲嘧啶(PTU)的相对疗效进行比较时，实验紫癜杆菌提取物似乎具有可比性。组织病理学分析证实了上述结果。

关键字

紫荆花紫竹；甲状腺机能亢进;类黄酮；Antithyroidic活动;丙基硫氧嘧啶;抗氧化剂

简介

甲状腺激素是正常发育，特别是中枢发育所必需的神经系统(中枢神经系统)。甲状腺疾病通常被描述为“伟大的伪装者”。这是因为他们可以有如此多样和可变的表现。甲状腺激素直接或间接地调节身体的几乎所有功能，包括代谢、呼吸、心血管、神经和生殖功能[1，2］．

这些激素水平的改变不仅会导致基础代谢率的改变，还会导致许多健康问题。患有这些疾病的人可能会表现出完全无关的症状，但进一步调查的根本原因是甲状腺活性下降。因此，对于卫生专业人员来说，始终警惕甲状腺疾病，并积极调查可能性是谨慎的。

三碘甲状腺氨酸(T_3.)和甲状腺素(T₄)激素被称为细胞代谢调节剂，与所有脊椎动物的不同生物过程有关[3.，4］．甲状腺功能障碍被认为是人类和人类最重要的内分泌疾病之一兽医［5］．甲状腺机能亢进是女性最常见的内分泌疾病[6］．女性甲状腺功能亢进症的患病率在0.5 - 2%之间，女性的患病率是男性的十倍。大约一半的甲状腺疾病病例涉及甲状腺功能亢进，另一半涉及甲状腺功能减退。

最近，越来越多的人要求在“回归自然”的治疗中使用植物，而不是使用合成药物，因为合成药物可能会产生比疾病本身更危险的不良影响。不同的草药具有调节甲状腺的活性;抗甲状腺和抗甲状腺。

Saxena等人研究了甲状腺调节活性无花果叶提取物在大鼠模型中显示的存在

叶提取物中的酪氨酸可能提示甲状腺活性无花果叶提取物依赖于建立的机制_3.T₄在体内形成。作者建议进一步开展研究，以充分探索其作用机制_3.T₄体内的形成[7］．

类似地，Azharuddin等人研究了抗甲状腺潜能热带榕属植物racemosa亚麻树皮白化病老鼠并得出结论热带榕属植物racemosa重要的是由于酪氨酸的存在，这可能有助于进一步的分子研究，以确定其抗甲状腺活性的确切机制[8］．

Nagarathna和Deepak Kumar Jha利用先前的事件回顾了草药植物和天然产物的抗甲状腺特性，并得出结论，异黄酮对甲状腺激素和下丘脑-垂体轴有深远的影响。这些结果表明，替代甲状腺治疗更重视改善生活方式和营养饮食，在天然甲状腺药物的同时提供精神支持[9］．

Krishnaveni评估紫荆花紫竹叶提取物具有抗氧化活性，并被证明是一种良好的抗氧化剂，需要进一步的鉴定以确认其多样化的治疗应用[10］．

试图进一步建立的药理学性质紫荆花紫竹(豆科)，Yahya等研究了黄芪甲醇提取物的保肝作用b .紫竹MEBP采用对乙酰氨基酚- (PCM-)诱导大鼠肝毒性。他们得出结论，MEBP具有潜在的肝保护活性，部分原因可能是其抗氧化活性和高酚含量，因此值得进一步研究[11］．

Megha Chaudhari研究了抗氧化能力紫荆花紫竹采用连续热渗法，用不同极性溶剂依次提取茎皮提取物。所测紫荆粗提物在体外均表现出不同程度的活性抗氧化活性．结果表明紫荆花紫竹可能是天然抗氧化剂的潜在来源[12］．

Neelima等人对植物的地上部分进行了一般植物化学筛选紫荆花紫竹(豆科)揭示了黄酮、碳水化合物、糖苷、单宁和萜类化合物的存在。他们还研究了该植物的肾保护活性，并得出结论，乙醇提取物的叶子和未成熟的豆荚b .紫竹拥有强大的nephroprotective活动［13］．

人们以多种方式使用这种植物来治疗皮肤病(白癜风和麻风病)、伤口、溃疡、咳嗽、痢疾、蛇咬伤、肿瘤、胀气、消化不良、痔疮和许多其他疾病[14，15］．

药用植物是传统医药体系、现代医药、营养保健品、食品补充剂、民间医药、医药中间体和合成药物的化学实体中最丰富的药物生物资源。许多工作者在药用植物方面作出了重大贡献。

合规性是合成药物的一个主要问题，因此人们认为值得探索现有的药物草药选择使用乙醇提取物紫荆花紫竹叶子。尽管植物性药物因其安全性和经济性逐渐成为患者的选择，但关于中药调节甲亢的科学研究尚少[16，17］．

这项研究的基本原理是b .紫竹叶子含有不同的类黄酮，如槲皮素[18]因此在本质上可能是抗甲状腺激素的[1］．紫荆花紫竹人们发现树皮在本质上有促甲状腺作用[19同时它的叶子含有类黄酮，本质上是抗甲状腺的。根据这一发现，紫荆叶提取物被测试抗甲状腺活性。

方法

研究中心

本研究于2013年1月至2013年10月在印度喀拉拉邦Kottayam, Ettumanoor, Cheruvandoor，圣雄甘地大学药学院药学系研究生和研究实验室进行。

材料与方法

植物材料

叶子紫荆花紫竹收集自喀拉拉邦Kottayam的M.G.大学校园，并由Jomy Augustine教授博士，HOD植物学帕莱的圣托马斯学院，科塔亚姆。植物部分是在1月至3月收集的。(2258号凭证)。

药物及化学品

甲状腺素(LT₄)、丙基硫脲嘧啶(PTU)、羧甲基纤维素、磷酸钾缓冲液、蛋氨酸、核黄素、硝基蓝四唑(NBT)、铁氰化钾、三氯乙酸(TCA)、硫代巴比妥酸(TBA)、过氧化氢。

动物

雌性白化Wistar大鼠体重180-220克，维持在标准以下畜牧业筛选条件为温度23±2℃，相对湿度55±10%，明暗循环12小时，筛选样品来自Cheruvandoor大学药学院动物实验室。动物喂食标准的实验室食物和广告随意在研究期间。实验在获得印度Kottaym Cheruvandoor大学药学院机构动物伦理委员会2013年根据IAEC no: 011 /MPH/UCP/CVR/13批准的实验方案后进行。

实验的细节

乙醇提取物的制备:植物材料在阴凉处干燥2周，并粗粉化。约280克粗磨干的叶子紫荆花紫竹林恩。在索氏仪的中间腔内放置一个多孔袋。以乙醇为溶剂进行热索氏提取。提取后，将乙醇蒸馏出来，并将提取物浓缩，以获得粘性物质。

植物化学的筛选

乙醇提取物的化学成分紫荆花紫竹叶(EEBP)经定性鉴定植物化学的分析（表1) [20.］．

表1:治疗方案已研究。

血清分析

在试验中，12日采集血液^th和30^th每日经眶后穿刺麻醉条件下(硫喷妥钠40 mg/kg)与血清分离。血清T浓度_3.T₄在Abott architect中采用chemilumnisen t微粒免疫分析法分析TSH;abbott诊断试剂盒(Medivision实验室，Kottayam)。

甲状腺组织病理学

在研究结束时，所有的动物都被颈椎错位．剖开胸廓和颈腔，分离出每只动物的甲状腺。分离的腺体从外来组织中清除，保存在新鲜制备的10%福尔马林中进行组织病理学分析。

肝脏匀浆分析(体外）

后删除甲状腺每只动物的肝脏也被分离出来。将离体肝脏在10% (w/v)冰水磷酸盐缓冲液(0.1 M, pH 7.4)中均质，并在15,000 x g下离心30分钟。然后分析LPO、SOD和CAT估计[21］．

统计分析

数据采用图垫棱镜5版软件进行处理。结果以均数±SD/SEM表示。变量比较采用单因素方差分析(ANOVA)非参数检验，事后Tukey 's多重比较检验，P值<0.05为有统计学意义。

结果

百分比收益率

紫荆叶乙醇提取物的提取率约为14.4%。

植物化学的筛选

初步植物化学筛选显示存在类黄酮，酚类化合物，生物碱，单宁，糖苷，萜类化合物和类固醇．

已分析

血清分析:从结果可以看出，在12^th除正常对照组外，其余四组均无显著性差异₄诱导组T含量升高_3.T₄值和减弱的TSH值。在EEBP给药30天后，升高T_3.T₄而高剂量的EEBP显示出与使用的标准PTU相当的活性(图1 - 3） (表2而且3.）.

表2。第12天甲状腺功能测试值(TFT)(甲亢诱导)。

表3。EEBP对第30天甲状腺功能测试值(TFT)的影响。

体外肝脏匀浆分析

从结果看，除正常对照外，LT₄诱导组LPO值升高，CAT、SOD值降低。EEBP治疗组可将升高的LPO水平逆转，CAT、SOD水平降低至正常水平，并呈剂量依赖性，高剂量EEBP与标准PTU组表现出相当的活性(图4） (表4）.

表4。EEBP对LPO、CAT和SOD值的影响。

甲状腺组织病理学

对甲状腺滤泡进行组织病理学分析。从得到的结果发现，LT₄诱导组甲状腺滤泡萎缩，胶质物质少。

讨论

草药正引起人们越来越多的兴趣，因为它们具有成本效益的，环保属性，真正缓解疾病状况。这种植物紫荆花紫竹在民间医学中被认为用于治疗甲状腺功能障碍。在本研究中，叶提取物紫荆花紫竹评估其对甲状腺功能障碍的改善效果。

黄芪乙醇提取物的植物化学初步筛选紫荆花紫竹叶(EEBP)中黄酮类化合物、生物碱、单宁、酚类、糖苷类、甾类和萜类化合物的含量最高，其中黄酮类化合物含量最高。类黄酮是一类大型苯并吡喃酮衍生物，普遍存在于植物中，具有抗氧化活性。黄酮类化合物抑制多种酶，包括甲状腺过氧化物酶(TPO)、5α-脱碘酶、甲状腺激素合成关键酶等[22，23］．

Divi和Doerge在他们的研究中发现，除了黄酮和黄酮外，几乎所有的黄酮类化合物都能抑制甲状腺过氧化物酶(TPO)对酪氨酸的碘化作用，但其作用强度明显不同[24］．实验动物食用黄酮类化合物可减少碘离子摄取和碘离子进入甲状腺激素[25］．在体外实验中，几种黄酮类化合物可减少碘离子的摄取，并抑制TPO依赖性碘化[26］．这些数据与黄酮类化合物在人类和实验动物身上观察到的抗甲状腺作用一致[22，27］．

黄酮类化合物含量丰富，具有较高的抗氧化性和抗甲状腺功能。甲状腺机能亢进症中甲状腺激素T_3.T₄TSH水平升高的同时，TSH水平下降，这种情况是在给予LT时实现的₄连续12天。本研究甲状腺功能亢进的结果与以往文献相关[1］．

在本研究中，采用LT₄根据Panda和Kar之前的报告，LPO有所增加。而LT组明显降低₄结果表明，该植物提取物可降低小鼠心肌损伤的肝毒性作用在甲亢动物中。另一方面，抗氧化酶、SOD和CAT水平提高到接近正常水平。LPO的降低和肝脏中酶活性的增加不仅表明植物提取物的安全性质，而且表明其抗过氧化价值[28］．

12例甲状腺功能亢进^th甲状腺功能测试结果。从30开始^th在体内试验结果表明，给药LT₄(阳性对照组)血清T含量升高_3.和T₄降低TSH水平、肝脏SOD和CAT活性。然而，当100 mg/kg(低剂量)和150 mg/kg(高剂量)的EEBP与等量的LT同时使用时₄，它逆转了改变的影响，证明显著降低的浓度，甲状腺激素(T_3.T₄)和肝脏LPO活性，同时伴有TSH水平、肝脏SOD和CAT活性的增加，表明提取物具有抗甲状腺和抗过氧化的性质。这可能是由于紫荆叶中含有大量的黄酮类化合物。

进行甲状腺组织病理学分析，并拍摄光显微照片(图5)，结果显示，与阳性对照组和正常对照组相比，处理动物的卵泡细胞发生了显著变化。未处理(对照组)动物的滤泡细胞呈立方状，上皮内充满胶质物质。另一方面，LT₄诱导动物(阳性对照)卵泡萎缩，胶质物质稀少，上皮细胞增生。EEBP给药组可逆转卵泡萎缩，胶质物质增加。PTU治疗组观察到几乎相似的组织学变化。组织病理学结果与既往文献相关[29］．这清楚地表明了ebp的PTU样活动。黄酮类化合物抗甲状腺活性的机制可能是碘络合作用、抑制甲状腺过氧化物酶、蛋白酶、5 α-脱碘酶，黄酮类化合物通过上述机制表现出抗甲状腺活性。

并

初步的植物化学筛选显示黄酮类化合物，酚类化合物，生物碱，单宁，糖苷，萜类化合物和类固醇的存在。从血清分析表明，EEBP显示T升高_3.T₄与PTU相比，TSH水平呈剂量依赖性降低。

从体外肝脏匀浆分析结果发现，与标准药物PTU相比，EEBP给药组LPO水平下降，CAT和SOD水平升高，呈剂量依赖性。

该研究证实，乙醇提取物紫荆花紫竹叶片具有显著的抗甲状腺和抗过氧化活性。这一结果鼓舞了进一步研究，以提出潜在的药理机制，并分离和表征可能的生物活性分子。

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