同时测定敌百虫、敌敌畏残留在橄榄比目鱼(Paralichthys olivaceus)的液相色谱-质谱分析:验证和应用药物动力学

文摘

敌百虫、有机磷杀虫剂用于水产养殖控制寄生生物。本研究评估快速、敏感和特定的质/ MS方法测定敌百虫、敌敌畏残留的组织橄榄比目鱼。进行分离一个Eclipse + C18柱梯度洗脱用wateracetonitrile 0.1%甲酸的流量0.3毫升最低为1。检测是由电喷雾正离子模式以氮为碰撞气体。在多反应监测(MRM)模式下,离子转换检测m / z 259→109(敌百虫)和m / z 221→108.9(敌敌畏)。得到了线性校正曲线具有良好的相关系数。检测的极限为敌百虫、敌敌畏(LOD)值分别为0.5和1.2μg公斤,分别与相应的量化(定量限)极限的值1.7和4.0μg kg - 1,分别。平均回收率介于88.2%和114%之间三个飙升浓度水平(5、10和100μg l - 1)与相对标准偏差(rsd)为等离子体低于13.8%,肌肉和肝脏。发达的分析方法应用于药代动力学研究敌百虫、敌敌畏橄榄挣扎后,政府通过浸渍浓度1或5毫克公斤。

关键字

敌百虫、敌敌畏、质/女士,药代动力学,橄榄比目鱼。

缩写

MRM:多反应监测;疼痛:乙酰胆碱酯酶;推广:最大残留限度;DP: Declustering潜力;S / N:信噪比(S / N);AUC:血浆浓度时间曲线下面积;λ2:λz;(t1/2)消除半衰期;Cmax:最大血浆浓度;达峰时间:时间到达Cmax; MRT: Mean Residence Time; CL/F: Total Body Clearance (CL/F); Vz/F: Volume of Distribution.

介绍

由于增加了寄生虫感染在水产养殖中,鱼病和生产率提高重要的问题(1]。为了减少经济损失,鱼农民利用替代措施来控制感染,如化学试剂。

有机磷化合物是广泛用作杀虫剂或除草剂。敌百虫(二甲基(2、2、2 - trichloro-1-hydroxyethyl)膦酸酯)(图1)是一种有机磷杀虫剂用于摧毁各种害虫,如鱼寄生虫在水产养殖和控制体外寄生虫和体内寄生虫的水生物种2]。此外,敌百虫是最常用的化学治疗在一些国家控制海虱、吸虫、杀线虫剂,绦虫,acanthocephalans [3,4]。最常建议治疗包括0.1到1毫克的应用L¹敌百虫的1天(5]。敌百虫也用于治疗阿尔茨海默氏症和bilharzial痢疾在人类身上,metrifonate[名义6]。当使用敌百虫在不稳定的条件下,如高温或pH值< 5.5 (7),在阳光下8),或者在碳酸水(9敌敌畏),迅速分解,这是危险的和有毒的水生动物,包括鱼、蟹、虾(10]。此外,敌敌畏,这是一种广谱杀虫剂、杀螨剂,展品的毒性高于其母体化合物和脂溶性。

敌百虫主要行为通过抑制乙酰胆碱酯酶(疼痛)活动骨骼肌的突触和神经肌肉接点,从而改变有机体的抗氧化防御系统(11]。此外,敌百虫据报道是有效治疗各种鱼类疾病在鲤鱼12],尼罗罗非鱼[10],鲈鱼[13],salmonid [14),和欧洲鳗鱼(15),和鱼的农民经常使用大量的敌百虫在水生环境中接受治疗。因此,敌百虫,以及其分解产物,可能存在于高浓度,反过来会导致中毒,损害人类红细胞(16]。因为上述可能危害人类健康,监管水平已经建立了由联合国粮食及农业组织/世界卫生组织(FAO / WHO)。2000年,联合国粮农组织/世卫组织建议最大残留限量(MRLs)敌百虫在动物肌肉,肝脏,肾脏,和50毫克公斤的脂肪¹(17]。然而,只有少数几个国家建立了MRLs敌百虫的鱼类。因此,监测方法敌百虫和敌敌畏非法储存在鱼组织是必要的,以确定相关的危害人类食用。

在过去的几年中,开发了几种方法测定敌百虫、敌敌畏的水果,虾,小麦,蔬菜,植物,和水,如气相色谱法(18- - - - - -20.),高效液相色谱法(HPLC) [21- - - - - -23),电化学发光(24),和化学发光25),以及一个安培计的疼痛生物传感器(26和电化学生物传感器27]。然而,GC监控会导致不正确的量化引起的热降解的敌百虫加热喷油器。此外,高效液相色谱法分析水、土壤、和石油样品不提供量化种有机磷农药残留的高灵敏度。此外,使用高效液相色谱法与紫外检测测定敌百虫的报道表现出较低的敏感度的不完整的吸收率敌百虫(28]。为了减少这些问题,液相色谱-光谱法(质)和质/ MS对杀虫剂的分析得到普及,特别是对极性化合物,包括生物体液,在GC和GC - MS的分析问题(29日]。几项研究已经报道,但是分析可以提供高灵敏度测定食品中的农药残留和人类血清29日- - - - - -31日]。川崎et al。32]筛选21有机磷农药在血质和克莱因和桤木33]筛选一系列质/女士使用的农药残留matrix-matched标准。特别是,(17)已经开发出一种质/ MS方法同时测定敌百虫、敌敌畏残留在动物组织。然而,迄今为止,很少有研究这两种农药的测定水生生物使用质/女士已经出版。出于这个原因,一个敏感、快速和敏捷的方法来识别和量化农药残留在水生生物是必要的。

橄榄比目鱼(Paralichthys olivaceus)是最常见的一种商业养殖鱼类在东亚,包括韩国,日本,中国34]。尽管一些水产养殖农场在韩国使用敌百虫控制海虱在橄榄挣扎或海鲷,只有少数官员研究监测其在海洋鱼类的剂量和用法。

这这项研究的目的是开发和验证一个新的、快速和选择性质/ MS方法同时检测敌百虫、敌敌畏残留在橄榄比目鱼。质量标准,如特异性、选择性、线性、灵敏度、准确性、精密、基体效应,稳定了验证方法。此外,我们评估后将这种方法应用于药代动力学研究的实用性管理敌百虫蘸鱼。

材料和方法

试剂和化学物质

敌百虫(C4H8Cl3O4P)和敌敌畏(C4H7Cl2O4P)标准从西格玛化工有限公司购买(圣路易斯,密苏里州)和丙烯酰胺(书、瑞士)。敌百虫用于政府购买来自大成微生物实验室有限公司有限公司(韩国首尔)。HPLC-grade甲醇、正已烷、乙腈和水从默克公司(达姆施塔特,德国)。

制备的标准解决方案

个人标准股票的解决方案敌百虫、敌敌畏准备1毫克毫升的浓度¹在甲醇和储存在密封的瓶-20°C。多标准工作方案(2、5、10、50、100μg L¹)是由稀释上述每个股票的解决方案通过HPLC-water 0.1%甲酸。这些解决方案是用来钉空白样品和准备matrix-matched校准解决方案。

动物

橄榄比目鱼平均重量为302±5克,没有从当地获得之前暴露于抗生素养鱼场(韩国釜山)。实验,分析维护在循环中使用鱼水族馆(能力,2吨)与流过过滤海水22°C。

样品提取和清理

等离子体

首先,0.5毫升的乙腈加入200μL血浆样本,当时涡混合10分钟。第二,样本是离心机在4°C 9000 rpm 10分钟。第三,上面清晰的层使用0.2毫米膜过滤(Advantec、东京、日本),然后转移到一个自动取样器瓶质/ MS分析。

肌肉或肝脏

一个2 g整除的肌肉或肝脏样本添加到包含20毫升的乙腈的试管。这些样本均质2分钟后,管受到震动10分钟使用一个旋涡混合器,其次是在13000转离心10分钟4°C。上层清液倒入200毫升是梨形瓶和蒸发干燥在40°C使用旋转蒸发器(Eyela、东京、日本)。获得干残渣是重组两次10毫升acetonitrilesaturated正己烷,转移到试管中,然后摇动10分钟。混合解决方案是允许独立,和己烷层被移除。洗出液收集和re-evaporated干燥使用旋转蒸发器在40°C。残留是重组1毫升50%甲醇和离心机在4°C 12000 rpm 10分钟。使用0.2毫米的上层清液过滤膜(Advantec、东京、日本)前质/ MS分析24 h内的准备。

色谱和质谱仪的操作条件

质/ MS分析的样品进行一个安捷伦液相色谱系统(安捷伦1290∞)加上一个安捷伦6430三重四重LC / MS系统(安捷伦科技,圣克拉拉,CA)。敌百虫、敌敌畏的分离是使用Eclipse执行+ C18柱(2.1×100毫米,1.8μm,安捷伦科技)。移动阶段A和B是脱气HPLC-water和乙腈,分别0.1%甲酸。用A和B所示的梯度表1,总运行时间17分钟。分离进行了取样器温度10°C和列温度40°C,流速为0.3毫升分钟¹和10μL注入体积。

表1:洗脱梯度的同时测定敌百虫、敌敌畏。

分析物的识别和量化使用质谱仪配备电喷雾电离(ESI)电离源在积极的运营模式。多反应监测(MRM)模式选择的量化敌百虫、敌敌畏,用下面的先驱产品离子转换和相应的参数:敌百虫,m / z 259→109 declustering潜在的70 V (DP)和碰撞能量(CE) 11电动车;敌敌畏,m / z 221→108.9 DP 80 V和12 eV的CE。第一和最丰富的MRM转变是用于量化,而其他转换用于资格。表2总结了优化MRM条件和保留时间敌百虫、敌敌畏。以下采用电离源参数:毛细管电压,4000 V;喷雾器天然气,氮气;L喷雾器气体流速,11分钟¹;40.0 psi喷雾器的压力;气体温度、350°C。数据采集和处理进行了使用质量猎人软件(版本。A.00.06.32;安捷伦科技)。

试验验证

选择性

评估干扰内源性化合物,六个鱼来源筛选和利用chromatographic-MS / MS条件相比空白血浆或肌肉样品的保留时间。和敌百虫、敌敌畏的混合物与空白血浆或肌肉样品飙升。

校准

校准曲线建立了使用浓度的0.1,1、2、5、10、20、50、100μg L¹,通过连续稀释混合物的敌百虫、敌敌畏。校准曲线构造使用matrix-matched标准相比获得的样本。整洁的样品校准曲线估计使用质量控制(QC)样本。QC样品准备使用0.2毫升的空白血浆浓度三个(10、50和100μg L¹敌百虫、敌敌畏。

灵敏度

检测极限(LOD)和定量的限制(定量限)确定最低标准的分析物的浓度上升空白血浆。LOD和定量限敌百虫、敌敌畏被定义为响应的signal-tonoise比(S / N) 3.3和10个,分别。

准确度和精密度

方法的精密度测试通过测量盘中和inter-day精度标准的解决方案。盘中精度决定从五个复制的QC样品飙升混合物敌百虫、敌敌畏在10,200年和2000年μg L¹同日(重复性),而inter-day精密确定连续超过五天(再现性)。这两个参数表示为结果的相对标准偏差(RSD %)。数据的可接受性的基准是在±15%的精度理论浓度和精度在±15%。

提取复苏和基体效应

敌百虫、敌敌畏的复苏是通过比较获得的平均峰值区域的QC样品,由分析过程,post-extracted标称浓度水平的10、50和100μg L¹敌百虫、敌敌畏。基体效应是评估通过分析标准的两种化合物溶解在流动相的提取和标准上升三个矩阵:等离子体,肌肉和肝脏。响应两种化合物的峰面积比率每个矩阵组比较。

稳定

确定股票的稳定解,三个复制敌百虫、敌敌畏股票的解决方案是刚做好的。在不同温度条件下的响应和时间与等离子体获得新鲜的股票的解决方案。血浆样品受到三个冻融循环,以及研究利用短期和长期的条件。自动取样器的稳定性是评价re-analyzing提取的分析物来确定延迟的影响分析在24或48小时在4°C。所有稳定性研究进行了浓度水平的10,200年和2000年μg L¹使用三个复制的QC样品。分析物被认为是稳定的,如果反应存储和新鲜样品不同的不到15%。

应用于药代动力学研究

评估优化方法的适用性,敌百虫、敌敌畏橄榄比目鱼的药代动力学分析是由浸渍。在适应期间,鱼维持3周在海水22°C,以确保所有人健康和喂养。鱼每天喂食两次与商业饲料(Woosungfeed、大田市、韩国),但是他们饿死1天前进行研究。控制鱼分别保持在一个干净的坦克在相同条件下。在每个治疗组10鱼保持在100 L坦克敌百虫的浓度1和5毫克公斤¹22°C 1 h。政府后,每个鱼被撤浸渍罐和立即转移到干净的海水。每个测试坦克是评估使用10复制,血液收集从每个鱼6 h, 12 h, 24 h, 2天、4天、7天、14天、21天。从尾收集的血液血管使用肝素化后1分钟内3毫升注射器管理。血浆样本立即离心分离的9000 rpm 10分钟在4°C和存储在一个冰箱在-70°C到分析。

药代动力学参数计算使用WinNonlin 5.1 (Pharsight公司,山景,CA)根据制造商的指示。血浆浓度时间曲线下的面积(AUC)从0到720 h后政府使用线性计算梯形积分法和辛普森的规则(药物计算系统,版本5.1,2006)。数据表示为所有实验的平均值±标准偏差。

结果与讨论

优化质/女士

这两个目标的分离和同时测定农药使用质/ MS进行优化。为了达到良好的形状和短期峰值,我们测试了不同的移动阶段,乙腈和甲醇等有机相的初步实验。我们认为添加剂水,如甲酸、有利于电喷射的过程;这种添加剂导致高电离的杀虫剂和良好的极性化合物的保留时间。流量和梯度洗脱是利用获得对称的山峰和足够的数据点为每个化合物。water-acetonitrile移动阶段包括0.1%甲酸与高效分离提供对称的峰流量0.3毫升的分钟¹,总运行时间17分钟。C18柱用于分离因为这样列已报告增加敌百虫的保留时间(28- - - - - -30.]。

的分子结构的目标是阐明与MRM量化验证性分析。图2显示了MS / MS产品扫描目标分析物的光谱在正离子模式下获得的。监控产品的最大响应离子和两个或三个前体离子,我们选择母离子在全扫描模式和寻找碎片离子利用declustering潜力和碰撞能量。表2分析总结了优化MS / MS条件敌百虫、敌敌畏。电喷雾电离产生的敌百虫、敌敌畏[M + H]⁺离子在259和221年,分别在积极的电离模式,用于量化和确认。敌百虫、敌敌畏的质子化了的形式被监控为前体离子,从光谱和碎片离子的确定在108.9 m / z 109和m / z,分别作为突出的产品生产离子(图2)。观察最大响应,碎片碰撞条件和能源为每个分析物进行了优化。因此,定量分析了在MRM模式下获得高灵敏度和选择性:m / z 259→221年和79年对敌百虫、敌敌畏和m / z 221→79.1。

提取

表2:优化MS / MS分析操作条件的敌百虫、敌敌畏。

因为大量的有机物在生物组织的选择性提取农药是复杂的。由于目标化合物的极性和热不稳定的性格,选择乙腈为溶剂,而由于其极性,导致良好的提取。鱼肌肉和肝脏含有脂肪的矩阵,有必要消除由清洁提取脂质。最常用的溶剂正己烷,溶剂能溶解脂肪,这提供了良好的农药样品均化后的复苏。敌百虫在高温下很容易转化为敌敌畏,因此,实验在4°C。

试验验证

特异性和选择性

特异性研究确认缺乏内源性物质的保留时间对分析物进行了研究。图3显示空白的典型色谱鱼浆或肌肉样品掺入了敌百虫和橄榄比目鱼样本浸渍后药代动力学研究。敌百虫、敌敌畏的保留时间是大约4.6和6.1分钟,分别。此外,空白血浆中的保留时间和肌肉样本浸渍后的样品在相同剂量1毫克公斤¹。没有观察到的干扰峰从内源性或外源性化合物的色谱保留时间的空白血浆或肌肉敌百虫、敌敌畏。

校准和线性

校准曲线是通过分析色谱的分析物的峰面积。敌百虫、敌敌畏标准的混合物连续稀释获得样本的范围从0.1到100μg L¹使用优化方法,进行分析。敌百虫校准曲线的方程y = x 295.5 + 144.2(峰面积,x:敌百虫浓度、n = 5)确定系数r2 = 0.999,和敌敌畏校准曲线的方程y = x 690.8 + 111.4(峰面积,x:敌敌畏浓度、n = 5)确定系数r2 = 0.999。这些观察结果表明,良好的线性敌百虫、敌敌畏。

灵敏度

敌百虫、敌敌畏的LOD和定量限的值确定使用的最小接受S / N值3.3和10个,分别为(表3)。敌百虫、敌敌畏的LOD值分别为0.5和1.2μg公斤¹,分别。敌百虫、敌敌畏的定量限值分别为1.7和4.0μg公斤¹,分别。LOD值通过我们的分析是低于获得的下摆等的研究。29日和朱et al。30.)而获得的价值高于定量限在王et al。(以前的研究17]。尽管高灵敏度可以通过使用获得极其敏感的质谱仪,这些限制是充分的分析目标化合物的橄榄比目鱼。

表3:验证结果分析血浆样品分析敌百虫、敌敌畏

准确度和精密度

QC样品在三个不同浓度(10,200年和2000年μg L¹)评估五个复制来确定内部和inter-day精密度和准确度。表4总结了内部,inter-day橄榄比目鱼血浆样品的精密度和准确度。敌百虫的盘中精度从98.8% - -101.4%不等,当天和精度≤2.1%。对敌百虫的inter-day精度从99.1% - -112%不等,和精度≤3.2%。此外,敌敌畏的盘中精度从97.7% - -114%不等,当天和精度≤2.6%。对敌敌畏的inter-day精度从96% - -101.9%不等,和精度≤3.1%。的准确性和精度值被发现是令人满意的,因为他们是一个良好的范围内(80% - -120%)。

表4:准确度和精密度的敌百虫、敌敌畏橄榄比目鱼等离子体。

提取复苏和基体效应

基体效应引起的内源性干扰样品没有检测到MS / MS可以减少或增加分析物的离子强度。评估矩阵对定量分析的影响,该地区获得一个完美的解决方案是比该地区获得一个空白样本矩阵与农药提取后飙升。通过评估这些响应率,抑制或增强的信号可以定量评估35]。这些影响被评估比较绘制区域和提取物的浓度三个矩阵(等离子体、肌肉和肝脏)与三种不同浓度的分析物在飙升后五个复制(表5)。

表5:复苏的敌百虫、敌敌畏和基体效应在样本(n = 5)。

基体效应被认为是存在如果观察到变化的响应和精度(即绘制峰面积< 85% > 120%)。然而,复苏的敌百虫在等离子体从98.8% - -105.0%不等,在肌肉88.4% - -98.8%,98.1% - -108.3%的肝脏。此外,复苏观察敌敌畏在等离子体从108.2% - -115.2%不等,在肌肉95.8% - -102.1%,88.2% - -93.7%的肝脏。范围在每种情况下,RSD < 14%,说明基体效应的缺失。因此,该方法适用于检测不同样品的残留,以及使用该方法的可能导致时间和节约成本。

稳定

表6显示了敌百虫、敌敌畏等离子体的稳定性样品的橄榄挣扎后暴露在不同的存储条件(10、200和2000三个浓度水平μg L¹在三个复制)。血浆样本稳定三个冻融循环后,与浓度从99.2% - -103.6%敌百虫、敌敌畏98.6% - -104.2%。自动取样器的稳定性研究在不同的时间,和敌百虫、敌敌畏加工样品的浓度在24 h范围从83% - -99.4%和90.4% - -104.7%,分别。此外,敌百虫、敌敌畏加工样品的浓度在48 h范围从92.7% - -109.5%和103.1% - -113.47%,分别。血浆样本显示短期稳定,86.4%−−110.9%敌敌畏,敌百虫和87.1% 107.6%和100.5%−114.7%敌百虫和长期稳定、98.4%−97.0%敌敌畏。这些结果表明,血浆样品不接受任何重大损失的敌百虫、敌敌畏,表明这些化合物是稳定的典型的治疗下,处理和储存条件。

表6:不同储存条件下稳定敌百虫、敌敌畏(n = 3)。

应用于药代动力学研究

发达分析应用于实际样品中残留的检测和决心,敌百虫进行管理。图4敌百虫、敌敌畏的血浆浓度时间曲线表明了农药管理由浸渍剂1或5毫克公斤¹。表7总结了药代动力学参数,如z(λλ₂),这是估计线性回归的终端数据点,消除半衰期(t_1/2),这是计算使用t_1/2= 0.693 /λ₂,最大血浆浓度(C_马克斯),时间达到C_马克斯(T_马克斯),平均停留时间(捷运)、血浆浓度时间曲线下的面积从0到无穷大(AUC)_{0 -∞}),估计全身间隙(CL / F)和体积的分布(V_z/ F)。

表7:药物动力学参数测定敌百虫的政府蘸橄榄油比目鱼的一剂1和5毫克公斤¹(平均数±标准差;n = 10)。

优化试验的结果证实了敌百虫、敌敌畏残留在对待橄榄比目鱼。管理1毫克公斤¹敌百虫、C_马克斯敌百虫是3.1±0.5 ng毫升¹和T_马克斯6.0±0.0 h。t_1/2和AUC_{0 -∞}h值分别为19.6±4.1,93.3±15.7 ng毫升¹分别h。然而,敌敌畏残留后没有检测到1毫克公斤¹敌百虫。后管理5毫克公斤¹敌百虫、C_马克斯敌百虫是31.8±3.7 ng毫升¹和T_马克斯6.0±0.0 h。t_1/2和AUC_{0 -∞}h值分别为14.4±2.8,616.2±25.2 ng毫升¹h¹,分别。C_马克斯敌敌畏是4.36±0.8 ng毫升¹和T_马克斯6.0±0.0 h。t_1/2和AUC_{0 -∞}h值分别为6.7±1.3,42.37±8.5 ng毫升¹h¹,分别。

这些结果表明,敌百虫、敌敌畏残留,主要是利用有机磷杀虫剂,血浆样品中检测到当低或高浓度的敌百虫管理。目前,很少有敌百虫残留的药代动力学性质的数据发表在橄榄比目鱼。然而,Eškinja [36)报道,敌百虫、敌敌畏残留在老鼠的血液样本检测后60分钟300毫克公斤的管理¹敌百虫和2.5毫克公斤¹通过静脉输液接种敌敌畏。小山(37)报道,敌百虫是十倍的浓度高于敌敌畏在狗的血液注射后6 h 200毫克公斤¹敌百虫。虽然1和5毫克公斤¹剂量敌百虫的生活挣扎在这个研究是小比先前研究,结果证实类似的观察对药代动力学参数。这些结果表明,验证方法适合评估政府的药代动力学研究敌百虫、敌敌畏在海洋鱼类36,37]。

结论

特定的、敏感和快速质/ MS方法同时测定敌百虫、敌敌畏在橄榄比目鱼是开发和验证。分析方法验证使用标准如特异性、选择性、线性度、灵敏度、准确性、精密、基体效应、稳定。该方法有一个短时间运行的时间和简单的样品制备过程。

使用这种方法,药代动力学研究进行了以下管理1或5毫克公斤¹敌百虫剂量蘸橄榄油比目鱼。尽管敌百虫、敌敌畏等离子体中检测到最初,化合物的短期效应(< 96 h)。此外,定量限足以检测终端的残留物。

有必要获得相关数据的应用有机磷化合物不同的鱼。从监测获得的数据可以用来确定MRLs鱼类的残留物。我们的结果证实需要持续的监控敌百虫残留在海洋鱼类,和这些结果可以帮助发展中使用该农药在水产养殖指南。

确认

这项研究得到了格兰特(14162 mfds856和14161 mfds853)的食品药品安全2015年(朝鲜)。

引用

1. Paperna即由寄生虫引起的疾病在温水的水产养殖的鱼。年度回顾的鱼类疾病。1991;41:155 - 194。
2. Eraslan G, et al。有益的松树蜂蜜对敌百虫的影响诱导小鼠的生化改变。生态毒理学和环境安全2010;73:1084 - 1091。
3. Schaperclaus W等al.Therapy鱼的疾病。:鱼的疾病。AA Balkema /鹿特丹,荷兰。1992;210 - 296。
4. 西弗斯G, et al。8杀虫剂的毒性评价大西洋鲑和体外影响isopode寄生虫,Ceratothoagaudichaudii,水产养殖1995;134:9-16。
5. 徐WN等al.Trichlorfon-induced在肝细胞凋亡Carassiusauratusgibelio的主要文化。臭氧层。2009;77:895 - 901。
6. Chang y等al.Acute和敌百虫的亚急性毒性Blacktetra (Gymnocorymbusternetzi)。生物医学的J Res 2008; 9:43-48。
7. 海耶斯WJ和法律。手册农药毒理学、类的杀虫剂。纽约(纽约州):学术Press.1990。
8. Choobkar n的影响应用不同浓度的敌百虫生存和增长的幼虫和里海kutum炒,Rutilusfrisiikutum。水产养殖亚洲2007;31。
9. Samuelsen OB。退化的敌百虫敌敌畏在海水:初步报告。水产养殖。1987;60:161 - 164。
10. 吉马良斯作为,et al。的敌百虫对乙酰胆碱酯酶活性的影响和组织病理学Oreochromisniloticus培养鱼。生态毒理学和环境安全2007;68:57 - 62。
11. Chang CC, et al。分子和免疫反应的巨大的淡水虾,Macrobrachiumrosenbergii,敌百虫的有机磷杀虫剂。水生毒理学2013;130:18-26。
12. Dunier M, et al .有机磷杀虫剂的影响:影响敌百虫、敌敌畏鲤鱼(Cyprinuscarpio)的免疫反应:第三。在体外对淋巴细胞增殖的影响和吞噬作用和体内对体液反应的影响。生态毒理学和环境安全1991;22:79 - 87。
13. Varo我,et al .敌敌畏对胆碱酯酶活性的影响的欧洲鲈鱼(Dicentrarchus labrax)农药生物化学和Physology 75:61 2003; 72年。
14. 严重的K,等。利用敌敌畏,敌百虫salmonid农业在1981 - 1988年在挪威。Acta Veterinaria Scandinavica 1990; 32:1-7。
15. 桑丘E, et al。子致命影响的一种有机磷酸酯杀虫剂在欧洲鳗鱼,欧洲鳗鲡。生态毒理学和环境安全。1997;36:57 - 65。
16. Catalgol BK, et al。敌百虫对丙二醛和抗氧化系统的影响在人类红细胞。毒理学体外21:1538 2007;1544年。
17. 王通用等al.Simultaneous残留测定敌百虫、敌敌畏在动物组织质/女士,食品添加剂和污染物:a . 2010;一部分27:983 - 988。
18. 小Q, et al .优化一滴微萃取过程测定有机磷农药的水和果汁气chromatography-flame光度检测。Talanta。2002; 69:848 - 855。
19. Lambropoulou哒,等。应用中空纤维液相micro-extraction测定杀虫剂的水。J Chromatogr 2005; 1072:55 - 61。
20. 刘Y, et al。测定敌百虫在动物源性食品残留热解气相色谱法。中国日报的分析实验室。2008;27:119。
21. 黄G, et al。高效液相色谱测定敌敌畏、水胺硫磷和甲基对硫磷植物叶片使用化学发光检测分析。Chimica学报。2002;474:21-29。
22. 汗英航等al.Determination敌百虫和乐果残留的番石榴使用高效液相色谱法。食品化学。2009;114:286 - 288。
23. 徐Z等al.Molecularly印迹固相萃取与高效液相色谱法测定微量敌敌畏残留在蔬菜。食品化学。2010;119:845 - 850。
24. 陈XM, et al .电化学发光检测luminol-CTAB敌敌畏农药的媒介。Talanta。2008; 76:1083 - 1087。
25. 孟L, et al .在线研究分子印迹固相萃取耦合化学发光传感器测定敌百虫的蔬菜。农业与食品化学杂志》上。2011;59:12745 - 12751。
26. 李XH等结构量子点修改敌百虫的乙酰胆碱酯酶生物传感器的检测。电解18:2163 2006;2167年。
27. 伦巴F等al.Use电化学生物传感器及气相色谱法测定敌敌畏在小麦。农业食品化学杂志。2005;53:9389 - 9394
28. 朱赫兹,et al。跟踪测定敌百虫的高效液相色谱法与紫外检测基于其催化效果过硼酸钠氧化联苯胺。Analyticachimicaacta 584:166 2007; 171年。
29. 哼哼,等。通过气相色谱法测定敌百虫农药残留的牛奶与μ-Electron捕获检测和gc - ms。毒理学研究2010;26:149。
30. 朱赫兹,et al .浊点萃取和跟踪敌百虫通过高效液相色谱法测定ultraviolet-detection基于其对联苯胺氧化催化作用。Analyticachimicaacta 614:58 2008; 62年。
31. 井上年代,et al。快速同时测定有机磷农药在人类血清质。J制药生物医学肛门2007;44:258 - 264。
32. 川崎年代等al.Screening有机磷农药使用液体chromatography-atmospheric压力化学电离质谱。JChromato。1992;595:193 - 202。
33. 克莱恩J和桤木l .适用性的梯度液相色谱串联质谱同时筛查100农药在作物。采用AOAC公认的Int。2003; 86:1015 - 1037。
34. 曹SH等al.Effect喂养率的增长和身体成分的少年橄榄比目鱼Paralichthys olivaceus美联储挤压颗粒在夏天季节。水产养殖2006;251:78 - 84。
35. 钱伯斯E, et al。系统全面的策略减少基体效应在LC / MS / MS分析。J Chromato B 2007; 852:22-34。
36. Eškinja i metrifonate持久性和分发和敌敌畏在老鼠:同时使用薄层色谱法定量测定。PeriodicumBiologorum 92:191 1990; 195年。
37. 小山K, et al。农业Chemicals-Organophosphates和百草枯中毒。更新在重症监护和急诊医学。激飞柏林海德堡。1990;10:494 - 501。