收到日期:2015年6月14日;接受日期:2015年7月28日;发表日期:2015年8月04
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一个简单、快速、经济的反相高效液相色谱(HPLC)方法已经成功地开发和验证的同时测定抗高血压和抗糖尿病药即缬沙坦和glimepiride纯形式(API)。高效液相色谱的方法开发之前,络合研究是用这些药物进行DSC证明没有这些药物之间的络合作用。因此,一个简单的高效液相色谱方法开发和验证根据我的指导方针,FDA和USP关于精度,精度和线性度。方法开发C-18保税硅胶柱(250 x 4.6毫米,5μ,Phenomenex, Inc .)和流动相组成3%的水乙酸乙腈(比例,v / v) 0.7毫升/分钟的流量。准确性,恢复被发现超过99%的缬沙坦和glimepiride。盘中、inter-day精度的新方法是小于最大允许限制(RSD %我£2.0)根据FDA的指导方针。相关系数的方法显示线性响应glimepiride缬沙坦的0.9993和0.9981。因此,开发方法被发现更简单、准确、重现性好、高效、耗时少,可以成功申请同时缬沙坦和glimepiride估计。
缬沙坦,Glimepiride、DSC、高效液相色谱方法开发和验证
缬沙坦是一种血管紧张素ii受体拮抗剂(arb)用于治疗心力衰竭患者不能容忍angiotensinconverting酶(ACE)抑制剂或有不满意对血管紧张素转换酶抑制剂(1,2]。Glimepiride是第二代血糖过低的药物。这是一个更有效的口服antihperglycemic属于磺酰脲类药物组和非胰岛素依赖型糖尿病患者有效的低剂量(3]。药物所示的结构图1。
图1:缬沙坦(A)和结构glimepiride (B)
DSC技术是最常用的(确定的药物之间的相互反应4,5]。因此,络合研究由DSC是一种体外评价thermoanalytical技术,即热流样本之间的差异和参考测量作为温度的函数(6]。在高效液相色谱法,分离密切相关的化学结构的药物可以有效地实现和特点的基础上极性、溶解度概要、pKa价值等等。这是一个广泛使用的技术来评估药物。
确保药物的有效性,质量和疗效评估和维护适当的剂量计划是非常重要的。制造商必须评估他们的产品生产过程,在不同的时间间隔期间及之后在每个产品的保质期。因此,需要研究确定的效力和有效性缬沙坦和glimepiride。几种方法之前已经在文献中报道的测定缬沙坦和glimepiride制药配方但没有报告这些药物的同时测定药物剂型。我们所知,这是第一次报告的同时测定缬沙坦和glimepiride使用non-buffer流动相含有3%的醋酸水溶液乙腈。
因此,快速、敏感的反相高效液相色谱测定方法的开发和验证根据FDA的指南,我,和USP关于精度,精度,特异性和线性(7- - - - - -11]。发达的方法被发现更简单、准确、重现性好,有效和更少的时间消耗,并成功应用研究缬沙坦和glimepiride配方。
工作标准glimepiride(99.25%)、缬沙坦(99.9%)礼物从药物国际有限公司,达卡,孟加拉国。高效液相色谱级乙腈和乙酸从活跃的精细化工有限公司,购买达卡,孟加拉国。
仪表差示扫描量热计(DSC)(模型:DSC-60 WS,日本岛津公司公司,日本)是用来记录DSC热分析图。高效液相色谱法(HPLC) (UFLC突出,日本岛津公司公司,日本)配备一个自动取样器(Model-SIL 20 ac HT)和紫外可见检测器(20 Model-SPD)是用于分析。数据被记录使用LC-solutions软件。Phenomenex C-18(4.6×250毫米,5μm)列用于分析。
DSC研究混合研究药物是否形成络合,这些药物是由混合的混合物1:1的比例(w / w / w)缬沙坦和glimepiride。纯药物的标准解决方案由溶解相当于10毫克每缬沙坦和glimepiride 10毫升容量瓶使用混合water-acetronitrile (50:50)。最终的解决方案是蒸发干燥的水浴低于60°C和混合物被表示为颈- 1通过DSC和评估体外。实验是在一个温度范围从30ºC 600ºC, 10°C /分钟的速度增加的温度下氮气的流量20毫升/分钟。然后4毫克药物混合物(颈- 1)是在一个铝锅,妥善密封。样品密封的DSC热分析图记录铝锅和融化的样本的峰值温度和熔化热测定的DSC热分析程序痕迹。个别药物的温谱图也以同样的方式。铟(熔点156.0°C)被用作标准校准仪器。
研究高效液相色谱法(HPLC)高效液相色谱是色谱技术分离化合物的混合物,用于识别、量化和净化单个组件的混合物。峰的保留时间和吸光度的解决方案可能是一个物种的改变由于交互与其他物种。在目前的研究中,按照以下方法进行高效液相色谱分析。
流动相的制备:准备3%乙酸水溶液(pH值2.5),30毫升冰醋酸增加了大约500毫升的双重蒸馏水水1000毫升容量瓶最后加起来。然后解决方案是用近10分钟,过滤通过0.22μm微孔过滤器。高效液相色谱级actonitrile也过滤和脱气使用前到高效液相色谱系统中。
色谱条件:所有分析都是在环境温度下进行权力平等主义的条件。3%乙酸水溶液和包含的流动相乙腈比例(v / v)的比率在0.7毫升/分钟的流量。注射量保持在20μl分析。分析之前,每一个标准和样品是透过0.45μm过滤嘴。列洗出液监测在240海里。
准备标准的解决方案:相当于30毫克每种药物的称重和100毫升容量瓶中。起初,药物溶解分别在50毫升乙腈和蒸馏水(50:50),然后添加溶剂是达到标准的容量100毫升。每个解决方案的浓度是240μg /毫升。
然后50毫升摄于从每个解决方案的一个烧瓶glimepiride、缬沙坦、和妥善解决混合,称为c - 2的解决方案为每个药物浓度是100μg /毫升。然后通过计算稀释过程中,各种浓度的解决方案准备。
特异性:的特异性方法评估以确保没有辅料的干扰存在于制药产品。特异性研究了注射标准溶液和缬沙坦和glimepiride制药产品。
线性:线性40,45岁,50岁,55至60μg /毫升的标准药物解决方案准备。为此4毫升,4.5毫升,5毫升,5.5毫升和6毫升原液从c - 2解决方案在10毫升容量瓶和体积10毫升是由添加溶剂的马克体积瓶。然后从每个解决方案20μL被auto-sampler注入高效液相色谱法。监测分析240海里,重复三次。的平均峰面积与浓度和校准曲线绘制被用来计算斜率和截距值以及评估该方法的线性计算系数的相关性。
准确性:一个分析方法的准确性表达期望值之间的亲密和价值发现。表达的是计算回收率(% R)的药物恢复。在这种情况下,三个连续的分析三种不同浓度的标准解决方案的缬沙坦和glimepiride(10μg /毫升,20μg /毫升30μg /毫升)进行了利用发达的方法。
再现性:再现性表达一系列测量结果之间的亲密协议从多个采样相同的同质样本。它是由内部检查和inter-day重复性复制注射后的反应,用公式表示为%相对标准偏差在反应[% RSD = 100%(标准差/意味着)x]。在当前的方法开发和验证协议,精度是由三个复制分析每个20μg /毫升的浓度和30μg /毫升标准缬沙坦和glimepiride解决方案使用该方法。
高效液相色谱的方法开发之前,络合研究缬沙坦和glimepiride通过DSC和发现没有络合作用发生在这三个药物(图2)。然后后,反相高效液相色谱方法开发和验证根据我,USP和FDA指南同时测定缬沙坦和glimepiride。缬沙坦和glimepiride的混合物的DSC热谱显示没有任何药物间相互作用。
图2:高效液相色谱色谱缬沙坦和glimepiride。
在高效液相色谱分析所有的药物都检测到240海里用流动相组成3%的醋酸溶液和乙腈的比例的比值(v / v)在环境温度与流速为0.7毫升/分钟。注射成交量保持在20μL标准和样品。缬沙坦和glimepiride被发现的保留时间为8.6±0.1,13.7±0.1分钟,分别为(图2)。
市场准备的混合物含有缬沙坦和glimepiride分析观察方法的特异性。没有检测到峰的保留时间接近缬沙坦和glimepiride证明方法的高度特异性。
校准曲线,五个不同浓度(40μg /毫升,50μg /毫升,60μg /毫升,70μg /毫升和80μg /毫升)。当这些浓度的峰值区域,好相关系数(r2), 0.9993为缬沙坦和0.9981 glimepiride得到,在可接受的范围之内的准则。这些显示良好的线性关系的新开发的方法(图3)
图3:校准曲线的缬沙坦(B)和glimepiride (C)。
精度评估在三种不同浓度进行连续分析(n = 3)使用该方法和复苏的值被表示为百分数之间的平均浓度为这两种药物发现和添加浓度。复苏的平均百分比被发现在98 - 103%缬沙坦和glimepiride 10μg /毫升,20μg /毫升,30μg /毫升(表1)是在可接受的范围之内的。%恢复API药物的可接受的范围是97 - 103% (Ref)。该方法的重现性是由内部检查和inter-day重复性复制注射后的反应的标准解决方案(20和30μg /毫升)。再现性是表示为%相对标准偏差(%相对标准偏差)。水平分析了三次在同一天(盘中变化)和其他三天(inter-day变化)(表2)。
| 药物 | 浓缩的注入。(μg /毫升) | 浓缩的恢复。(μg /毫升) | %的复苏 |
|---|---|---|---|
| 缬沙坦 | 10 | 10.30 | 103.00 |
| 20. | 19.73 | 98.65 | |
| 30. | 29.68 | 98.33 | |
| Glimepiride | 10 | 10.12 | 101.20 |
| 20. | 20.10 | 100.50 | |
| 30. | 29.88 | 99.60 |
表1:缬沙坦和glimepiride的准确性。
| 药物 | 一天 | 浓缩的注入。μg /毫升) | 意思是恢复(μg /毫升) | SD | 盘中%相对标准偏差 |
|---|---|---|---|---|---|
| 缬沙坦 | 第一天 | 20. | 19所示。81年 | 0.23 | 1.13 |
| 第二天 | 20. | 19.34 | 0.24 | 1.22 | |
| 把 | 20. | 19.95 | 0.19 | 0.93 | |
| Glimepiride | 第一天 | 20. | 19.14 | 0.22 | 1.13 |
| 第二天 | 20. | 19.34 | 0.21 | 1.22 | |
| 把 | 20. | 19.95 | 0.17 | 0.93 |
表2:缬沙坦和glimepiride盘中精度。
以来,该方法的开发和验证根据FDA的指南,我和USP精度,精度和线性度,适合常规分析样品和api。
药物的疗效取决于一些绝对要求,比如质量、效能等。很明显,一个小的改变配方或生产过程的变化或使用低质量的材料包括api可以影响药物的疗效主要有害影响到病人。因此,质量和疗效评估和维护适当的剂量计划强烈需要确保药物的有效性。因此,我们打算研究最常用的抗高血压和抗糖尿病的药物的效力即缬沙坦和glimepiride经常规定在孟加拉国。
为了达到这个目的,一个快速和敏感的反相高效液相色谱(rp)方法开发和验证根据FDA的指南,我和USP精度,精度、特异性和线性。新开发方法已经发现更简单、准确、重现性好,有效和更少的时间消耗,并已成功应用的同时测定抗高血压和抗糖尿病药物即缬沙坦和glimepiride。
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