HPTLC同时测定地氯雷他定和孟鲁司特钠的含量

摘要

建立了高效薄层色谱法对地氯雷他定(DSLR)和孟鲁司特(MON)联合剂型进行生物评价。采用Merck HPTLC硅胶G60 F254铝板，以乙醇:甲醇:甲酸氨溶液:氨(9:1:0. 5:5 5 v/v/v/v)为流动相，分离厚度为250 μm的组合物。HPTLC分离两种药物，然后在287 nm吸光度模式下进行密度测定。DSLR和MON的Rf值分别为0.19±0.03和0.86±0.03，药物的溶解令人满意。DSLR的0.06 μg/spot-0.36 μg/spot (r2>0.996)和MON的0.12 μg/spot-0.72 μg/spot (r2>0.999)为校准曲线。该方法在准确度、精密度、线性度、检出限、定量限等方面进行了验证。所建立的HPTLC方法可用于原料药和制剂中单反、单反含量的测定。

关键字

地氯雷他定(数码单反相机);孟鲁司特钠;效果;方法验证

简介

联合药物治疗是使用两种或两种以上的药物制剂单独使用，或在单剂量配方中使用两种或两种以上活性成分的固定剂量组合。提高疗效和降低毒性的药物组合在治疗多种复杂疾病中发挥着重要作用。通过筛查潜在的药物-药物相互作用、禁忌症或两者兼有，并通过提出治疗建议，以达到最佳反应，而不增加潜在的药物不良相互作用，适当地使用该疗法。据估计，全世界20%的过敏性疾病患者可采用联合疗法治疗[1］．哮喘是由过敏、病毒性呼吸道感染和空气中的刺激物引起的支气管气道炎症性疾病，而遗传因素也会导致哮喘。在过去几十年里，全球哮喘和过敏的患病率有所增加[2］．

孟鲁司特是一种白三烯受体拮抗剂(LTRA)，用于治疗哮喘和缓解季节性过敏症状。它通常是口服的。孟鲁司特是CysLT1拮抗剂;它通过与肺和支气管中的半胱氨酸白三烯受体CysLT1结合来阻断白三烯D4(以及二级配体LTC4和LTE4)的作用。这减少了白三烯引起的支气管收缩，从而减少炎症[3.］．MON的化学结构示于图1．地氯雷他定(descarboethoxyloratadine)是氯雷他定的非镇静代谢物，是第二代长效抗组胺药物，具有选择性外周H1受体拮抗活性。它通过抑制人肥大细胞/嗜碱性细胞中IL-4、IL-6、IL-8和IL-13等促炎细胞因子的释放，以及抑制内皮细胞上粘附分子p -选择的表达，表现出抗过敏特性[4］．单反相机的化学结构如图所示图2．

目前，针对阻断两种介质作用的联合治疗可能比单独治疗更好地预防早期哮喘反应。地氯雷他定和孟鲁司特联合使用比单独使用任何一种阻滞剂都有更好的疗效。

通过全面的文献调查，目前用于孟鲁司特钠(10 mg) +地氯雷他定(5 mg)组合的检测和定量的分析方法很少[5-22］．

然而，根据文献修订，没有报道这种组合的HPTLC分析方法。本研究旨在建立简便、特异、准确、精密度高的HPTLC法测定孟鲁司特钠与地氯雷他定联合使用时的含量。

实验

仪表

HPTLC使用Camaglinomat 5涂抹器，TLC Scanner 3由wincat -平面色谱方式控制，版本-1.2.6 (Camag, Muttenz, Switzerland)，默克薄层色谱板涂有硅胶G60F254在铝板上(默克化学有限公司，darmstadt, Germany)作为固定相。

参比物质、试剂和化学品

以孟鲁司特钠和地氯雷他定为赠品样品。甲醇AR级购买自默克实验室和Qualigens精细化学品有限公司，印度。

色谱条件

分析前，用甲醇预显影清洗硅胶G60F254 HPTLC板，在110°C活化5分钟以去除溶剂。将MONT和DSLR的样品溶液用带有100微升样品注射器的Linomat-5自动斑点仪定点到10 × 10 cm的平板上，设定带长6 mm，迁移距离85 mm，狭缝尺寸5 × 0.45 mm。平板在双槽室中显影，流动相为乙醇:甲醇:甲酸氨溶液:氨(9:1:0. 5:5 5 v/v/v/v)，预饱和20分钟。所使用的辐射源是一盏氘灯，发出200纳米到400纳米之间的连续紫外光谱。所有测定均在环境温度下进行，检测波长为287 nm。

优化腔室饱和时间

在双槽腔一侧加入固定的流动相体系，评估5 ~ 20分钟内不同饱和时间的效果。研究发现，饱和时间达到15分钟会引起Rf值的变化和边缘效应。而20分钟的饱和时间可以得到致密的斑点，因此将20分钟的饱和时间定为进一步研究。

解决方案的准备

单反标准原液配制:将约10mg的单反转移到10ml的容量瓶中，用甲醇制备1000 mcg/ml。从上述浓度取1毫升配制至10毫升，得到浓度为100 mcg/ml。

MON标准原液配制:将约10mg的MON转移到10ml的容量瓶中，用甲醇制备1000 mcg/ml。从上述浓度中取1ml配制至10ml，得到浓度为100mcg /ml。

配制混合标准溶液:从上述溶液中，将3ml DSLR和6ml MON转移到10ml容量瓶中，得到浓度为30mcg /ml DSLR和60mcg /ml MON的混合溶液。

配方估算:不少于10片，计算平均重量后，他们是粉末状的。将相当于5mg单反相机和10mg MON的粉末分别转移到100ml装有甲醇的体积瓶中，超声45分钟。溶液通过whatman滤纸提取。从上述溶液中取6 ml，配以10 ml甲醇和8 μl体积，在色谱板上斑点，显影、扫描并记录综合峰面积。

结果与讨论

方法开发和优化

为了开发这两种药物的HPTLC，进行了各种流动期试验。在各种试验中，含有乙醇:甲醇:甲酸铵溶液:氨(9:1:0. 5:5 5 v/v)混合物的试验带致密致密，被选择作进一步研究。所用板材为预涂硅胶G60 F254。固定色谱条件如下所示。

固定色谱条件:

固定相:预涂硅胶60 F254铝板。

流动相:乙醇:甲醇:甲酸铵。

溶液:氨水(9:1:0.5:0.5 v/v/v/v)。

饱和时间:20分钟。

迁移距离:85毫米。

带宽:6mm

狭缝尺寸:5 × 0.45 mm。

辐射源:氘灯

扫描波长:287 nm

R_f地氯雷他定:0.19±0.03

孟鲁司特钠:0.86±0.03

方法验证

根据ICH指南验证了同时估计单反和单反的测试方法[22］．对线性度、精度、范围、LOQ、LOD等参数进行了测试。

线性和范围:采用Linomat V全自动滴样仪在薄层色谱板上检测不同体积的标准溶液(2、4、6、8、10、12 μl)。在固定流动相饱和的10x10双槽室中显影，并使用CAMAG薄层扫描仪3进行扫描。DSLR和MON的Rf值分别为0.19±0.03和0.86±0.03，有峰面积。

在DSLR浓度为0.06 μg/点~ 0.36 μg/点，MON浓度为0.12 μg/点~ 0.72 μg/点范围内，线性回归结果良好表1而且2，求出的斜率、截距和相关系数值见表3．校准图如图所示图3而且4．在不同浓度下获得的标准密度图显示于图5-10．

表1。数码单反校准数据。

表2。MON的校准数据。

表3。单反和MON的回归数据。

精度:通过重复测定DSLR和MON两种浓度(0.12 μg/点、0.18 μg/点、0.24 μg/点、0.36 μg/点)的混合标准溶液，获得了方法的精密度。计算日间、日间和重复性(分别为样品测量重复性和样品应用重复性)的% RSD表4-7．

表4。单反的日内和日间精度。

表5所示。MON的日内和日间精度。

表6所示。单反重复性样品测量及样品应用。

表7所示。可重复性样品测量及样品应用。

检测限(LOD)和定量限(LOQ):分析物可检测的最低浓度DSLR为0.03 μg/点，MON为0.06 μg/点，DSLR为0.06 μg/点，MON为0.12 μg/点。

色谱板稳定性:显影后的色谱板暴露在大气中，分析物容易分解。因此，有必要对该板块进行稳定性研究。研究了不同时间间隔下分析物在平板上的稳定性，并将峰面积与新扫描平板的峰面积进行了比较。显影板稳定1小时。

所提出方法的应用

将所建立的方法应用于片剂中单反相机和MON含量的测定。注射样品溶液(0.24 μg/点和0.48 μg/点)，记录密度图，见图11而且12采用峰面积法定量。结果显示在表8．

表8所示。配方分析。

结论

目前研究工作中开发的同时估计单反和单反的方法，已经按照ICH指南规定了量化方法。高性能薄层色谱法是同类方法中的第一个，并提供了良好的分析范围的两种药物片剂。

鸣谢

作者在此感谢T. K . Ravi博士，M.Gandhimathi博士，Mr。斯特宾·约瑟夫和他在scrims的同事们的灵感和动机，这是写科学手稿的真正公式。

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