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帕蒂尔SV,帕蒂尔,和驳船VUgydF4y2Ba*gydF4y2Ba
PDEA的Shankarrao Ursal制药科学学院和研究中心,Kharadi,浦那411014年,印度马哈拉施特拉邦gydF4y2Ba
收到日期:gydF4y2Ba07/07/2014;gydF4y2Ba接受日期:gydF4y2Ba05/08/2014gydF4y2Ba
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色谱法gydF4y2Ba虽然主要分离技术,大多数从事化学分析转基因植物是SEC非常强大的技术,蛋白质纯化,聚合物特性等。美国证券交易委员会的主要优点是它的温柔non-interaction样本,使保护生物活性高,所以交会有很多生物技术行业的重要性。综述的基本理论、原理和应用生物技术行业的交会。gydF4y2Ba
凝胶排阻层析法、蛋白质纯化、应用,生物技术产业。gydF4y2Ba
色谱法gydF4y2Ba可能是最强大的现代化学分析技术。凝胶排阻色谱(SEC)是一种色谱方法中分子在溶液中由它们的大小,和在某些情况下分子量。它通常应用于大分子或大分子复合物,如蛋白质和工业聚合物。通常,当水溶液中是通过列,用于运输样品的技术被称为凝胶过滤色谱法,与凝胶渗透色谱法名称时使用的有机溶剂作为流动相。证券交易委员会是一个广泛使用的gydF4y2Ba聚合物gydF4y2Ba表征方法,因为它能够提供良好的摩尔质量分布(Mw)聚合物[1]的结果。gydF4y2Ba
格兰特亨利车床和科林·R鲁斯温尺寸排阻色谱法的先驱,他们开始这项技术对淀粉凝胶分离不同大小的分析物的矩阵,之后海关检查员每Flodin Porath和葡聚糖凝胶。gydF4y2Ba
交会是一种广泛使用的技术的净化和分析合成和生物聚合物,如蛋白质、多糖、核酸。生物学家和生物化学家通常通常使用凝胶介质gydF4y2Ba聚丙烯酰胺gydF4y2Ba在低压力下,右旋糖酐或琼脂糖和过滤器。高分子化学家通常使用二氧化硅或交联聚苯乙烯中更高的压力。这些媒体称为固定相[2]。gydF4y2Ba
的固定相gydF4y2Ba
在SEC选择性的目的是仅仅依赖固有的多孔性材料。SEC通常使用的矩阵组成的天然聚合物,如琼脂糖或右旋糖酐,但也可能是由合成聚合物聚丙烯酰胺等。从这些聚合物凝胶可能形成交联形成三维网络。可以获得不同的孔隙大小略有不同的交联量。交联度将定义孔隙大小。第一个商业交会媒体、交联,交联葡聚糖、葡聚糖组成的gydF4y2Ba环氧氯丙烷gydF4y2Ba。现在许多凝胶商用在范围广泛的疏密度[3]。gydF4y2Ba
的流动相gydF4y2Ba
相比其他类型的媒体的选择性交会矩阵不是通过改变流动相的组成可调。优化没有吸附有关,应考虑流动相载波相位,而不是一个拥有大量色谱法。然而,样本可能需要一个定义良好的缓冲溶液pH值和离子成分选择保存的结构和生物活性物质的利益[3]。gydF4y2Ba
理论与原则gydF4y2Ba
原则gydF4y2Ba
尺寸排阻色谱(SEC)混合物的分离是基于分子大小(更正确,他们的流体力学体积)的组件。分离是通过微分排除或加入的溶质通过固定相组成的heteroporous(大小不同的孔隙)交叉链聚合物凝胶或珠子。这个过程是基于不同的渗透速率的溶质分子的内部凝胶粒子。与样品尺寸排阻色谱法涉及温柔的交互作用,使生物分子的高保留活动[4]。gydF4y2Ba
尺寸排阻色谱法的基本原理非常简单。一个列或多孔的凝胶粒子矩阵与一个合适的流动相平衡的分子分离。大分子是完全排除在毛孔将通过凝胶颗粒之间的空间或矩阵,将首先在废水。小分子会分布在流动相之间的内外分子筛然后通过列以较慢的速度,因此出现在废水[4]。gydF4y2Ba
理论[2][5]gydF4y2Ba
SEC用于分离和分析各种各样的化学物质,包括合成聚合物和gydF4y2Ba生物聚合物gydF4y2Ba。它是一个强大的和流行的方法净化并确定蛋白质的分子量。SEC列的总量可能被视为包含三个隔间,签证官、Vi和Vg。总体积是计算方程,gydF4y2Ba
Vt = VgydF4y2BaggydF4y2Ba+ VgydF4y2Ba我gydF4y2Ba+ VgydF4y2Ba0gydF4y2Ba
外面的空隙体积签证官代表体积的珠子。签证官是由使用一个非常大的分子比凝胶的排除范围大。蓝色葡聚糖通常是用于此目的。蓝色葡聚糖是非常大的gydF4y2Ba多糖gydF4y2Ba用蓝色染料共价键的分子量约2000000哒。Vg的体积是被固体基质凝胶或珠子。珠内的空间被称为包含或内部体积,Vi。确定这个量,使用的是一个非常小的分子。通常,一种氨基酸与荧光分子如dinotrophenyl或抗坏血酸是用来发现Vi。小的溶质自由输入的interstics凝胶。乐队最大值为小分子出现在列的最后因为更高程度的缺陷,在洗脱体积对应(Vi +签证官)。中间的分子大小和可以进入凝胶的interstics kd,一部分需要洗脱体积溶质Ve、表达的方程,gydF4y2Ba
VgydF4y2BaegydF4y2Ba= VgydF4y2Ba0gydF4y2Ba+ KgydF4y2BadgydF4y2Ba六世gydF4y2Ba
这个方程描述的行为列参照溶质,获得列的筛选了。分子可以进入凝胶的间隙,kd = 0 & =签证官gydF4y2Ba
应用程序gydF4y2Ba
生物分子的)交会净化:gydF4y2Ba凝胶排阻色谱(SEC)是一种流行的方法分离生物分子基于它们的大小。主要是应用于分离蛋白质和核酸等生物聚合物,即水溶性聚合物。这个系统也被称为gydF4y2Ba凝胶过滤gydF4y2Ba,通常用葡聚糖凝胶或琼脂糖作为矩阵的珠子。小分子明显慢通过列比更大的分子。不能混合凝胶电泳,在分离方面有着巨大的差别原则。秒不需要电流和筛分效果不会单独的小分子。[6]gydF4y2Ba
b)测定分子大小的凝胶排阻层析法(凝胶过滤):gydF4y2Ba蛋白质在溶液中,或其他大分子,被应用到一个列定义支持介质。蛋白质的行为取决于它的大小,毛孔的媒介。如果蛋白质小相对于孔隙大小,它将分区到后从列中出现更大的蛋白质。除了蛋白质的大小,这种技术也可以用于蛋白质纯化,纯度分析和研究蛋白质之间的相互作用。[7]gydF4y2Ba
脑膜炎球菌疫苗c寡糖共轭的c)评价凝胶排阻层析法/多角度激光光散射:gydF4y2Ba三种不同的平均分子质量gydF4y2Ba脑膜炎球菌gydF4y2BaC糖类(察觉男人)蛋白结合疫苗和估计使用高效液相色谱检测其组成蛋白质的凝胶排阻色谱(SEC)多角度激光光散射(购物中心)和折射指数(RI)检测(秒/商场)。[8]gydF4y2Ba
d)秒& SE-HPLC蛋白质:gydF4y2BaSE-HPLC是另一种方法得到好的解决大分子在很短的时间内。基本原则是相同的交会和SE-HPLC。高效液相色谱法提供的优势是好的分辨率和速度分析,列没有改装的可重用性和再生,重现性高的严密控制参数影响分离的效率,容易自动化仪器的操作和数据分析。[9]gydF4y2Ba
e)多价物的分子特性和激光光散射仪Multiangle凝胶排阻层析法:gydF4y2Ba的取代度和化合价gydF4y2BabioconjugategydF4y2Ba反应产品评价很糟糕或者需要多个时间,product-consuming化学表征方法。这些方面成为重要的分析和优化昂贵的多价生物活性轭合物的效力。在这项研究中,凝胶排阻层析法和激光光散射仪multiangle搭配折射率检测和紫外线光谱(SEC-MALS-RI-UV)的反应效率,取代度,和产品的价结合的多肽或蛋白质生物聚合物支架,也就是说,gydF4y2Ba透明质酸gydF4y2Ba(HyA)。信息使用这种技术可以改善高分子工程设计原则,有助于更好地理解多价在生物大分子相互作用系统。[10]gydF4y2Ba
biothearpeutics &他们聚集f)分析:gydF4y2Ba近年来,使用和biotherapeutics数量显著增加。基础疗法,对这些主要蛋白质定量的聚合特别关注其潜在影响疗效和免疫原性。这个需要有新的兴趣秒。[11]gydF4y2Ba
g)高性能SEC系统描述,减少离子和固定相的疏水相互作用的蛋白质。系统可用于确定可靠先生10000 & 70000。进一步应用程序将单独的蛋白质制备(毫克)范围内。[12]gydF4y2Ba
h)脱盐:-gydF4y2Ba常用的交会是脱盐蛋白质或核酸样本。感兴趣的分子中筛选了孔隙体积,而小分子凝胶孔隙被保留。获得所需的分离,这种凝胶应该有一排阻极限明显小于感兴趣的分子。[1]gydF4y2Ba
我)特性的淀粉凝胶排阻层析法:gydF4y2Ba检查剪切降解凝胶排阻色谱(SEC或GPC)的原淀粉在洗脱液系统(二甲亚砜和LiBr)的淀粉完全溶解。明显的大小分布的变化与流量建议广泛的剪切分离gydF4y2Ba支链淀粉gydF4y2Ba地区。对于较小的尺寸,主要是直链淀粉,没有明显为低流量分离。[13]gydF4y2Ba
j)常规高效凝胶排阻层析法来确定分子大小分布的b型流感嗜血杆菌结合疫苗:gydF4y2Ba高性能尺寸排阻色谱法被用来确定的分子大小分布gydF4y2Ba流感嗜血杆菌gydF4y2Bab型(Hib)共轭疫苗。高分子量准备的本地Hib荚膜多糖与破伤风类毒素和低分子量与Hib疫苗低聚糖与CRM197无毒突变白喉蛋白质进行分析。列有不同的分离范围被用于两种疫苗。这种方法显示是快速、准确和可再生的不同很多Hib疫苗的组成由不同的制造商。它可以取代更费时gydF4y2Ba色谱gydF4y2Ba方法使控制当局雇佣一个方法论的方法对于不同的Hib疫苗。[14]gydF4y2Ba
k)交会是标准的技术分析单克隆抗体及其聚合物。[15]gydF4y2Ba
l)脂质体中保留尺寸排阻色谱法:gydF4y2Ba尺寸排阻色谱法是分离的方法选择摆脱liposome-encapsulated分子。脂质体是自组装磷脂封闭的液滴水介质中形成的。脂质体体内有大量的应用程序即药物运载工具。药物与脂质体以几种不同的方式取决于他们的溶解度和极性特征。最近,酶是gydF4y2Ba封装gydF4y2Ba在脂质体提高酶稳定性对稀释和蛋白酶。尺寸排阻色谱(SEC)是一个古老的和广泛使用的工具分开小溶质从脂质体或狭窄的粒径分布。[16]gydF4y2Ba
米)其它应用程序[4]gydF4y2Ba
•蛋白质折叠的研究。gydF4y2Ba
•样本的浓度。gydF4y2Ba
•Copolymerisation研究。gydF4y2Ba
•相对分子质量的决心gydF4y2Ba
•研究Protein-ligand绑定。gydF4y2Ba
色谱法在发现中扮演重要的角色,在生物技术产业开发和制造产品。大小排斥色谱法也许是最普遍,最敏感的分析方法是独一无二的,因为它很容易用于纯化的蛋白质和核酸等生物分子,分子大小的决心。gydF4y2Ba
