研究和评论:药物分析杂雷竞技苹果下载志》上
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e-ISSN: 2320 - 0812
2国家人类病毒性疾病研究所”胡里奥。Maiztegui博士”,INEVH ANLIS,阿根廷
收到日期:27/04/2017;接受日期:28/04/2017;发表日期:05/05/2017
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坦诚的# 1的质量控制测试疫苗所需的内部释放需要兔免疫血清的使用(RIS)。这是一个生物试剂生产INEVH和必须合格,确保其正确使用。本研究的目的是评估扩展不确定度(U)通过身份验证研究测试的头衔国税局决心,从而建立其规范用于控制测试,它的标题是至关重要的。
验证研究成为可能计算U统计分析建立的中间试验得到的值的精度,导致= 0.30。测定的方法建立了U 500是最低资格,必须有一个国税局用于疫苗的# 1的质量控制测试。
身份;疫苗;不确定性;免疫血清
的# 1 (1- - - - - -3)疫苗FHA产生人类病毒性疾病研究所的博士胡里奥。Maiztegui (INEVH)阿根廷,并发布在内部通过开发人员建立的质量控制测试的执行,最后在全国注册管理药品、食品和医疗技术(ANMAT) [4]。
在控制其释放试用包含超免疫血清的使用获得的兔子。使用抗血清中和体外疫苗和使用它在乳儿鼠标(SM)安全测试,安全测试在细胞培养和证明其身份5,6]。SM和维罗C76层的细胞培养都容易坦诚# 1株胡宁病毒(合资企业)7- - - - - -9]。为了评估缺乏外来的特工在基质必须与特定的抗血清中和疫苗获得的兔子(RIS),确保没有免费的病毒效价控制系统(10,11]。SM安全测试10是由接种小鼠的不到24 h和坦诚的# 1(104空斑形成单位/毫升)中和RIS的颅内路线(IC)和腹腔内(IP)。病毒中和液空斑形成单位(104 /毫升)RIS中接种细胞培养安全测试。在这两种情况下的能力提供的抗体RIS应足以抑制病毒的生物活性。
在身份测试,坦诚的# 1疫苗(104空斑形成单位/毫升)挑战系列稀释的RIS获得抑制坦诚的# 1微升80%琼脂板下减少中和试验(PRNT),“黄金标准”病毒的血清学诊断领域感染5检测抗体针对表面糖蛋白抗原表位主要是6。
确定疫苗的身份使用一个试验测量的能力抗体抑制病毒的生物活性。最小数量的病毒应该容易检测到少量的抗体可以产生明显的抑制作用,例如,在PRNT化验。这种技术使用的能力被感染细胞的病毒扩散到邻近的细胞产生斑块,组成的一个焦点细胞病变效应。所提供的特定抗体肢体重复性劳损症病毒颗粒转变成非传染性的机制涉及到联系的免疫球蛋白分子病毒粒子表面受体参与绑定病毒的宿主细胞的膜。因为病毒粒子的对称性,每个包含多个结合位点,然而,有限的免疫球蛋白分子需要中和病毒(5,6,12]。测试的目的是确定批次的疫苗生产的身份,从而确认疫苗对应的内容,规定包装标签。
身份的验证测试通过研究以下参数:中间精度和线性度(13,14),将使计算滴定法的不确定性anti-JV免疫血清的兔子。
最后表达相关的不确定性是一个参数的测量结果的特征值的分散,可以合理分配给测量(15]。当测量报告的结果,一些定量的迹象质量必须提供的测量,这样用户可以评价其可靠性。没有这样的指示,测量结果不能相比彼此或引用值给定的规范或标准。样本或统计评估的不确定性,基于实验数据,被称为不确定性的类型,如计算标准差的中间从n重复精度测试。计量允许两种方式表达不确定性,一方面相对应的标准不确定度统计标准偏差,另一方面扩展不确定度统计对应的置信区间。本研究的目的是,基于知识的扩展不确定度,标准化的最小anti-VJ SCI滴定度用于体内和体外安全分析和建立滴定度范围使用的身份鉴定。
材料
维罗C76细胞:非洲绿猴肾脏上皮细胞单层(的aethiopis) 80 - 90%的支流,种植前48小时6井托盘,段落34至42。
细胞系的生长在EMEM (GIBCO),补充NEAA, 5%热灭活(56ºC 30分钟)胎牛血清(INTERNEGOCIOS SA), 293μg /毫升,2毫米谷酰胺SIGMA-ALDRICH)、青霉素100单位/毫升(σ)和100μg /毫升链霉素(σ)。
细胞系使用在他们的身份认证,没有外国污染物(细菌、真菌、支原体和病毒)。疫苗稀释剂:EMEM补充谷酰胺(3毫米)NEAA + 1% + 2% SFB + 1%青霉素+链霉素(P + S)。
介质板:厄尔10倍,1%酵母提取物(DIFCO) SFB 6%, 7.5%碳酸氢钠(σ),lactobumin水解产物(BD),消息灵通的1米(σ)。
•1%琼脂糖(SEAKEM LONZA)
•2.3%中性红(σ)
•无菌注射用水
特定的抗血清中获得兔(RIS):从连续获得免疫接种在兔子(新西兰品种)在不同的时间有不同的免疫原。它开始与多个皮下(SC)和肌内(IM)接种的合资企业暂停(3790株)新生的老鼠大脑空斑形成单位相当于107 /毫升和完全弗氏佐剂(GIBCO)。第一个刺激与坦诚的# 1(104空斑形成单位/毫升)补充正常兔血清(NRS)和不完全佐剂进行月度。最后一步是在56天重复。的集合血样品和执行相应的血清分离从63天。滴定,随后发布使用的安全和身份测试。
参考病毒(RV):准备在INEVH设施。为此,10瓶坦诚# 1疫苗从冻结室中删除;瓶打开,resuspended 5.5毫升无菌注射用水(API)。Resuspended疫苗瓶保持冷藏和离开站15分钟。池10瓶的内容是在一个适当的容器中。执行分离在1.2毫升瓶,0.8毫升。瓶,都有一个标签,像“病毒胡宁参考”详细批处理和制备日期。他们存储在冰柜的温度-70ºC。房车的性能评估控制图。
身份测试
它包含在面临疫苗RIS PRNT化验。计算RIS的标题。应该注意的是,疫苗已经被中和。为了计算空斑形成单位,对应的数量,在一个给定的百分比蚀斑减少,作为中和的证据,系列胡宁参考稀释的病毒。选择稀释30微升的在哪里发现平均11和空斑形成单位的数量对应于中和所需的百分比计算。
80%的中和盘子是必需的;板块的平均数量获得的病毒是乘以0.2。板减少中和滴定度80 (PRNT80) RIS的最高稀释导致板数减少80%。知道最后SCI的头衔,血清稀释测试根据历史数据和下面的计算。
验证
身份的验证测试执行和阿根廷药典中发现的一些标准被用于验证的免疫化学方法16,17]。验证的参数研究是:中间精度和线性度。批房车和RIS批准。进行回顾性验证。
中间精密度:22日决定进行不同样本的虚拟现实,不同的大量的科学,在不同的时间和不同的分析师。进行统计评价的不确定性,基于实验数据(A型)。扩展不确定度的计算标准偏差在中间精密度测试获得的。
线性:它建立了从12决定为每个稀释1:50 0后,从不同批次的SCI血清1:1000,1:20 00
PFU病毒学测试的结果是对数转换为了标准化变量,计算以下统计参数:平均(A);标准偏差(SD);变异系数(CV)和方差(Var)。表1显示了中间的参数精度的研究。(表1)
| 参数 | 中间精密度 |
|---|---|
| 一个 | 3 |
| SD | 0.15 |
| + SD | 3.1 |
| + 2 sd | 3.3 |
| A-SD | 2.8 |
| A-2SD | 2.7 |
| 简历 | 5 |
| Var | 0.022 |
表1:身份鉴定、正态分布、统计参数。
从每个参数研究获得的结果绘制图1。
图1所示。中间精密度研究单位测试。
答:3.0;SD: 0.15;简历:5.0;Var: 0.022。
图2显示了线性测试的结果。图2)。
图2。线性测试确定身份
不同的试验证明了线性稀释(R2= 0.9793)。
扩展不确定度的计算单位测试扩展不确定度(U = k U (y)) = 2×0.15 U = 0.30
表达式的结果从一个决心
Y = (Y±U)标题
报告结果Y转换成真数,U:扩展不确定度U: 22 K决定的标准偏差:覆盖率Y:结果从每个决心Y:最终的表达式的结果。
重要的是要记住,引用的身份测试涉及到使用病毒,获得的超免疫血清的使用在兔子,两者兼而有之生物材料提供可变性的方法了解和控制是必要的。的异质性程度证明了变异系数(CV = 5.0%)获得的中间精度检验
在生物测试至关重要的是建立质量管理体系内的测试方法必须考虑,以确保最佳质量的结果[18]。坦诚的# 1疫苗试验方法验证身份后,你计算的表达式RIS滴定度结果,因此疫苗成立的滴定度最小。平均获得的滴定度为3个对数单位(1000),以便通过合并计算U(0.30日志单位)范围(3 + / - 0.30)RIS滴定度从500年到2000年成立。抗血清的研究已经证明拥有足够的抗体滴定度来中和疫苗病毒,确保没有干扰会发生在安全分析等企业敏感生物基质幼鼠和维洛细胞。RISI规范的建立为其作为生物试剂质量控制测试是非常重要的安全和质量的结果。的验证免疫血清在兔anti-Junin病毒及其生产方法要求使用它作为一个关键的输入的# 1疫苗释放试验证明。
国家实验室和管理卫生研究院(ANLIS)和科技部(MinCyT)融资中的科学科学学术机构改进计划,国家研究所的人类病毒性疾病”胡里奥。Maiztegui博士。”(INEVH),目前的工作了。每个人的一部分,质量控制和保证团队:Nahuel马丁内斯,吉赛尔Lazzari,船底座巴斯,亚历杭德罗Bottale,亚历杭德罗拉希奥,Sebastian窝的卡Cantore。
