合成和小说融合尿嘧啶衍生物抗肿瘤活性的评价

文摘

一锅法合成简单的indenopyrrolopyrimidines和indolopyrrolopyrimidines cyclocondensation 6-aminouracils和茚三酮反应和/或靛红的催化量的冰醋酸。另一方面,6-aminouracils进行亚硝化还原提供5紧随其后,6-diaminouracil衍生品作为直接合成的起始物料indenopteridines和indolopteridines分别通过与茚三酮反应和靛红。所有的新合成的化合物已经被基本特征分析、红外光谱、1 h - nmr光谱和质谱研究。抗肿瘤活性的新合成的化合物进行了评估对人类肝癌细胞系(Hep-G2)以及最大抑制浓度(IC50)的一半。一些化合物显示出强有力的抗肿瘤活性。

关键字

茚三酮,6-aminouracils 5 6-diaminouracil靛红indenopyrrolo-pyrimidines, Indolo-pyrrolopyrimidines, Indenopteridines Indolopteridines

介绍

近年来嘧啶衍生物倍受关注的各种各样的生物属性,尤其是在抗菌、抗真菌、抗结核、抗肿瘤和herbicidal [1- - - - - -3]。基德和维吉尼亚州(4)已经注意到,嘧啶的生物活性变化与替换。另一方面,靛红的核心组成许多生物碱(5)和药物(6,7]。文献调查显示各种衍生品的靛红拥有多样化的活动,如抗菌(8,抗真菌9],抗病毒[10),抗艾滋病毒(11),anti-mycobacterial,抗癌12,抗炎13)和抗惊厥的活动(14]。茚的衍生品也太多的意义,因为它们广泛的生物活动,如抗菌、抗炎、敌对的抑制(15- - - - - -22]。茚三酮的缩合和/或分别与o-diamines导致indeno-and /或indolo-derivatives靛红的相当大的兴趣作为生物活性物质。

在延续我们的兴趣融合尿嘧啶衍生物的化学和生物活动,在此,我们报告的合成一系列新的融合尿嘧啶从6-aminouracil导数(23)已被转化为亚硝化nitrosoanalog。后者的前体化合物常被用作5 6-diaminouracil。6-aminouracil和5,6-diaminouracil用作直接起始物料的制备indenopteridines和indolopteridines发达国家和他们的生物效应决定。

结果与讨论

化学

茚三酮的c - 2的位置位于两个羰基组之间比较无功对氮、氧、硫和碳基的亲核试剂(24]。另一方面,靛红有两个羰基集团位于c - 2和颈- 3的位置。颈- 3更对的亲核试剂反应中心(25]。基于这些事实,indenopyrrolopyrimidines 4 - 6, indolopyrrolopyrimidines 7号到9号,indenopteridines 10 - 14 indolopteridines 18、19合成的起始物料6-aminouracils 1和5,6-diaminouracils 3分别(方案1)。

dihydroxyindenopyrrolopyrimidine衍生物合成的4 - 6的基础上加成反应发生在茚三酮的反应和6-aminouracils 1乙酸的存在。环化可能发生通过nonisolable无环中间的形成。后者可能会通过更多的亲核攻击的碳形成的5-position尿嘧啶茚三酮的活性中心位置2。环合可能影响通过添加氨基茚三酮羰基在位置1的一部分提供最终产品4 - 6所示方案2。

另一方面,dihydroxyindolopyrrolopyrimidines 7 - 9日获得从靛红的加入到6-aminouracils乙酸的存在。nonisolated无环中间的形成是基于更多的亲核攻击的碳在尿嘧啶5-position靛红的更亲电中心位置3其次是环合承受目标化合物中所示方案3。

dihydroxyindenopyrrolopyrimidines 4 - 6的结构和dihydroxyindolopyrrolpyrimidines 7 - 9被分配的基础上羟基的位置,NH吸收和氨基的消失在红外光谱。进一步支持了¹核磁共振光谱显示,两个哦组的积分带特征4 - 6δ= 6.89 - 6.56 ppm和δ= 6.08 - -5.82 ppm和δ= 11.11 - -10.89和10.73 - -10.66 ppm。同时,苯基从靛红显示积分获得乐队在δ= 7.97 - -6.87 ppm。NH的消失₂积分乐队δ= 5.00 - -6.00 ppm左右位置c - 5和其他进一步证实为新化合物。

茚三酮的反应与5,6-diaminouracils 3导致indenopteridines 10 - 14的形成通过中间希夫碱的形成。前者反应时间(10 - 15分钟)花费更少的时间相比,靛红反应时间(2 - 3小时)。这个事实可以解释为增加碳原子的正电荷在位置2茚三酮由于消除H₂O在酸性介质,促进更基本的氨基的亲核攻击在这个位置所示计划4。

回流的靛红5,6-diaminouracils 3在乙醇的茶包括希夫氏基地15 - 17日的形成。产生共鸣的基础上结构diaminouracils 3, nh₂组位置c - 5将是更基本的攻击在碳原子位置3靛红的一半。另一方面,回流的混合物在乙酸乙醇导致隔离indolopteridines 18日19日通过中间形成希夫氏基地cyclodehydration紧随其后,如图所示计划5。

indenopteridines 10 - 14的结构,indolopteridines 18、19被分配的基础上的位置NH,羰基吸收和NH的消失₂在红外光谱带。进一步支持了¹核磁共振光谱显示,整体乐队在δ= 8.23 - -7.14 ppm苯基从靛红的特征。NH的消失₂整体带δ= 5.00 - -6.00 ppm左右位置c - 5和其他进一步证实为新化合物。

生物调查

细胞毒性活动:的在体外生长抑制率(%)和抑制增长活动(以IC₅₀合成的化合物)进行调查与著名的抗癌药物标准相比5-flourouracil(研究者用)和伊马替尼(2-substituted aminopyrimidine导数;格列卫^®用结晶紫),比色分析可行性。生成的数据被用来绘制剂量反应曲线,提出了表1和2和图1 (A和B)。结果显示,所有的测试化合物显示出高度的变化抑制增长和活动肿瘤细胞系以浓度依赖方式如图所示表1和2。

表1:HepG2细胞的生长抑制率与化合物4 - 6,9、10、12、14、17 - 19不同浓度。

表2:的集成电路₅₀值代表化合物浓度(μM)需要50%的抑制肿瘤细胞增殖。

结果表明,化合物6和集成电路具有良好的抑制活性₅₀1.29μM的价值。从结果中图1一个,很明显,化合物4、6和13 8点被发现是非常活跃的μM对人类肝细胞癌(HepG2)细胞株的抑制率值在70%和90%之间。

最高的活动对人类肝细胞癌(HepG2)细胞株与集成电路测量化合物13₅₀价值0.98μM,而参考药物伊马替尼。然而,复合14几乎是不活跃的。

从结果中图1 b很明显,化合物9日,17日至19日8点也发现活跃μM对人类肝细胞癌(HepG2)细胞株的抑制率值87.15,79.64,71.81和59.18%,分别。

最高发现抑制活动对人类肝癌细胞系(HepG2)测定化合物19与参考药物伊马替尼紧随其后的是9,然后用IC 17₅₀值为1.04,1.61和3.09μM分别。所有化合物的抑制活性的区别与不同浓度显著P < 0.001。

实验部分

一般

所有熔点测定电热Mel.-Temp。第二装置,未修正的。元素分析在区域真菌学和爱资哈尔大学生物技术中心。红外(IR)光谱记录使用溴化钾片技术在Nikolet红外IR 200英尺。质谱记录5050年日本岛津公司GC / MS-QP DI-50单位真菌学的区域中心,爱资哈尔大学的生物技术。质子核磁共振(¹磁共振)光谱被记录在力量400 MHz光谱仪使用DMSO-d6作为溶剂,应用核酸研究中心,Zagazig大学埃及。所有反应都是使用预镀塑料布进行薄层色谱硅胶(默克公司60 F254)和斑点可视化与紫外线照射(254海里)。使用的溶剂系统是氯仿:甲醇(9:1)和乙酸乙酯:甲苯(1:1)。

4 b、9 b-dihydroxy-1-substituted-9b 10-indeno (2′, 1′: 4、5] pyrrolo [2, 3 - d] pyrimidine-2, 4、5 (1 h、3 h, 4 bh) -triones4, 5)和4 b, 9 b-dihydroxy-1-methyl-9b 10-dihydroindeno (2′, 1′: 4、5] pyrrolo [2, 3 - d] pyrimidine-2含硫的- 4 (1 h), 5 (3 h, 4 bh)土卫四(6)。

6-amino-1-substituted-uracils的混合物(1)(1.2更易)和茚三酮(1.2更易)在醋酸(5毫升)加热回流10 - 15分钟。filteredon热形成沉淀,用乙醇和结晶从DMF /乙醇(1:3)。

4 b、9 b-dihydroxy-9b 10-dihydroindeno (2′, 1′: 4、5] pyrrolo [2, 3 - d] pyrimidine-2, 4、5 (1 h、3 h, 4 bh) -trione(4):收益率:73%,一下。= > 300°C。IR = 3300 (br,哦),3210 (NH), 3064 (CH arom), 2982 (CH aliph) 1707、1649 (C = O), 1593 (C = C)。迈克尔-舒马赫:m / z (%) = 287 (m⁺20),283(27),271(28),245(24),181(59岁),168年(38),125 (100),105 (47),76 (60)。¹核磁共振(DMSO-d₆)δppm: 11.14 (1 h, NH), 10.05 (1 h, NH), 8.70 (1 h, NH), 7.97 - 7.91 (d, 1 h, arom), 7.81 - -7.77 (m, 1 h, arom), 7.68 - -7.66 (d, 1 h, arom), 7.57 - -7.53 (m, 1 h, arom), 6.56 (1 h,哦),5.82 (1 h,哦)。肛交。计算的C₁₃H₉N₃O₅(287.22)计算的。3.16:54.36 C, H, 14.63 N,发现:54.52 C, H 3.21, 14.79 N。

4 b、9 b-dihydroxy-1-methyl-9b 10-dihydroindeno (2′, 1′: 4、5] pyrrolo [2, 3 - d] pyrimidine-2, 4、5 (1 h、3 h, 4 bh)——trione(5):收益率:79%,一下。= > 300°C。IR = 3442, 3393 (br,哦),3250年,3219年(NH), 3051 (CH arom), 2990 (CH aliph) 1700、1654 (C = O), 1549 (C = C)。迈克尔-舒马赫:m / z (%) = 301 (m⁺6)283 (M - h₂啊,9),244 (17),168 (41),104 (100),76 (88)。¹核磁共振(DMSO-d₆)δppm: 10.33 (1 h, NH), 9.24 (1 h, NH), 7.91 - 7.89 (d, 1 h, arom), 7.83 - -7.79 (m, 1 h, arom), 7.69 - -7.67 (d, 1 h, arom), 7.58 - -7.57 (m, 1 h, arom), 6.74 (1 h,哦),5.89 (1 h,哦),3.12 (3 h, CH₃)。肛交。计算的C₁₄H₁₁N₃O₅(301.25)计算的。3.68:55.82 C, H, 13.95 N,发现:55.97 C, H 3.74, 14.04 N。

4 b、9 b-dihydroxy-1-methyl-9b 10-dihydroindeno (2′, 1′: 4、5] pyrrolo [2, 3 - d] pyrimidine-2 (1 h) -thio-4, 5 (3 h, 4 bh)土卫四(6):收益率:71%,一下。= > 300°C。IR = 3400 (br,哦),3198 (NH), 3052 (CH arom), 2959 (CH aliph) 1695、1647 (C = O), 1537 (C = C)。迈克尔-舒马赫:m / z (%) = 317 (m⁺31),315 (6),299 (M - h₂啊,25),256(24),240(20)224(32),192年(46),184 (40),160 (51),128 (35),104 (100),76 (96)。¹核磁共振(DMSO-d₆)δppm: 11.84 (1 h, NH), 9.43 (1 h, NH), 7.93 - 7.91 (d, 1 h, arom), 7.85 - -7.81 (m, 1 h, arom), 7.71 - 7.69 (d, 1 h, arom), 7.60 - -7.56 (m, 1 h, arom), 6.89 (1 h,哦),6.08 (1 h,哦),3.53 (3 h, CH₃)。肛交。计算的C₁₄H₁₁N₃O₄(317.32),计算的。3.49:52.99 C, H, 13.24 N,发现:53.08 C, H 3.53, 13.37 N。

Dihydroxy-1-substituted-indolopyrrolopyrimidine (7 - 9): 6-amino-1-substituted-uracil的混合物(1)(1.2更易),靛红(1.2更易)在醋酸(5毫升)加热回流2 - 2.30小时。filteredon热形成沉淀,用乙醇和结晶从DMF /乙醇(1:3)。

1 - 4 b (2-chlorobenzyl), 9 a-dihydroxy-4b, 9日9,10-tetrahydropyrimido [5 ' 4 ': 4、5] pyrrolo - [2, 3 b] indolo-2 4 (1 h、3 h)土卫四(7):收益率:66%,国会议员。> 300°C。IR = 3406(哦),3177 (NH), 3055 (CH arom), 2808 (CH aliph), 1710年,1652 (C = O), 1526 (C = C)、754 (o-substituted苯基)。迈克尔-舒马赫:m / z (%) = 400 (m⁺2、1),398 (M⁺2)380 (mh)₂啊,2),342 (72),271 (14),181 (31),125 (100),102 (24)、76 (14)。¹核磁共振(DMSO-d₆)δppm: 11.69 (1 h, NH), 11.20 (1 h, NH), 11.01 (1 h,哦),10.66 (1 h,哦),9.42 (1 h, NH), 7.56 - 6.97 (m, 8 h, arom), 5.39 - -5.24 (dd 2 h, NCH₂)。肛交。计算的C₁₉H₁₅C_lN₄O₄(398.79)计算的。3.79:57.22 C, H, 14.05 N,发现:57.43 C, H 3.81, 14.13 N。

1-benzyl-4b 9 a-dihydroxy-4b 9、9 10-tetrahydropyrimido [5 ' 4 ': 4、5] pyrrolo - [2, 3 b] indolo-2 4 (1 h、3 h)土卫四(8):收益率:68%,一下。= > 300°C。IR = 3579、3339(哦),3154 (NH), 3065 (CH arom), 2860 (CH aliph) 1720、1654 (C = O), 1527 (C = C)。迈克尔-舒马赫:m / z (%) = 364 (m⁺5),348 (4),302 (7),276 (9),119 (100),106 (19)、92 (60)。¹核磁共振(DMSO-d₆)δppm: 11.95 (1 h, NH), 11.69 (1 h, NH), 11.11 (1 h,哦),10.89 (1 h,哦),9.39 (1 h, NH), 7.40 - 6.87 (m, 9 h, arom), 5.42 - 5.27 (2 h, dd NCH₂)。肛交。计算的C₁₉H₁₆N₄O₄(364.35)计算的。4.43:62.63 C, H, 15.38 N,发现:62.80 C, H 4.49, 15.47 N。

4 b, 9 a-dihydroxy-1-methyl-4b 9 9, 10-tetrahydropyrimido [5 ' 4 ': 4、5] pyrrolo - [2, 3 b] indolo-2 4 (1 h、3 h)土卫四(9):收益率:59%,一下。= > 300°C。IR = 3524、3385(哦),3159 (NH), 3025 (CH arom), 2939年,2846年(CH aliph。) 1746、1688 (C = O), 1592 (C = C)。迈克尔-舒马赫:m / z (%) = 288 (m + 8), 270 (mh₂啊,8),188 (9),119 (52),92 (36),61 (100)。¹核磁共振(DMSO-d₆)δppm: 11.95 (1 h, NH), 11.48 (1 h, NH), 10.89 (1 h,哦),10.73 (1 h,哦),9.25 (1 h, NH), 7.26 - -6.93 (m, 4 h, arom), 3.42 (3 h, CH₃)。肛交。计算的C₁₃H₁₂N₄O₄(288.26)计算的。4.20:54.17 C, H, 19.44 N。4.26发现:54.25 C, H, 19.58 N。

1-Substituted-2H-indeno (2, 1 g) pteridine-2, 4, 6 - (1 h、3 h)北斗七星(10 - 14):5、6-diamino-1-substituteduracil(3)(1.00更易)和茚三酮(1.00更易)在醋酸(5毫升)加热回流10 - 15分钟。filteredon热形成沉淀,用乙醇和结晶从DMF /乙醇(1:3)。

2 h-indeno (2, 1 g) pteridine-2, 4, 6 - (1 h、3 h) -trione(10):收益率:81%,一下。= > 300°C。IR = 3360、3193 (NH), 3089 (CH arom), 2813 (CH aliph) 1714、1642 (C = O), 1562 (C = C)。迈克尔-舒马赫:m / z (%) = 266 (m⁺1),239(27),182(8),154(13),135(100),98(59岁),76 (25)、74 (52)。¹核磁共振(DMSO-d₆)δppm: 11.35 (1 h, NH), 10.29 (1 h, NH), 7.87 - -7.81 (m, 3 h, arom), 7.74 - -7.70 (m, 1 h, arom)。肛交。计算的C₁₃H₆N₄O₃(266.21)计算的。2.27:58.65 C, H, 21.05 N。2.24发现:58.83 C, H, 21.19 N。

(2,1 g) 1-Methyl-2H-indeno pteridine-2 4 6 - (1 h、3 h) -trione(11):收益率:79%,国会议员。= > 300°C。IR = 3361、3176 (NH), 3071 (CH arom), 2827 (CH aliph) 1684、1568 (C = O), 1500 (C = C)。迈克尔-舒马赫:m / z (%) = 280 (m⁺,97),209 (66),182 (100),154 (51),130 (32),102 (28),76 (23)。¹核磁共振(DMSO-d₆)δppm: 10.54 (1 h, NH), 7.99 - 7.97 (d, 1 h, arom), 7.86 - -7.82 (m, 2 h, arom), 7.74 - 7.71 (m, 1 h, arom), 3.59 (3 h, CH₃)。肛交。计算的C₁₄H₈N₄O₃(280.24)计算的。2.88:60.00 C, H, 19.99 N,发现:60.14 C, H 2.91, 20.04 N。

1-Methyl-2H-indeno (2, 1 g) pteridine-2-thio-4, 6 - (1 h、3 h)土卫四(12):收益率:82%,国会议员。> 300°C。IR = 3326、3210 (NH), 3093 (CH arom), 2900 (CH aliph) 1702、1599 (C = O), 1567 (C = C)。迈克尔-舒马赫:m / z (%) = 296 (m⁺,65),280(15),236(35),209(34),182(100),154(77),126年(54),102 (55),75 (30)。¹核磁共振(DMSO-d₆)δppm: 12.22 (1 h, NH), 8.03 - 7.73 (m, 4 h, arom), 3.68 (3 h, CH₃)。肛交。计算的C₁₄H₈N₄O₂(296.30),计算的。2.72:56.75 C, H, 18.91 N,发现:56.89 C, H 2.70, 19.07 N。

(2,1 g) 1-Benzyl-1H-indeno pteridine-2 4 6 (3 h) -trione(13):收益率:77%,国会议员。= > 300°C。IR = 3390、3168 (NH), 3024 (CH arom), 2843 (CH aliph) 1692、1601 (C = O), 1563 (C = C)。迈克尔-舒马赫:m / z (%) = 356 (m⁺18),284 (11)、232 (13)、230 (17),104 (8),91 (100)。¹核磁共振(DMSO-d₆)δppm: 10.21 (1 h, NH), 7.95 - 7.93 (d, 1 h, arom), 7.84 - 7.80 (m, 2 h, arom), 7.73 - 7.69 (m, 1 h, arom), 7.50 - 7.48 (d, 2 h, arom), 7.34 - 7.25 (m, 3 h, arom), 5.44 (2 h, NCH₂)。肛交。计算的C_20.H₁₂N₄O₃(356.33)计算的。3.39:67.41 C, H, 15.72 N,发现:67.59 C, H 3.45, 15.81 N。

(1)- 2-Chlorobenzyl methyl-2H-indeno (2, 1 g) pteridine-2, 4, 6 - (1 h、3 h) -trione(14):收益率:83%,国会议员。> 300°C。IR = 3303、3175 (NH), 3059 (CH arom), 2842 (CH aliph), 1695年,1659 (C = O), 1557 (C = C)、751 (o-substituted苯基)。MS: m / z (%) = 392 (m + 2, 1.63), 390 (m + 0.62), 355 (100), 318 (9), 284 (11), 154 (11), 125 (94), 102 (20) 76 (21)。¹核磁共振(DMSO-d₆)δppm: 10.52 (1 h, NH), 7.82 - 7.69 (m, 2 h, arom), 7.53 - 7.50 (m, 1 h, arom), 7.34 - 7.22 (m, 5 h, arom), 5.49 (2 h, NCH₂)。肛交。计算的C_20.H₁₁C_lN₄O₃(390.78)计算的。2.84:61.47 C, H, 14.34 N,发现:61.61 C, H 2.83, 14.51 N。

6-Amino-1-substituted-5 - {((3 z) 2-oxo-1 2-dihydro-3H-indol-3-ylidene]氨基}pyrimidine-2, 4 (1 h、3 h) -diones (15 - 17): 5、6-diamino-1-substituteduracils(3)(1.00更易),靛红(1.00更易)乙醇(20毫升)在茶作为一种基本的存在下加热回流4 - 5小时。形成沉淀过滤在炎热,用乙醇和结晶从DMF /乙醇(1:3)提供所需的化合物15 - 17。

6-Amino-1-methyl-5 - {((3 z) 2-oxo-1 2-dihydro-3H-indol-3-ylidene]氨基}pyrimidine-2, 4 (1 h、3 h)土卫四(15):收益率:85%,一下。= > 300°C。IR = 3349、3309、3260、3146 (NH₂和NH), 3054 (CH arom), 2846 (CH aliph) 1693、1634 (C = O), 1575 (C = C)。MS: m / z (%) = 285 (m + 1.13), 267 (M-H2O, 1.15), 156(100), 139年(46),98 (15),84 (21),57 (51)。¹核磁共振(DMSO-d₆)δppm: 11.78 (1 h, NH), 10.54 (1 h, NH), 8.22 - 8.20 (d, 1 h, arom), 7.63 - 7.56 (m, 2 h, arom), 7.42 - 7.38 (m, 1 h, arom), 6.11 (2 h, NH2), 3.56 (3 h, CH₃)。肛交。计算的C₁₃H₁₁N₅O₃(285.25)计算的。3.89:54.74 C, H, 24.55 N,发现:54.91 C, H 3.94, 24.67 N。

6-Amino-5 - {((3 z) 2-oxo-1 2-dihydro-3H-indol-3-ylidene]氨基}pyrimidine-2, 4 (1 h、3 h)土卫四(16):收益率:88%,一下。= > 300°C。IR = 3459、3407、3360、3194 (NH₂和NH), 3093 (CH arom), 2842 (CH aliph) 1704、1647 (C = O), 1564 (C = C)。迈克尔-舒马赫:m / z (%) = 271 (m⁺3)253 (mh)₂啊,6),266 (20)142 (100),97 (67),71 (32),43 (50)。¹核磁共振(DMSO-d₆)δppm: 12.37 (1 h, NH), 10.90 (1 h, NH), 10.26 (1 h, NH), 8.22 - 8.20 (d, 1 h, arom), 7.69 - 7.35 (m, 3 h, arom), 5.54 (2 h, NH₂)。肛交。计算的C₁₂H₉N₅O₃(271.23)计算的。3.34:53.14 C, H, 25.82 N,发现:53.42 C, H 3.23, 26.07 N。

(3 z) 3 - [(4-tetrahydropyrimidin-5-yl 6-Amino-1-methyl-4-oxo-2-thioxo-1 2 3)亚氨基的]1,3-dihydro-2H-indol-2-one(17):收益率:87%,一下。= > 300°C。IR = 3315、3292、3150 (NH)₂和NH), 3098 (CH arom), 2942 (CH aliph) 1694、1623 (C = O), 1570 (C = C)。迈克尔-舒马赫:m / z (%) = 301 (m⁺,2.24),283 (M - H₂啊,3),239(9),185(16),147(67),132(16),129(29),119(100),104(33),98(36),97(26),92(82),76(44),57(16),55岁(28)。¹核磁共振(DMSO-d₆)δppm: 11.89 (1 h, NH), 10.20 (1 h, NH), 8.30 - -8.28 (d, 1 h, arom), 7.78 - 7.37 (m, 3 h, arom), 6.19 (2 h, NH₂),3.73 (3 h, CH₃)。肛交。计算的C₁₃H₁₁N₅O₂(301.32),计算的。3.68:51.82 C, H, 23.24 N,发现:51.98 C, H 3.71, 23.43 N。

1-Substituted-indolopteridine (18 - 20)

方法一:5、6-diamino-1-substituteduracil(3)(1.00更易),靛红(1.00更易)在醋酸(5毫升)加热回流2 - 3小时。形成沉淀过滤在炎热,用乙醇和结晶从DMF /乙醇(1:3)给18和19。

方法B:化合物15(1.00更易)在醋酸(5毫升)加热回流2小时。形成沉淀过滤在炎热,用乙醇和结晶从DMF /乙醇(1:3)给20。

1 - (2-Chlorobenzyl-1 10-dihydro-2H-indolo [3, 2 g] pteridine-2, 3 (3 h)土卫四(18):收益率:68%(方法),一下。= > 300°C。IR = 3250、3183 (NH), 3050 (CH arom), 2814 (CH aliph), 1705年,1638 (C = O), 1562 (C = C)、756 (o-substituted苯基)。迈克尔-舒马赫:m / z (%) = 379 (m⁺2、12)、377 (M⁺17)361 (mh)₂啊,25),287 (19),166 (23),104 (21)63 (27),51 (100)。¹核磁共振(DMSO-d₆)δppm: 12.16 (1 h, NH), 10.79 (1 h, NH), 8.23 - 8.21 (d, 1 h, arom), 7.60 - 7.14(米、7 h、arom), 5.41 (2 h, NCH₂)。肛交。计算的C₁₉H₁₂C_lN₅O₂(377.78)计算的。3.20:60.41 C, H, 18.54 N,发现:60.53,3.18 H, 18.71 N。

1-benzyl-1, 10-dihydro-2H-indolo [3, 2 g] pteridine-2, 3 (3 h)土卫四(19):收益率:65%(方法),国会议员。= > 300°C。IR = 3270、3136 (NH), 3029 (CH arom), 2920 (CH aliph) 1712、1642 (C = O), 1533 (C = C)。迈克尔-舒马赫:m / z (%) = 343 (m⁺8),271 (10)181 (15),125 (12),102 (12),91 (100)。¹核磁共振(DMSO-d₆)δppm: 12.63 (1 h, NH), 11.89 (1 h, NH), 8.21 - 8.20 (d, 1 h, arom), 7.63 - 7.59 (m, 1 h, arom), 7.54 - 7.52 (d, 1 h, arom), 7.40 - 7.21 (m, 6 h, arom), 5.43 (2 h, NCH₂)。肛交。计算的C₁₉H₁₃N₅O₂(343.34)计算的。3.82:66.47 C, H, 20.40 N,发现:66.63 C, H 3.79, 20.62 N。

1,10-Dihydro-1-methyl-2H-indolo [3, 2 g] pteridine-2, 3 (3 h)土卫四(20):收益率:82%(方法B)一下。= > 300°C。IR = 3265、3140 (NH), 3044 (CH arom), 2890 (CH aliph) 1698、1635 (C = O), 1558 (C = C)。迈克尔-舒马赫:m / z (%) = 267 (m⁺,99),196 (100),181 (24),156 (73),102 (11),58 (47)。¹核磁共振(DMSO-d₆)δppm: 11.89 (1 h, NH), 11.54 (1 h, NH), 8.18 - 7.35 (m, 4 h, arom), 3.55 (3 h, CH₃)。肛交。计算的C₁₃H₉N₅O₂(267.24)计算的。3.39:58.43 C, H, 26.21 N,发现:58.70 C, H 3.43, 26.35 N。

生物调查

评价抗肿瘤活性

哺乳动物细胞系:本研究中使用的细胞系,人类肝癌细胞系(HepG2细胞)从组织培养获得单位,VACSERA,埃及开罗。哺乳动物细胞传播在杜尔贝科的修改鹰的26,27]介质(DMEM)或rpmi - 1640取决于类型的细胞系补充heat-inactivated 10%胎牛血清,1%谷酰胺,消息灵通的缓冲和50μg /毫升庆大霉素。所有细胞都维持在37°C在湿润的气氛中有5%的公司₂而亚文化每周两次实验。

(我)抗肿瘤活性评价使用可行性分析:抗肿瘤活性测定是根据文献[描述的方法28]。所有实验的细胞毒性进行了评价和分析区域中心的组织培养单位真菌学和生物技术RCMB,埃及开罗爱资哈尔大学。

(2)过程:肿瘤细胞系被播种在96 - 100年板μl生长培养基的细胞浓度1×10⁴细胞每口井。单层播种后24小时,然后用无菌磷酸盐缓冲盐水(0.01米,pH值7.2),同时细胞治疗与100年μl不同稀释的测试样本在新鲜维护媒介和孵化37°C。不同的测试化合物双倍稀释(8,4。2、1、0.5、0.25、0.125和0.062μM)被添加到汇合的单层细胞分发到96年,平底的微量滴定板(美国新泽西州猎鹰)使用多通道吸管。微量滴定板在37°C湿润孵化器孵化有限公司为5%₂一段24 h。未经处理的细胞作为控制。三个独立实验包含六个复制为每个测试样品的浓度。测试化合物的细胞毒性效应被用结晶紫染色可行性分析。短暂,经过24小时的治疗,100年中被μL结晶紫的0.5% 50%甲醇添加到每个好,孵化20分钟在室温和随后多余染料轻轻地在蒸馏水中被淘汰了。板被允许干那么可行的紫罗兰色水晶细胞用33%冰醋酸溶液溶解。吸光度在570海里然后测量在每个使用标(日出,TECAN公司、美国)。5 -氟尿嘧啶和伊马替尼作为积极的控制。吸光度正比于幸存的细胞培养板的数量。因此,使用这种比色过程,测试compounds-mediated细胞溶菌作用,研究者用的细胞毒性效应和伊马替尼(用作积极控制)测量,而未经处理的细胞的可行性。因为股票的解决方案准备测试化合物的不同浓度随着在DMSO,控制和DMSO单独为每个浓度并行执行。

数据分析:细胞生存能力的百分比计算使用Microsoft Excel®。细胞生存能力计算百分比如下:根据以下计算:细胞生存能力的比例= [1−ODc (ODt)×100%, ODt哪里井处理的平均光密度测试化合物和ODc是未经处理的细胞的平均光密度。测试化合物使用IC50值相比,即。,the concentration of an individual compound leading to 50% cell death that was estimated from graphical plots of surviving cells versus compound concentrations.

结论

indolopyrrolopyrimidines,总之,新化合物indenopyrrolopyrimidines indenopteridines和indolopteridineshave beensynthesized和他们在体外抗癌活动对HepG2细胞系已被评估。这些化合物表现出良好的抗癌活性HepG2细胞系。化合物13和19个IC₅₀分别为0.98μM和1.04μM被发现是最活跃的。

确认

作者希望感谢博士艾哈迈迪Elaasser开展这项工作的生物活性区域真菌学和爱资哈尔大学生物技术中心。

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