和评论:生药学和植物化雷竞技苹果下载学》杂志上的研究表明
菜单e-ISSN: 2321 - 6182 p-ISSN: 2347 - 2332
e-ISSN: 2321 - 6182 p-ISSN: 2347 - 2332
Jahnavi Nayak*
综合部门和功能生物学、CSIR研究所基因组学&综合生物学、商城路,印度德里
收到:02 - 2022年5月,手稿。JPRPC - 62754;编辑分配:05 - 2022年5月-PreQC没有。JPRPC - 22 - 62754 (PQ);综述:19日——2022年5月,QC没有JPRPC-22 - 62754;修改后:26日—2022年5月-手稿。jprpc - 22 - 62754 (R);发表:02 - jun - 2022,DOI:10.4172 / 2321 - 6182.10.3.004
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离子色谱法(也称为离子交换色谱法)分离离子和极性分子离子交换剂根据他们的亲和力。它是有效的在几乎任何带电分子,包括大型蛋白质,小的核苷酸和氨基酸。离子色谱另一方面必须条件执行一个单位从蛋白质的等电点。离子色谱法分为两种类型阴离子交换和阳离子交换。当感兴趣的分子带正电,阳离子交换色谱法。因为色谱的pH值小于π(k / pH值(我)分子带正电。这种类型的层析的固定相是带负电荷的装载和带正电的分子被吸引到它。阴离子交换色谱固定相时是带正电的装载和带负电荷的分子被吸引到它(即色谱的pH值是大于π)。
它被频繁应用于蛋白质纯化水分析和质量控制。水溶性和带电分子如蛋白质、氨基酸和肽结合电荷相反半个通过离子键形成不溶性固定相(1]。得的平衡固定相是由官能团的靶向分子混合物的分离和量化可以绑定,通过张选举票阳离子固定相用于单独的离子和阴离子固定相用于单独的阳离子。阳离子交换色谱法用于单独的阳离子,阴离子交换色谱法用于不同的阴离子。结合分子可以筛选了,使用一个洗脱液含有阴离子和阳离子通过更多的离子通过列或改变的pH值列(2]。使用离子色谱的主要好处之一是,只有一个交互涉及在分离过程中,与其他分离技术因此离子色谱法有更高的矩阵宽容。洗脱模式的可预测性是离子交换的另一个优点(基于得集团)的存在。当使用阳离子交换色谱时,例如,阳离子最后洗提。与此同时,带负电荷的分子将会是第一个洗提。然而,使用离子交换色谱法存在一些缺陷,如不断进化的技术导致从列列不一致3]。这种净化技术的一个重要限制是它只适用于得组。
根据他们的带电离子交换色谱法分离分子团体。基于库仑(离子)的相互作用,离子交换色谱保留分析物分子在列4]。离子交换色谱法矩阵带正、负电荷的离子。从本质上说,分子在固定相矩阵带有相反电荷的静电相互作用。固定的固定相是由矩阵包含带电得官能团或配体。离子官能团(r×)在固定相表面相互作用分析物离子电荷相反的5]。这些惰性指控夫妇交换反离子溶液中实现电中性。Purifiable得分子争夺绑定到固定相上的固定化指控这些柜台可交换的离子。根据他们的电荷,这些得分子保留或筛选了。分子不绑定或弱绑定到固定相冲走第一(6]。分子的洗脱条件变化需要绑定到固定相。
柜台的浓度可交换的离子与分子争夺绑定可以增加或pH值可以改变。pH值的变化影响特定分子的电荷,因此,改变绑定。分子然后开始洗提基于费用的变化引起的调整。这样的修改可以用来释放感兴趣的蛋白质(7]。此外,反离子的浓度可以逐渐增加到单独的电离分子。梯度洗脱的名字是这种类型的洗脱。一步洗脱,另一方面,可用于不同抗衡离子的浓度在一个单一的步骤(8]。这种色谱进一步分为阳离子交换色谱法和阴离子交换色谱法。
开始前需要平衡离子交换色谱法。固定相必须平衡取决于实验的某些需求。固定相中的离子会被附加到他们相反的可交换的离子一旦平衡。离子交换,比如Cl- - - - - -或Na+。之后,一个缓冲所需的蛋白质可以绑定应该选择(9]。列平衡后必须洗净。洗涤阶段将帮助任何杂质的去除不绑定到矩阵而感兴趣的蛋白仍然绑定。绑定的援助所需的蛋白质,这个示例缓冲区必须有相同的pH值平衡缓冲。洗脱进行洗提所需的蛋白质绑定到矩阵样例后加载到列和列已经被洗提所有的缓冲non-desired蛋白质。结合蛋白质是使用线性增加的盐浓度梯度筛选了。当缓冲区的离子强度增加时,所需的盐离子与蛋白质绑定到介质表面带电荷基团。因此,将从列筛选了所需的蛋白质。
蛋白质与较低的净电荷将筛选了第一次随着盐浓度的上升,导致离子强度的增加。蛋白质高的净电荷将需要更高的离子强度从列筛选了。离子交换色谱法可以做散装玻璃或塑料等介质薄层板涂有一层所需的固定相或色谱柱(10]。薄层和柱层析法是相似的,它们都运行在相同的管理原则有频繁地交换分子沿着固定相作为流动相的旅行。
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