膳食补充剂的影响与亚麻籽和益生菌乳酸杆菌在断奶猪的细胞免疫

文摘

益生菌以及欧米属于著名的免疫调制剂。在这工作的影响的应用益生菌乳酸杆菌的益生菌干酪和亚麻籽油的来源omega - 3欧在猪细胞介导免疫反应进行了研究。88头猪被分成4组,动物收到10天前开始断奶期间,持续21天post-weaning:在对照组,控制奶酪和向日葵油,在L组益生菌干酪和向日葵油,在足总组控制奶酪碎亚麻籽,和LFA益生菌组奶酪碎亚麻籽。猪被吞噬活动的监控,吞噬细胞的代谢活动,淋巴细胞的增殖,外周血中淋巴细胞的细胞亚群比例和空肠的集合淋巴结补丁(PP)。immunomodulating效应的应用益生菌和/或亚麻籽观察肠道主要在当地的水平。在断奶的日子被发现没有显著差异的比例观察淋巴细胞亚群(CD3 +, CD4 +, CD8 + CD21 +)表征空肠的PP隔绝,在断奶后第七天的百分比明显高于t淋巴球在L和FA组相比,LFA组。相比之下,CD21 +表征的比例明显高于LFA组相比其他组。断奶后21天PP淋巴细胞的比例在所有组相似。预期的抑制淋巴细胞数量和扩散的亚麻籽还没有得到确认。只有吞噬活动抑制后的亚麻籽,但添加乳酸杆菌减少这种影响。

关键字

细胞免疫,亚麻籽,乳酸杆菌益生菌干酪,断奶猪

介绍

Post-weaning综合征(PWS)是一种严重的健康、繁殖和猪农的经济问题。在断奶,暴露在一个坚实的饮食加上其他压力,会导致戏剧性的变化在胃肠道(GI)微生物群,形态学和生物化学,让小猪可能容易受到病原体的扩散,从而很好的描述浆(1]。后在欧盟禁止使用抗生素促生长2006年,规模无法控制的手段,因此其他更安全的替代饲料抗生素。还必须设法改善动物产品到达消费者的健康和安全,因此安全天然物质(如益生菌、多不饱和脂肪酸——欧米伽,植物提取物、等等)感兴趣的中心。

原地的胃肠道微生物区系被认为是人体的自然防御机制之一,由一个复杂的装配主要非致病性细菌通常驻留在胃肠道(GIT)。它扮演着一个重要的角色在殖民抵抗病原体的发展。刺激的原地微生物群可以通过操纵的成分的饮食,或添加不同的天然成分,尤其是益生菌(2- - - - - -5]。益生菌能够促进肠道健康的使用提出了多年。益生菌具有良好的文档记录功效腹泻病的预防和治疗以及调制的免疫反应6- - - - - -9]。这些有益的影响已经被解释为促进肠道屏障功能。

尽管密集的研究在这一领域,目前益生菌不是这样一个有效的抗生素的替代品。因此有必要寻找方法和手段提高其疗效。一个这样的方式似乎是结合自然起源的益生菌微生物与synergically代理组件(如低聚糖,欧米伽,phytocomponents或微量元素),加强益生菌微生物的作用方式或扩展的范围有益的益生菌制剂对宿主的影响(4]。

亚麻籽(FS)富含欧米伽(ω- 3),木酚素分泌粘液的水溶性多糖,已发现所有这些[带来许多健康的好处10]。ω- 3欧的刺激效果在乳酸杆菌粘附表明他们可以用于提高益生菌的有效性在抑制消化道的病原体。这些发现证明了Kankaanpaa et al。11在在体外实验中,通过林格et al。12在鱼和猪(在我们的实验室4,13]。欧米伽也已知的免疫调制剂。抗炎和anti-proliferative行动omega - 3欧的免疫系统细胞在更多的研究是有据可查,但一些作者收到也矛盾的结果(14- - - - - -17]。欧米伽的组成细胞的免疫系统显示其潜在影响生物受体、信号转导和淋巴细胞增殖。饮食的消费高fish-derivedω-3 PUFA,尤其是二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA),已经证明降低炎症反应(18),和改变免疫参数包括抗体生产和淋巴细胞比例和响应性19- - - - - -21在家禽和猪。

本研究的目的是调查的影响政府的益生菌乳酸杆菌的益生菌干酪和/或亚麻籽的omega - 3欧和纤维细胞介导免疫反应在断奶仔猪。与circoviral疫苗接种的影响也进行了研究。

材料和方法

益生菌

在乳酸菌的益生菌菌株微生物学和免疫学的部门,大学的兽医和Košice药房。乳杆菌- Biocenol™LP96应变从肠道中选择内容健康哺乳仔猪。乳酸菌酵母——Biocenol™LF99被孤立于胃肠道的成年鸡。

切达干酪被用作益生菌菌株的工具。益生菌奶酪含有益生菌菌株(每个奶酪一个益生菌菌株)数字1×109菌落每克(CFU / g)的奶酪(称为益生菌干酪)。益生菌添加到奶酪是牛奶一起2%起动文化Lactococcus lactis无性系种群。lactis (Lyofast莫041 srl的焦点在于,意大利,冻干)在典型的切达干酪生产。奶酪被用作控制,是一个类似的切达干酪,但没有添加益生菌菌株(称为控制奶酪)。

动物、住房、饮食和接种疫苗

斯洛伐克共和国的国家兽医和食品管理局批准实验协议号码2108/07 - 221和动物被以人道的方式处理和牺牲。72年实验进行临床健康仔猪(crossbreds-Yorkshire x大)。小猪被安置在典型室内18笔和被分成4组动物,显示了他们的饮食的补充表1。

表1。补充的实验组和对照组仔猪饲料。

益生菌和控制奶酪被提供给小猪碎奶酪的形式应用于饲料的表面。同期动物们随意访问水和饲料的混合物对早期断奶仔猪OŠ-02 (CP 187.9通用,我12.8 MJ,纤维38.3通用,赖氨酸11.6通用、蛋氨酸和半胱氨酸6.4通用、苏氨酸7.6通用,色氨酸2.3通用,胆碱1352毫克,11530 IU维生素A、维生素D3 1500 IU维生素E 68.7毫克,维生素B2 7.1毫克,维生素B12 26.4μg,钙7.5 g、P 6.2 g,钠1.9克,铜10毫克、铁163.4毫克,锌125.8毫克、Mn 72.7毫克;Spišske kA…一•外资zmesi,斯洛伐克)。提要混合物与整个碎flaxseed-cultivar弗兰德斯补充ω- 3含量高的欧米伽(Agrola高雅…一¾ušice,捷克共和国)FA和LFA组或控制石油(向日葵油只包含ω- 6欧米)控制和L组,10%的浓度(表2)。

表2。亚麻籽油的脂肪酸组成(百分比),葵花籽油和饲料OŠ-02混合物。

小猪断奶的年龄28天。29日一天,六头猪从每组(随后被牺牲在断奶后21天)了肌内注射1毫升的猪圆环病毒2 (PCV-2)疫苗(Ingelvac®CIRCOFLEX™,勃林格殷格翰集团,德国)由制造商。

生物材料

所有组的猪是牺牲了T61 (Intervet国际容积Boxmeer,荷兰,剂量:0.3毫升/公斤体重)当天intracardially断奶仔猪(28天),3天,7和21 post-weaning。牺牲了小猪的胃肠道立即被移除。

淋巴细胞的分离及纯化,从空肠的子集集合淋巴结´s补丁(PPs)流式细胞仪分析由Solano-Aguilar等的修改方法。22]。短暂,PPs削减从空肠,洗在冰冷的PBS(2.7毫米137毫米氯化钠,氯化钾,Na2HPO4 6.4毫米,1.2毫米KH2PO4, pH值7.3),放置在冰冷的汉克斯平衡盐溶液——哈佛商学院(137毫米氯化钠,氯化钾5毫米,1.1毫米Na2HPO4.2H2O, KH2PO4 0.4毫米,5毫米葡萄糖,NaHCO3约4毫米,10毫米玫瑰,pH值7.1 - 7.3,0.22μm)过滤。PPs在30毫升HBSS-Dithiothreitol孵化(2毫米二硫苏糖醇(σ)在hbs)在37°C水浴20分钟。然后样本涡和媒体被移除。PPs在HBSS-EDTA resuspended EDTA(1毫米(在哈佛商学院Lachema,捷克共和国))和孵化在37°C水浴20分钟。孵化媒体被移除之后,PPs沉浸在培养皿中少量的哈佛商学院和粘膜刮的帮助下一个塑料一次性细胞刮刀(美国合演)。悬架是透过70μm尼龙细胞过滤器(美国BD猎鹰)到50毫升锥形管和哈佛商学院是增加30毫升。管离心机在600 xg 10分钟。40%的颗粒与8毫升resuspended Percoll(σ)解决方案在哈佛商学院(Percoll股票的解决方案:9部分Percoll + 1 hbs的一部分),然后暂停被分为两个15毫升玻璃管和衬底Percoll解决方案在哈佛商学院同等体积的70%。管离心机在1000 x g 30分钟。淋巴细胞从40 - 70%层收集到一个新的管接口。 Cells were washed twice with HBSS by centrifugation at 600 × gm for 5 minutes, then counted after the staining with Türk solution in a Bürker chamber and adjusted at 1.106 cells per 50 μl.

retroorbital静脉窦的外周血收集到管包含不同抗凝剂(流仪分析肝素,乙二胺四乙酸钠盐对淋巴组织测试)。白细胞lymphoproliferation测试被修改后的分离外周血红细胞渗透冲击的方法(23]。

免疫分析

流量仪的分析从空肠黏膜淋巴细胞在血液或孤立的子集进行如下:包含大约50μl血液或孤立淋巴细胞。1.106细胞孵化15分钟在黑暗与主要在实验室温度单克隆抗体(2μl CD4a, 2μl CD8a, 10μl CD45, 1μl CD3ε-FITC或1μl CD21-RPE)。孵化后,800年μl赖氨酸溶液(8.29 g NH4Cl, 1 g KHCO3, 0.393 g Na2EDTA 1 l H2O)被添加到管与non-conjugated摩押(CD4, CD8和CD45)和1毫升BD流式细胞仪赖氨酸溶液(美国BD生物科学)被添加到管与共轭摩押(CD3ε-FITC和CD21-RPE)。然后管被孵化20分钟在黑暗中在实验室温度。管与0.5毫升PBS两次洗5分钟(250克)。CD4a CD8a和CD45 25μl二级抗体稀释1:50的PBS添加和管孵化15分钟在黑暗中在实验室温度。管子又洗了两次0.5毫升PBS(5分钟)250克和200μl 1%的多聚甲醛在PBS被添加到每个管。分析以下使用单克隆抗体:鼠标antiporcine CD4a MCA 1749 (AbD Serotec、英国),鼠标antiporcine CD8a MCA 1223 (AbD Serotec、英国),鼠标antiporcine CD45 MCA 1222 (AbD Serotec、英国),鼠标antiporcine CD3ε-FITC共轭BB23 - 8 e6(美国SouthernBiotech),和鼠标antiporcine CD21 R-phycoerythrin表征BB6-11C9.6(美国SouthernBiotech)。二次抗体是用FITC共轭多克隆山羊antimouse免疫球蛋白(σ,美国)。流仪分析了BD流式细胞仪CantoTM流式细胞分析仪(美国生物科学正欲)使用BD流式细胞仪DivaTM软件。 Fluorescence measurements were carried out using the 488 nm blue laser with FITC filter (530/30 nm) or RPE filter (585/42 nm). Proportions of lymphocytes in PP are expressed in percentage, and those in blood as absolute numbers calculated from total number of CD45 positive leukocytes.

分析了单核细胞和中性粒细胞吞噬活动的帮助Phagotest®(ORPEGEN制药公司、德国),吞噬细胞的代谢活动破裂破裂®(ORPEGEN制药公司、德国)。

刺激指数(SI)的外周血淋巴细胞刺激后PCV-2 lymphoproliferation测量的测试(LPT)。比色免疫测定是用来量化淋巴细胞增殖,基于测量5-bromo - 2的脱氧尿苷(BrdU)结合在DNA合成(细胞增殖酶联免疫试剂盒,BrdU-colorimetric,罗氏诊断,GmbH,德国)。简而言之,悬浮液的白细胞100年μl 2 x 106细胞/在RPMI 1640 10%的胎牛血清(PAA实验室公司)培养72 h和50 PCV-2μl病毒效价104.3 /毫升(应变PCV-2 Stoon 1010;请提供教授戈登·艾伦、农产品和生物科学研究所,贝尔法斯特),没有病毒在96 -微量滴定测试系统在37°C潮湿大气中5%的二氧化碳。有五个复制的治疗。二十四小时在年底前种植,BrdU在最后10μM添加浓度和细胞reincubated 24小时。去除培养基后,变性的DNA和固定细胞的底部井,100μl anti-BrdU-peroxidase贴上共轭反应,允许添加了90分钟25°C。免疫复合物被后续检测底物反应(100μl L底物溶液)在室温下30分钟。反应是停在25μl 1 M硫酸和光学密度(OD)以一个ELISA-multiwell阅读器(美国BIO-RAD实验室,Inc .)在450 nm (OD450)。

细胞的激活率表示为一个刺激指数(SI)的基础上计算吸光度的比值non-stimulated刺激细胞的细胞根据公式:

统计分析

所有分析使用统计程序GraphPad PRISM 3.00版。图基´s和Dunnett´stests(方差分析后,方差分析)是用来确定组之间的差异。

结果

当地的肠道免疫反应

在断奶的日子被发现没有显著差异的比例的观察(CD4淋巴细胞的细胞亚群⁺,CD8⁺,CD3⁺和CD21⁺在第7天)隔绝空肠的PP、断奶后的百分比明显高于t淋巴球(CD3⁺,CD4⁺,CD8⁺)指出在L和FA组相比,LFA集团(图1 - 3)。相比之下,CD21。表征的比例⁺第七天明显高于LFA组相比其他组(图4)。断奶后21天,t淋巴球的百分比为L组最低,而CD21。表征的百分比⁺淋巴细胞在PP是最高的。

总细胞免疫反应

吞噬活性最低的FA集团在整个实验过程中表3)。最高的吞噬活动对照组7日21天断奶后伴有腹泻持续时间更长。同样,高值(p < 0.05)的代谢破裂吞噬细胞的活性被发现在控制在断奶后7日和21天实验组相比(数据没有显示)。SI PCV2的淋巴细胞刺激后测量PCV2-vaccinated猪明显高于实验组在所有与控制相比,但是实验中没有发现显著差异组(图5)。

表3。益生菌乳酸杆菌和亚麻籽对吞噬活动的影响外周血(n = 6)。

血液中类似的比例CD21。表征⁺和CD8⁺发现淋巴细胞与淋巴细胞分离的空肠的集合淋巴结补丁,但是组之间的差异不显著(数据没有显示)。绝对数量的CD21⁺显著影响断奶那天,在数字L组低于对照组(p < 0.01)。CD8的绝对数量最高⁺指出在集团FA断奶那天,当人数明显高于L和LFA组相比,和在断奶后第七天相比,L组。

因为断奶那天没有显著差异记录CD3的绝对数量⁺在血淋巴细胞,在断奶后第七天FA和LFA组有更高的数字相比,L (p < 0.05和p < 0.001),对照组(p < 0.05), 21日绝对数量最高(6.9±2.2×106 /毫升)在足总群,而且数字L和LFA组明显高于控制(p < 0.05 - -0.001)。绝对的CD4细胞数量⁺淋巴细胞与CD3的比例⁺淋巴细胞。CD4, CD8比率在相关性最高的CD4细胞的数量⁺淋巴细胞,意味着在对照组明显高于配给断奶那天(p < 0.01 - -0.001)和21天(p < 0.001),在第七天LFA组(p < 0.05 - -0.001)。

讨论

断奶过程中加强猪生产系统带来许多突然变化在小猪的生活环境和物理因素。这些突如其来的变化,特别是在饮食结合其他压力,会干扰免疫功能和肠道菌群平衡的猪24]。

有一个根深蒂固的信念,饮食欧米明显影响健康,部分是通过调节免疫系统。许多动物的数据研究表明,脂肪酸,具体omega - 3,可以具有抗炎和抗增殖作用,但一些研究证明没有或矛盾的结果(14,16,25]。在我们的实验中我们发现吞噬活动组显著减少,亚麻籽是管理,但淋巴细胞的比例从空肠的PP以及分离血液淋巴细胞各亚群的绝对数量没有减少。现有证据表明,膳食脂肪酸可以通过一个或多个调节免疫反应的分子机制:三大改变膜组成及功能,修改类二十烷酸生产,改变了细胞因子生物合成(16]。membrane-dependent变化功能,比如吞噬作用被以为是一个直接后果引起的改变膜成分和流动性添加PUFA [26]。也抑制一些细胞因子(il - 1、TNF-α和IFN-γ),由n - 3欧PMNL的刺激器,可能会导致降低吞噬活动的27]。减少吞噬活动后亚麻籽的应用在我们的实验是在协议蒂斯等人的结果。28),管理5%的鱼油的饮食富含n - 3欧断奶猪。然而,在一些研究n - 3欧的抑制的影响在猪吞噬活动不是指出[29日- - - - - -31日]。n - 3欧的抑制的效应的扩散和反应性淋巴细胞中描述更多的研究(28,32- - - - - -34)是没有证实在我们的实验中,同样蒂斯等人的结果。28]。相反,我们注意到一定程度的激活的淋巴细胞的数量,特别是CD3⁺和CD8⁺子集。

比例的增加这些子集被观察到在空肠的PP以及外周血亚麻子组的比例最低,伴随着CD21。表征⁺在PP、而不是血液在断奶后7天。与引用的研究中,作者只用油富含n - 3欧,我们使用整个碎亚麻籽,也包含其他生物活性物质,特别是木酚素前体secoisolariciresinol diglycoside(西班牙),和膳食纤维。先生等。35)相比,他们的工作整个脱脂亚麻籽对淋巴细胞增殖的影响。脱脂亚麻籽或低浓度的亚麻籽没有对淋巴细胞增殖的影响,而高亚麻籽饮食饮食(40%)被抑制。因为许多研究表明,补充不同的抗氧化剂显著增加(36 -淋巴细胞增殖38]。Rhee和冲击39猜测也从亚麻籽壳西班牙孤立和抗氧化活性可能具有同样的效果。他们做了测试的西班牙在体外条件下,一些以往的研究相比,并没有明显的西班牙对淋巴细胞增殖的影响。在最近的研究中,增殖的淋巴细胞体外测试亚麻籽组略高于其他组,但差异不显著。从临床的观点来看,更重要的是淋巴细胞的分布和数量不同车厢的生物体,这些参数有显著的影响不仅补充亚麻籽后,还通过添加乳酸杆菌或它们的组合。亚麻籽膳食纤维,尤其是其可溶性部分含有多糖,如前所述,可以积极影响肠道菌群的组成的有益的乳酸杆菌和双歧杆菌。大多数益生菌属于这两个物种和行动的模式之一,益生菌也是他们的免疫调节活动。因为大多数抗原进入人体通过粘膜,粘膜免疫系统的防御反应中扮演着关键角色病原体。肠道微生物群的最大来源是微生物的刺激能引起对健康有害的,有益的影响,因此参与产后免疫系统的发展以及口服耐受和免疫(40]。有益的细菌加入免疫排斥和保护宿主免受病原体的附着力,他们刺激特定抗体的生产,影响淋巴细胞的分布和数量与肠道相关淋巴组织,确保平衡肠道微生物区系的组成,并通过他们的活动可以保持肠道粘膜的完整性(41]。

乳酸杆菌接种组,更高的吞噬活动相比亚麻子组。在猪的组织收到的组合益生菌乳酸杆菌和亚麻仁,吞噬活动外周血高于亚麻子组,但低于L组。这些结果符合许多其他研究[42- - - - - -44]。对动物的不同研究的结果表明,增加吞噬细胞的功能取决于细菌的物种或应变。菌株能够在胃肠道中生存,能够坚持肠道粘膜,能坚持在关键的限制更有效地刺激吞噬细胞(45,46]。作为我们的微生物结果显示,我们的乳酸杆菌菌株具有良好的殖民性质能积极影响不仅激活吞噬作用,而且其总免疫调节作用[13,47]。

从健康的角度来看,关键时刻是断奶后的第一个星期。在此期间我们可以观察最重要的变化在刚断奶的生理和免疫反应的猪。它有一个影响死亡率,这是最高的在这段时间。最重要的变化的比例空肠的PP以及血液中淋巴细胞观察在断奶后7天。添加乳酸杆菌CD3的比例增加⁺和CD4⁺子集在本地肠道级别,而不是血液断奶后7天。在断奶后21天,我们才记录CD3的显著增加⁺在血淋巴细胞。类似于我们的研究,我们管理l .杆菌l .短,还Perdigon et al。48]证明了l .杆菌能够与淋巴集结细胞和CD4呈现出增加的趋势⁺细胞。有趣的结果收到LFA组织相结合,在第七天我们发现CD21。表征的比例最高⁺淋巴细胞在空肠的PP以及血液中。在PP、增加伴随着淋巴细胞(CD3的比例最低⁺,CD4⁺和CD8⁺),但在血T细胞的数量没有减少,相反CD3⁺和CD4⁺在这组最高的子集。不同比例相同的子集在肠道和血液之间的再分配的免疫细胞可以解释肠道相关淋巴组织和血液,基于生物的需要,因为所有化合物的免疫系统,目前的本地,在关系到整个有机体[40]。激活或抑制淋巴细胞不同子集的益生菌的作用也是物种——或者strain-dependent,详细综述了作品Delcenserie et al。40]和Herich Levkut [41]。

结论

总之,目前的研究表明,抑制吞噬细胞的活性造成的亚麻籽被添加乳酸杆菌消除,中度显著激活当地的直觉以及总细胞免疫反应,和改进的效果观察circoviral疫苗后添加益生菌乳酸杆菌和/或亚麻籽断奶猪的饮食。

ACKNOWLEGEMENT

本研究支持的项目的研究和开发操作ERDF资助的项目,由欧盟结构性基金itm 26220220185 (MediPark)。

引用

1. Pluske JR, et al .断奶猪:概念和后果。瓦赫宁根学术出版商,瓦赫宁根》2003。432年。
2. 詹森BB, et al。饲料添加剂的影响肠道微生物生态学的小猪。J动物饲料科学。1998;7:45 - 64。
3. 吉尔,et al .调制的肠道微生物区系由特定饮食组件。活细胞生态健康D增刊。2000;2:31 - 39。
4. Bomba,等。改善益生菌效果的微生物结合麦芽糊精,fructo-oligosacharides和polyunsatured脂肪酸。Br J减轻。2002;88:95 - 99。
5. 杨Y,等。饮食调制的肉鸡肠道微生物区系的:回顾六种替代饲料抗生素的作用。世界幼禽Sci j . 2009;65:97 - 114。
6. 雷伊先生,et al .益生菌:腹泻疾病的预防和治疗新策略。J: Sci杂志2007;3:291 - 299。
7. Sanz Y, et al .肠道微生物群和益生菌在调制内脏相关的上皮细胞和淋巴组织的功能。Int Immunol牧师。2009;28日:397 - 413。
8. 西蒙•O等。一个跨学科研究益生菌在猪身上的作用方式。J动物饲料科学。2010;19日:230 - 243。
9. Corcionivoschi N, et al。益生菌在动物健康的影响。生物科技动物科学》。2010;43:35-41。
10. Pauletti点,等。木酚素从苏合香的叶子ferrugineus(安息香科)和抗菌和抗真菌活性。Phytochem。2000;55岁:597 - 601。
11. Kankaanpaa PE,等。多不饱和脂肪酸对益生菌生长和粘附的影响。《列托人。2001;194:149 - 153。
12. 林格E, et al .膳食脂肪酸的影响乳酸菌与上皮粘膜和从faecalia北极嘉鱼,Salvelinus alpinus (l)。J: Microbiol。1998;85:855 - 864。
13. Nemcova R, et al。补充亚麻籽油的作用相互的乳杆菌Biocenol™LP96和大肠杆菌O8: K88ab: H9无菌仔猪的肠道。Res兽医科学。2012;93:39-41。
14. 黄d .必需脂肪酸和免疫反应,FASEB j . 1989;3:2052 - 2061。
15. 考尔德电脑。n - 3多不饱和脂肪酸、炎症和炎性疾病。是中国减轻。2006;83:1505 - 1519。
16. Fritsche k .脂肪酸作为免疫反应的调节器。为减轻。2006;26:45 - 73。
17. 杨X, et al。饮食鱼油对NFκB基因表达的影响及相关信号在鸡脾脏与脂多糖刺激。J动物饲料科学。2011;20:206 - 223。
18. Korver博士、鱼油等。饮食改变特定的小鸡和炎症免疫反应。J减轻。1997;127:2039 - 2046。
19. 王YW,等。饮食多不饱和脂肪酸比例改变淋巴细胞子集和增殖,血清免疫球蛋白G浓度、小鸡和免疫组织发展。家禽科学。2000;79:1741 - 1748。
20. Kastel R, et al。石油的影响与提升内容的n - 3多不饱和脂肪酸(PUFA)在某些代谢和免疫参数在无菌和传统的小猪。捷克J动画Sci . 2003;48:233 - 238。
21. 王MZ, et al . n-6的影响:n - 3多不饱和脂肪酸比例在扬州鹅血清蛋白和免疫球蛋白。J动物饲料科学。2012;21日:383 - 391。
22. 分离纯化Solano-Aguilar GI, et al。淋巴细胞亚群在新生儿猪内脏相关的淋巴组织。J Immunol方法。2000;241:185 - 99。
23. 卡尔森GP, et al .隔离来自牛外周血的白细胞。Proc Soc实验医学杂志。1973;142:853 - 856。
24. 莫德斯托米,等。一项新策略来选择双歧杆菌菌株和益生元在刚断奶猪的自然生长促进剂。力所能及的科学。2009;122:248 - 258。
25. Svedova M, et al .亚麻籽和鱼油对蛋鸡的代谢和免疫指标。《兽医布尔诺。2008;77:39-44。
26. 派克。相互作用的脂质与免疫功能2:脂质和免疫的实验和临床研究。学生物化学J减轻。1995;5:466 - 478。
27. 考尔德PC, et al .脂肪酸和淋巴细胞的功能。Br J减轻。2002;87:31-48。
28. 蒂斯F, et al .操纵增长类型的脂肪消耗的猪影响等离子体和单核细胞脂肪酸成分和淋巴细胞和吞噬细胞功能。J动画Sci . 1999;77:137 - 147。
29. Kastel R, et al。影响无菌小猪的益生菌的免疫系统强和多不饱和脂肪酸。Berl蒙克Tierarztl Wochenschr。2007;120:221 - 225。
30. Revajova V, et al。影响无菌仔猪的免疫参数管理与ω- 3 PUFA含量增加海豹油。拱Tierernahr。2001;54:315 - 327。
31. 图雷克JJ, et al。饮食多不饱和脂肪酸对免疫细胞的猪肺的影响。J Leuk杂志。1994;56:599 - 604。
32. Fritsche KL, et al。Maternally-supplied鱼油改变小猪免疫细胞脂肪酸概要文件和类二十烷酸生产。脂质。1993;28日:677 - 682。
33. 凯利DS,等。类膳食脂肪对指数的影响的免疫状态的兔子。J减轻。1988;118:1376 - 1384。
34. Yaqoob P, et al .膳食脂质操纵的影响小鼠T-cell-derived细胞因子的生产。细胞因子。1995;7:548 - 553。
35. 先生,等。高亚麻籽饮食对mitogen-induced扩散的影响,生产、- 2细胞子集和脂肪酸组成的脾细胞怀孕和F1代sprague-dawley老鼠。食品化学Toxicol。2003;41:905 - 915。
36. 阿尔瓦拉多C, et al .膳食补充抗氧化剂能提高功能,减少氧化应激过早衰老小鼠的白细胞。营养。2006;22日:767 - 777。
37. 李CY, et al . alfa-tocopherol的免疫调节和抗氧化性能和硒对人体淋巴细胞。跟踪Elem研究》杂志2002;86:123 - 136。
38. 线性调频,等。抗氧化剂作为免疫功能的调节器。Immunol。细胞杂志。2000;78:49-54。
39. Rhee Y, et al .亚麻籽木酚素的影响在体外mitogen-stimulated T细胞增殖,J:杂志2008;32:208 - 215。
40. Delcenserie V, et al,益生菌在肠道免疫调节的影响。咕咕叫问题杂志。2008;10:37-54。
41. Herich R, et al。乳酸细菌,益生菌和免疫系统。兽医地中海捷克。2002;47:169 - 180。
42. Perdigon G, et al .系统性增强小鼠的免疫反应的喂养和干酪乳杆菌和嗜酸乳杆菌发酵的牛奶。Immunolog。1988;63:17-23。
43. Donnet-Hughes, et al .调制乳酸菌:非特异性防御机制的有效剂量。J乳品科学。1999;82:863 - 869。
44. Paubert-Braquet M, et al .增强宿主抵抗鼠伤寒沙门氏菌在老鼠的饮食补充与酸奶或牛奶发酵各种干酪乳杆菌菌株。Int J Immunother。1995;11:153 - 161。
45. Perdigon G, et al .益生菌和免疫状态:r·富勒(编辑)。益生菌,查普曼和大厅,伦敦。1992;146 - 176。
46. Schiffrin EJ, et al。人类血液白细胞的免疫调制乳酸菌:标准菌株的选择。是中国减轻。1997;66:15 - 20。
47. Chytilova M,等。抗炎和亚麻籽油和乳杆菌的免疫调节作用——Biocenol™LP96在无菌的猪被质疑产肠毒素的大肠杆菌。Res兽医科学。2013;95:103 - 109。
48. Perdigon G, et al。研究可能的机制在乳酸菌的粘膜免疫系统激活。J乳品科学。1999;82:1108 - 1114。