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P - ISSN: 2347 - 2286
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水稻生物学国家重点实验室、生物技术研究所、浙江大学、杭州310058年,中国的公关
收到日期:15/09/2015接受日期:25/03/2016发表日期:27/03/2016
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小说两种Eupenicillium从土壤中分离收集在中国进行描述和演示。Eupenicillium polygoniforme特点是多边形边的透镜状子囊孢子赤道山脊,子囊孢子的凸面类似网状网状肋骨和惊人的小刺状的。大肠zhejiangensis特点是独特的深深赤道山脊和网状的透镜状子囊孢子squamiform凸表面的装饰。的系统发育两个新物种和其他物种之间的关系在Eupenicillium属研究基地LSU-ITS结合序列。
新物种;Eupenicillium polygoniforme;Eupenicillium zhejiangensis;系统发育分析
Eupenicilliumf . Ludw经常被认为是作为主要teleomorphic变形属的阶段青霉菌(1]。青霉菌在世界范围内最常见的一种真菌分布对人类生活重要的经济影响,如青霉素生产奶酪食品工业,生产新型酶,用于采收后的食物吗病原体在粮食作物,生产等等一系列真菌毒素(2,3]。有48个物种报道Eupenicillium属(4],许多物种从土壤分离[4- - - - - -8海洋沉积物(等),其他衬底资源9),干牛粪(10),两个物种在玉米和其他谷物和种子,甚至无性孢子的首脑曲霉属真菌(11]。
在调查的过程中土壤的丝状真菌竹林位于中国的东南部,36株Penicillia被孤立。令人惊讶的是,其中,12隔离Penicillia出现在三周内子囊孢子。他们代表至少2新物种在充分与所有描述物种属不同Eupenicillium的基础上形态,rDNA序列(9,10]。
分离菌株从土壤样本
隔离菌株从土壤样本随访Tuthill和Frisvad[描述的方法8]。
观察的文化表征
媒体和文化条件用于确定增长的角色执行根据的方法Visagie et al。2]。菌落颜色与Inter-Society测定委员会(ISCC)和美国国家标准局(国家统计局)颜色名称图表12,13]。
观察显微镜下的形态特征
青霉素的形态特征、子囊和Cleistothecia观察使用尼康eclipse 80我显微镜基于6 10-d-old MEA 25°C上的培养根据Tuthill所使用的方法和Frisvad [10]。
子囊孢子的形态特征由SEM
观察材料是由培养4周的CA媒体。扫描电子显微镜所使用的协议之后Tuthill和Frisvad10]。
DNA提取和rDNA片段测序
基因组DNA提取协议后彼得森和角14]。地区(底漆对ITS1 / ITS4)和路易斯安那州立大学区域(底漆对LR5 / LROR) rDNA通过PCR和测序。PCR引物和协议用于随访所描述的小王,壮族4]。PCR产物纯化使用PCR清洁工具根据制造商的协议(Sangon生物。,CA)。上述引物被用于双向DNA测序DNA分析仪使用应用生物系统3730 XL。
序列比对和系统发育分析
每个基因片段序列获得使用Bioedit手动校对软件(4,15]。额外的序列在属Eupenicliium用于系统发育分析随后Tuthill和Frisvad [10),小王和壮族4]。加入数字序列从NCBI基因库下载的标志图5。一个联合数据集(+ LSU rDNA)被用于吝啬的分析。序列数据集都与Clustal X [16与Bioedit[]和手动调整4,15]。差距被视为在所有序列缺失数据和吝啬分析进行了利用PAUP版本4 b10 [17]。系统发生的树木被推断使用启发式搜索和随机序列100复制和树枝零长度的崩溃。多个吝啬的树木都得救。吝啬的树的分支支持估计进行引导1000复制利用PAUP版本4 b10 [17]。
分类
Eupenicilliumpolygoniforme H-K。小王和fc。林,sp. 11月。(图1和2)
答:闭囊壳;B:子囊;一部:ascospre;F, G:孢子形成结构;分生孢子。酒吧:A、B F-H 10μm;一部:1μm
图1所示。形态学的Eupenicillium polygoniforme
图2。文化的特点Eupenicillium polygoniforme。
词源:“polygoniforme”,指的是子囊孢子与边缘的多边形形状的戒指。
形态描述
Cleistothecia肤浅、球形subglobose,起初avellaneous但是两周内变成深褐色,sclerotioid,直径80 - 150μm,单独或集群,从中心向外边缘3周后到期,自保”,意味着。子囊和子囊孢子产生最丰富。子囊8-spored,梨形的到期但成为subglobose椭圆形,8日至13日×5.5 8μm;子囊孢子透明,透镜状,(3.0 - -4.0)3.5×1.8(1.5 - -2.0)μm,与2不同的赤道山脊多边形边缘。凸结构的子囊孢子表面粗糙,产生网状网状肋骨多边形赤道山脊而引人注目的正方金字塔附近有小刺的在中央凸表面的一部分。
分生孢子的国家仅有的CA和自保”的媒体,但生产是媒体。Penicilli严格monoverticillate;分生孢子变量,要么因淹没从空中菌丝,菌丝或15 - 70×1.5 - -2.0μm,偶尔的顶端扩大到4 - 6μm宽度肿胀的先端;phialides矛尖形的圆柱,(7 -)8 - 10(-11)×1.8 - -2.7μm, 1 - 3 perverticil和宽敞的;分生孢子球形,直径2.4 - -3.0μm smooth-walled。
文化特征
殖民地成长意味着在25°C与快速增长和实现7天之后50-53毫米直径,组成的低表面有绒毛的感觉,绿色白色(ISCC-NBS 153)在中央地区,淡黄绿色(ISCC-NBS 121)周边地区的2 - 3毫米白色边缘。菌核丰富发展的cleistothecia、孢子形成结构大量生产中心区域但稀疏外围;渗出液和可溶性色素缺乏。殖民地反向强烈的橙色黄色(ISCC-NBS 68)。
殖民地种植在自保”25°C 7天后与温和的增长速度和达到47-50毫米直径,完全有沟的,主要由一个薄的感觉与严格有绒毛的表面,在中央地区,深橙色(ISCC-NBS 51)变得苍白的绿色白色(ISCC-NBS 153)白色边缘。菌大量开发cleistothecia, conidial-bearing结构缺失;没有分泌物,可溶性色素。殖民地反向光橄榄褐色(ISCC-NBS 94)深黄色棕色(ISCC-NBS 75)。
殖民地种植在CA 25°C 7天后慢慢实现41-44毫米直径,组成的菌丝体茂密的絮状的表面,白色,表面菌适度殖民地,unbonate中部地区;conidia-bearing结构缺失;渗出液和可溶性色素不存在。殖民地反白灰色(ISCC-NBS 264)。
文化研究:应变ch17类型是孤立的从森林土壤样本收集,宜兴市,江苏,中国(N: 31°34”, E: 119 40°31日”),2014年6月。这一毒株在植物保护系沉积,浙江大学,中国的公关。
Eupenicillium zhejiangensisH-K。小王和fc。林,sp. 11月。(图3和4)
图3。形态学的Eupenicillium zhejiangensis。
图4。文化的特性Eupenicillium zhejiangensis。
词源:“zhejiangensis”描述这一物种的地理位置是孤立的。
形态描述
营养菌丝透明,有隔膜的,直径2 - 4μm。subglobose Cleistothecia沉浸或肤浅的,球状的,起初avellaneous但是两周内变成深褐色,sclerotioid, 100 - 200年μm直径、孤独或集群,成熟意味着从中心向外四个星期。子囊8-spored单独承担,或者,梨形的不成熟但成为subglobose到期椭圆形,8 - 11×7 - 9μm;子囊孢子透明,透镜状,2.8 - -3.5×2 - 2.5μm 2不同深度赤道山脊(山脊超过0.5μm)。子囊孢子的凸表面精细结构的粗糙与网状squamiform装饰。
Penicilli biverticillate,有时monoverticillate,轴承分生孢子的长链(> 50毫米)。分生孢子变量,几乎在末端的分支少见;因水下从空中菌丝,菌丝和有时ascomata引起的。叶柄光滑,100 - 400×2.5 - -3.5μm;metulae当每柄2只,7 - 10×2.5 -4.5μm upterminal肿胀;phialides长条形,collula明显,每个依赖于2 - 6,7 - 3.0 - -4.5μm;分生孢子一般椭球形,光滑的围墙,(2.5 - -4.5)2.7×μm 2.4(1.7 - -2.6),平均宽/长度= 0.91 + 0.05。
文化特征
殖民地成长意味着在25°C与快速增长和实现7天之后40-43毫米直径,组成的低平面有绒毛的表面,淡橙色黄色(ISCC-NBS 73), 2 - 3毫米白色边缘。菌在外围地区温和,但丰富的中心区域附近,孢子形成在殖民地的表面结构大量生产;渗出液和可溶性色素缺乏。殖民地反向淡黄色(ISCC-NBS 89)到淡黄色棕色(ISCC-NBS 76)。
殖民地种植在自保”25°C 7天后与温和的增长速度和达到33节毫米直径,主要由一个薄的感觉与轴承表面颗粒状,浅灰色(ISCC-NBS 264)光绿色灰色(ISCC-NBS 154), 2 - 3毫米白色边缘。菌在外围地区温和,但丰富的中心区域附近,孢子形成结构表面产生适度的殖民地;渗出液和可溶性色素缺席。殖民地反向淡黄绿色(ISCC-NBS 121)黄色白色(ISCC-NBS 92)。
殖民地种植在CA 25°C 7天后慢慢达到18 - 20毫米直径,一个强健的聚合菌丝的径向颗粒(菌)保证金,菌表面温和的殖民地,绿色白色(ISCC-NBS 153);conidia-bearing结构缺失;渗出液和可溶性色素不存在。殖民地反向非常浅绿色(ISCC-NBS 148)。
文化研究:应变类型ch27隔绝在杭州城市森林土壤样本收集,浙江省,中国公关(N: 29°35 18”, E: 119°31 52”), 2013年7月。这一毒株在植物保护系沉积,浙江大学,中国的公关。
根据其和LSU rDNA系统树。额外的粗树枝表示引导的信心值> 50%。
系统发育分析
大肠polygoniforme应变ch17和大肠zhejiangensis菌株ch26 ch27用于系统发育分析。534个基点的其应变ch17, ch26 520 bp和ch27 520基点。应变ch17 895个基点的路易斯安那州立大学,ch26 884 bp和ch27 889基点。加入数量分别为# # # #。吝啬LUS-ITS联合数据集进行分析。54个分类单元包含在其他研究人员使用的数据矩阵包括分类单元(4,10),红紫色作为集团。产生的数据矩阵1235字符,其中包括935字符和94年不同的字符不变,206年parsimonyinformative字符。树长度是1066 (CI = 0.483,国际扶轮= 0.742,嗨= 0.517,RC = 0.358)。系统发生的树非常相似的结果Tuthill和Frisvad10]。种系发生结果表明Eupenicillium polygoniforme(应变ch17)密切相关青霉菌javanicum(图5)支持下,引导价值90;下降monophylogenic群进化枝1:亚属Aspergilloides [3),和支持的引导价值91。大肠zhejiangensis菌株ch26和ch27都聚集在monophylogenic组包含e . crustaceum大肠并,大肠剑兰,e . bovifimosum e . alutaceum大肠baamense(图5)。这种进化枝定义为青霉菌美国标准严格。Houbraken和参孙。进化枝1 b:亚属青霉菌(3100)支持的引导价值。
图5。系统发育分析Eupenicillium polygoniforme和大肠属Eupenicillium zhejiangensis。
属的物种占主导地位Eupenicillium从土壤分离(18]。在目前的研究中,两个属于新物种Eupenicillium被确定。孢子形成的形态类型的大肠zhejiangsis是惊人的相似大肠abidjanum(MycoBank # 330718)5),但从增长率不同,子囊孢子的文化人物和点缀。根据Udagawa和崛江的结果19),大肠zhejiangsis可以容纳的子囊孢子与不同的赤道山脊。子囊孢子的装饰特点大肠zhejiangsis相关子群的子囊孢子网状,但安静不同物种的这一组的大而不规则的山脊。大肠zhejiangsis这些物种也不同菌落形态和序列数据。系统发生的分析显示这个物种密切相关的物种系列甲壳纲动物。(4,18]
Eupenicillium polygoniforme具有独特的赤道山脊的子囊孢子群吗Eupenicillium属(透镜状子囊孢子)19),但不同物种在这个集团的山脊的多边形形状。凸表面的结构类似于子囊孢子的特点肋集团和子囊孢子有小刺的组。系统发生的分析推断,这个物种密切相关的物种e . javanicum但大肠javanicum的模式是球状的子囊孢子没有明显的赤道山脊。他们分开到不同的类群支持引导价值90。系统发生的分析表明,大肠polygoniforme属于青霉菌Aspergilloides节,这是与conidial-bearing类型模式的观察一致。
这个项目是由新疆维吾尔自治区重大科技工程(排名201130102)
