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转基因烟草毛状根中重组抗菌肽Ranalexin的根分泌

摘要

从体外培养的根向水培培养基中分泌功能性重组蛋白提供了一种简化下游纯化程序的有吸引力的技术。研究了经农感染转化的烟草毛状根中抗菌肽ranalexin的产生和分泌。在CaMV 35S启动子的控制下表达了一个his标记的ranalexin，并将其N端与calreticulin的ER信号肽融合，定向进入植物分泌通路。培养20 ~ 25 d后，ranalexin在毛状根组织中的累积量最大，约占可溶性蛋白总量的3.36%。25 d时，ranalexin分泌浓度达到0.28 mg/L。在培养液中添加聚乙烯吡咯烷酮可使细胞外ranalexin水平提高至1.64 mg/L。分泌的ranalexin对革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌有活性，包括对抗生素有多重耐药性的菌株，如耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MRSA、耐万古霉素VRE肠球菌、化脓性链球菌、大肠杆菌、鲍曼不动杆菌以及临床MRSA分离株。我们的研究结果证明了植物组织培养特别是烟草毛状根作为ranalexin和其他抗菌肽的替代生产系统的有用性。

Rasha Abou Aleinein, Holger Schäfer, Michael Wink

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